Demir Redoks Türlerinin Nicelleştirilmesi İçin Kapiller Elektroforez-Endüktif Birleştirilmiş Plazma Kütle Spektrometresi (CE-ICP-MS) Kurulumu (Fe(II), Fe(III))

Aşırı demir serbest redoks-aktif demir iki artı hücre içinde yıkıcı etkilere neden olabilir sonuçları, oksidatif stres ve ferroptosis olarak bilinen lipid peroksidasyonu ile hücre ölümleri gibi. Demir ve ferrik demirin nicel ölçümleri, bu zararlı süreçlere daha yakından yaklaşmanın anahtarıdır. Bu CE-ICP-Ms tekniği hem hızlı analiz hem de demir-redoks türlerinin ölçülmesi için gerekli olan düşük niceleme limitlerini sağlar.

Düşük kendi kendine aspire hacmi nebülizör seçerek ve ev yapımı arayüzü monte etmek için uygun parçaları hazırlayarak başlayın. Alt üç yönlü luer çubuğunun sol ucunu erkek konektöre ve erkek konektörü üst üç yönlü luer'in orta bağlantısına bağlayarak iki adet üç yönlü dişi luer konektörü bağlayın. Sonra, platin tel üzerinde bir santimetre tüp koymak ve ilk tüp ve bir erkek luer konektörü meme bağlamak için bir santimetre silikon tüp kullanın.

Montajı, vida döndürme ile alt üç yönlü luer konektörün orta bağlantısına sabitle. CE kılcal damar çıkışı üzerinde bir santimetre tüp itin ve sonundan sekiz ila dokuz santimetre konumu, sonra bir silikon tüp ile erkek luer konektörü meme bağlayın. Üst üç yönlü T konektörü çubuğundan tüm montaj koyun ve vida rotasyonu ile erkek luer konektörü ve kadın üç yönlü luer konektörü sol ucunu düzeltmek.

Daha sonra bir erkek luer konektörü meme de 25 santimetre silikon tüp düzeltmek ve alt üç yönlü yem konektörü çubuğun altındaki tüm montaj düzeltmek. Bir santimetrelik silikon tüpü nebülizörün ucuna beş milimetre kadar sıkı bir şekilde itin. Ikinci erkek luer koni koni konektörü tüpün çıkıntılı kısmına takılı iken.

Çıkıntılı CE kılcal damarı ile arayüz kısmını nebülizördeki erkek konisine taşıyın, ardından kılcal damarı erkek konisine ve nebülizör kılcal damarın daha geniş kısmına dikkatlice takın. Gerekirse, sol daki erkek luer'i sökerek, bağlı tüplerle luer'i istenilen konuma getirerek ve yeniden takarak çıkıntılı kılcal damarın uzunluğunu ayarlayın. Üst kadın üç yönlü luer konektörler erkek koni sıkıca uygun olmalıdır.

Kurulum bittiğinde ICP-Ms ile devam edin. Kalibrasyon eğrileri demir üç ve demir iki redoks türü için oluşturulmuştur. Tespit sınırları demir iki litre için litre başına 3.1 mikrogram ve demir üç için litre başına 3.2 mikrogram ve doğrusallık litre başına 150 mikrogram kadar gösterilmiştir.

SH-SY5Y Hücre Lisate analizi biraz daha yüksek iletkenlik nedeniyle demir redoks türleri için biraz daha yavaş göç gösterdi. Ölçülen demir üç ve demir iki konsantrasyonları litre başına 330 mikrogram ve litre başına 84 mikrogram, sırasıyla idi. 0.25 bir demir 2-3 oranı ile sonuçlanan.

Bu protokolün en önemli adımı, çıkıntılı CE kılcal damarının monte edilmiş arayüz üzerinden dikkatli bir şekilde yerleştirilmesi ve nebülizör kılcal damarla ilgili uygun konumlandırmasıdır. Burada sunulan yöntemler demire bağımlı moleküler süreçler emzitlerini derinleştirmek için umut verici bir araç haline gelebilir. Demir iki artı, demir üç artı nicelik lendirme nörodejeneratif ve kanser hastalıkları bağlamında demir aracılı ölümcül hasar riski doku tespit etmek için potansiyel bir biyomarker olarak hizmet verebilir eğer dikkatlice tasarlanmış çalışmalar gereklidir.