Configuración de Espectrometría de Masas De Plasma Acoplada Inductivamente Electroforesistiva (CE-ICP-MS) para Cuantificación de Especies redox de Hierro (Fe(II), Fe(III))

El hierro excesivo da como resultado hierro rojoox-activo libre dos-plus que puede causar efectos devastadores dentro de la célula, como estrés oxidativo y muertes celulares por peroxidación lipídica conocida como ferroptosis. Las mediciones cuantitativas de hierro ferroso y férrico son la clave para una visión más detallada de estos procesos perjudiciales. Esta técnica CE-ICP-Ms proporciona tanto:análisis rápido y límites de cuantificación bajos, que son necesarios para cuantificar especies de hierro-redox.

Comience seleccionando un nebulizador con un bajo volumen de aspiración y preparando las piezas adecuadas para montar la interfaz casera. Conecte dos conectores luer hembra de tres vías con un conector de luer de cono macho conectando el extremo izquierdo de la barra de luer de tres vías inferior al conector macho y el conector macho a la conexión media del luer de tres vías superior. A continuación, coloque un tubo de un centímetro sobre el alambre de platino y utilice un tubo de silicona de un centímetro para conectar el primer tubo y la boquilla de un conector luer macho.

Fije el ensamblaje a la conexión central del conector luer de tres vías inferior mediante la rotación del tornillo. Empuje un tubo de un centímetro sobre la salida del capilar CE y colóquelo en ocho a nueve centímetros desde el extremo, luego conéctelo a la boquilla del conector macho con un tubo de silicona. Coloque todo el conjunto a través de la barra del conector T de tres vías superior y fije el conector de luer macho y el extremo izquierdo del conector luer de tres vías hembra mediante rotación de tornillo.

A continuación, fije el tubo de silicona de 25 centímetros en la boquilla de un conector de luer macho y fije todo el conjunto en la parte inferior de la barra desde el conector de señuelo de tres vías inferior. Empuje firmemente el tubo de silicona de un centímetro, cinco milímetros sobre el extremo del nebulizador. Mientras que el segundo conector de cono luer macho está conectado a la parte saliente del tubo.

Mueva la parte de la interfaz con el capilar CE saliente al cono macho en el nebulizador, luego inserte cuidadosamente el capilar a través del cono masculino y la parte más ancha del capilar del nebulizador. Si es necesario, ajuste la longitud del capilar saliente desenroscando el luer macho izquierdo, moviendo el luer con los tubos conectados en la posición requerida y reinstalándolo. Los conectores luer hembra superiores deben ajustarse firmemente al cono macho.

Cuando termine con la configuración proceda con el ICP-Ms. Se crearon curvas de calibración para el hierro tres y hierro dos especies de redox. Los límites de detección fueron de 3,1 microgramos por litro para el hierro dos y 3,2 microgramos por litro para el hierro tres y se demostró linealidad de hasta 150 microgramos por litro.

El análisis del lysato celular SH-SY5Y mostró una migración ligeramente más lenta para las especies de redox de hierro debido a la conductividad algo mayor. Las concentraciones medidas de hierro tres y hierro dos fueron 330 microgramos por litro y 84 microgramos por litro, respectivamente. Resultando en una relación de hierro de dos a tres de 0.25.

El paso más importante de este protocolo es la cuidadosa inserción del capilar CE saliente a través de la interfaz montada y su posicionamiento adecuado relacionado con el capilar del nebulizador. Los métodos aquí presentados pueden convertirse en una herramienta prometedora para profundizar la visión de los procesos moleculares dependientes del hierro. Se necesitan estudios cuidadosamente diseñados para validar si la cuantificación de hierro de dos más y tres plus puede servir como un biomarcador potencial para identificar el tejido en riesgo de daño letal mediado por hierro en el contexto de enfermedades neurodegenerativas y cancerosas.