Protokolümüz, maddelerin nörodavranışsal etkilerini ve zebra balığı larvaları üzerindeki ilgi kirleticilerinin incelenmesi ve bu ajanların potansiyel nörotoksisitesinin ortaya çıkması için açık bir süreç sağlamaktadır. Bu teknik, zebra balığı modelindeki nörodavranışların yüksek iş yapma testi kullanılarak gerçekleştirilebilir. Bu yöntem, biz insanlar üzerinde potansiyel nörotoksisite göstermek için kirleticilerin alel-nörodavranışsal etkilerini değerlendirmek için uygulanabilir, zebra balığı genomu insanlar ile yüksek homolojiye sahip olduğu gibi, bu nedenle kimyasal yönetim ve kirleticilerin neden olduğu halk sağlığı sorunları için endikasyonlar sağlayabilir.
Zebra balığı yüksek iş elde tarama avantajına sahip olduğu için, bu yöntem hem psikotrop ilaçların gelişimi hem de çevresel toksikoloji araştırmaları hakkında bilgi sağlar. İlk deneyi incelemekten korkmayın. Protokolü izlerseniz, başarılı bir sonuç alabilirsiniz.
Bir denemegerçekleştirmeden en az iki saat önce, oda sıcaklığını 28 dereceye ayarlayın ve 48 kuyulu bir mikroplakanın her kuyuya 800 mikrolitre pozlama çözeltisi ekleyin. Daha sonra, bir hareket ve yol açısı deneyi için hazırlık olarak mikroplaka her kuyuya pozlama çözeltisi 200 mikrolitre bir larva aktarmak için değiştirilmiş ucu ile bir mililitrelik pipet kullanın. Sosyal davranış deneyleri için altı kuyulu bir mikroplaka hazırlamak için, altı kuyunun her kuyusu için dört mililitre pozlama çözeltisi ekleyin ve her kuyuya 200 mikrolitre pozlama çözeltisi halinde iki larva aktarın.
Teste başlamadan önce, yüksek iş iş başı izleme yazılımı programını açın ve izleme dönüşleri yol açıları modülünü seçin. 48 kuyulu mikro plakayı kayıt platformuna aktarın ve kapağı aşağı çekin. Yeni bir protokol oluşturmaya başlamak için Dosya ve Protokol Oluştur'u tıklatın ve Konum sayımı konumuna 48 girin.
Parametreler, Protokol Parametreleri ve Zaman'ı tıklatın, Deneme süresini bir saat 10 dakikaya, Tümleştirme süresini ise 60 saniyeye ayarlayın. Eliptik şekil aracını kullanarak, sol üst te bir daire çizin. Daireyi seçin ve Kopyala, Sağ Üstle, Yapıştır ve Seç'i tıklatın.
Kopyalanan daireyi sağ üste doğru sürüklemek için fareyi kullanın ve Kopyala, Sağ ÜstLe İşaretle, Yapıştır ve Yeniden Seç'i tıklatın. Ardından, kopyalanan daireyi sağ alta doğru sürükleyin ve Yapı ve İşaretleri Temizle'yi tıklatın. Sistem otomatik olarak plaka nın her kuyuüzerinde bir daire çizecektir.
Ardından, Ölçek Çiz'i tıklatın ve ekranda bir kalibrasyon çizgisi çizin. Satırın uzunluğunu girin, birimi ayarlayın ve Gruba Uygula'yı tıklatın. Hayvan rengini siyaha ayarlayın ve hayvanların algılanmasına izin vermek için algılama eşiğini 16-18'e ayarlayın, etkin olmayanı saniyede 0,5 santimetreye, küçükten büyüğe saniyede 2,5 santimetreye ayarlayın.
Yol açısı sınıflarını eksi 180'den artı 180'e ayarlayın. Işık koşullarını ayarlamak için Parametreler, Hafif Sürüş, Aşağıdaki 3 tetikleme yönteminden birini ve ışık koşullarını ayarlamak için geliştirilmiş uyaranları tıklatın. Kenar'ı tıklatın ve 10 dakikalık karanlık bir süre ayarlayın ve ardından 10 dakikalık açık ve karanlık periyotlar üç döngü alternatif.
O zaman protokolü kaydet. Tüm parametreler ayarlandığında, test odasındaki Aydınlatmayı kapatın ve larvaların 10 dakika boyunca sistemde alışmasını bekleyin. Alışma döneminin sonunda, Deney ve Yürüt'ü tıklatın ve deney dosyalarının kaydedilen klasörü oluşturun.
Ardından, sonuç adını girin ve Arka Plan ve Başlat'ı tıklatın. Denemenin sonunda, Deney ve Durdur'u tıklatın. Daha sonra sonraki deneyler için 48 kuyulu mikroplakayı ışık kuvöze geri döndürün.
Her grup 16 hayvan içerebildiği için, sistem tek bir 48 kuyulu mikroplakada farklı tedavi koşulları altında hareket ve yol açısının yüksek iş yapma testlerini yapmak için kullanılabilir. Larvaların sosyal aktivitesi altı kuyulu plakalar kullanılarak test edilebilir. Bu temsili deneyde, BDE-47'nin en yüksek konsantrasyon grubu karanlık dönemde belirgin bir hipoaktivite gösterirken, ışık dönemlerinde BDE-47 maruziyetine bağlı herhangi bir değişiklik gözlenmedi.
Ayrıca, 6-hidroksi-BDE-47 yüksek konsantrasyon grubu beş gün sonra döllenme daha az rutin ve ortalama döner yapıldı. Ancak 6-methoxy-BDE47 maruziyet gruplarında daha duyarlı dönüşler yapıldı. Zebra balığının sosyal aktivitesi klorlu parafin-70 ve kısa zincirli klorlu parafin-52b ile uyarılırken, uzun zincirli klorlu parafin-52a larvaların temas süresini kısalttı.
Test için transfer edilen larvaların normal bir yüzme yeteneğine sahip olması ve malformasyon olmaması önemlidir. Diğer değişkenler, renk tercihi gibi, açık-koyu tercih, tüm karanlık, zebra balığı kuyruk hareketleri, çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesi hakkında ek sorulara cevap dahil edilebilir. BDE-47 maruz kalma çözümleri nörotoksik ve endokrin bozulma potansiyeline sahip, bu yüzden cilt ile doğrudan temas önlemek için emin olun.
