Configuration de la spectrométrie de masse plasmatique capillaire couplée à l’électrophorèse (CE-ICP-MS) pour la quantification des espèces de redox de fer (Fe(II), Fe(III))

Le fer excessif a comme conséquence le fer redox-actif libre deux-plus qui peut causer des effets dévastateurs dans la cellule, tels que le stress oxydant et les décès cellulaires par peroxydation de lipide connue sous le nom de ferroptose. Les mesures quantitatives du fer ferreux et du fer ferrique sont la clé d’un aperçu plus étroit de ces processus nuisibles. Cette technique CE-ICP-Ms fournit à la fois : une analyse rapide et de faibles limites de quantification, qui sont toutes deux nécessaires à la quantification des espèces de redox de fer.

Commencez par choisir un nébuliseur avec un faible volume d’auto-aspiration et de préparer les pièces appropriées pour monter l’interface maison. Connectez deux connecteurs luer femelles à trois voies avec un connecteur cone luer mâle en connectant l’extrémité gauche de la barre luer à trois voies inférieure au connecteur masculin et au connecteur masculin à la connexion moyenne du luer à trois voies supérieur. Ensuite, placez un tube d’un centimètre sur le fil de platine et utilisez un tube en silicone d’un centimètre pour connecter le premier tube et la buse d’un connecteur luer mâle.

Fixez l’assemblage à la connexion moyenne du connecteur luer à trois sens inférieur par rotation de vis. Poussez un tube d’un centimètre au-dessus de la sortie du capillaire CE et placez-le à huit à neuf centimètres de l’extrémité, puis connectez-le à la buse du connecteur luer mâle avec un tube en silicone. Placez l’ensemble de l’assemblage à travers la barre du connecteur t à trois voies supérieur et fixez le connecteur luer mâle et l’extrémité gauche du connecteur luer à trois voies femelle par rotation de vis.

Fixez ensuite le tube en silicone de 25 centimètres à la buse d’un connecteur luer mâle et fixez tout l’assemblage au bas de la barre à partir du connecteur de leurre à trois sens inférieur. Poussez fermement le tube de silicone d’un centimètre, cinq millimètres au-dessus de l’extrémité du nébuliseur. Tandis que le deuxième connecteur mâle de cône de luer est branché dans la partie saillante du tube.

Déplacez la partie d’interface avec le capillaire CE saillant vers le cône mâle au nébuliseur, puis insérez soigneusement le capillaire à travers le cône mâle et la partie plus large du capillaire nébuliseur. Si nécessaire, ajustez la longueur du capillaire saillant en dévissant le luer mâle gauche, en déplaçant le luer avec des tubes attachés dans la position requise et en le réinstallant. Les connecteurs luer à trois voies femelles supérieures devraient s’adapter étroitement au cône mâle.

Une fois terminé avec la configuration procéder avec ICP-Ms. Des courbes d’étalonnage ont été créées pour le fer trois et le fer deux espèces de redox. Les limites de détection étaient de 3,1 microgrammes par litre pour le fer deux et 3,2 microgrammes par litre pour le fer trois et la linéarité a été démontrée jusqu’à 150 microgrammes par litre.

L’analyse du lysate cellulaire SH-SY5Y a montré une migration légèrement plus lente pour les espèces de redox de fer en raison de la conductivité un peu plus élevée. Les concentrations mesurées de fer trois et de fer deux étaient de 330 microgrammes par litre et de 84 microgrammes par litre, respectivement. Résultant en un rapport fer deux à trois de 0,25.

L’étape la plus importante de ce protocole est l’insertion soigneuse du capillaire CE saillant à travers l’interface montée et son positionnement approprié lié au capillaire nébuliseur. Les méthodes présentées ici peuvent devenir un outil prometteur pour approfondir la perspicacité dans les processus moléculaires dépendants du fer. Des études soigneusement conçues sont nécessaires pour valider si la quantification du fer deux fois plus et trois de fer peut servir de biomarqueur potentiel pour identifier les tissus à risque de dommages mortels médiés par le fer dans le contexte des maladies neurodégénératives et cancéreuses.