İntrarakeal aşılama, Chilman etkinliğini değerlendirmek için kök hücre ve ilaçların yenidoğan akciğerine salınan klinik bir biyotekniktir. Bu teknik, yenidoğan sıçanda çeşitli primer uygulamalarla kullanım için iyi niyetli olabilir ve pulmoner hastalık tedavisi için göreceli olarak kolay ve uygun maliyetli bir önlemdir. Doğum sonrası beşinci günde, anestezili Sprague-Dawley fare yavrularını 60 derece lik entübasyon standında dizginle.
Ve her yavrunun dört uzvuna laboratuvar etiketleme bandı yapıştırArak onları yerinde sabitleyin. Kafaları düzeltmek için her burnun altına bant uygulayın. Ve trakeotomi için ilk boynun yerini sapta.
Kesi bölgesini dezenfekte etmek için %75 alkol hazırlık pedi kullanın. Ve karotis arterlere zarar vermemek için trakeanın üzerinde dikey 3 santimetrelik bir orta hat kesisi yapın. Trakea bulmak için yağ ve kas tabakalarını ayrıştırmak için bir kanca olmadan kavisli konik cımbız kullanın.
Trakea gözlemlenebildiği zaman, trakeayı kavramak için cımbızkullanın ve inspiratuar faz sırasında, nefes borusuna 30 mikrolitre tuzluluk içeren beşinci ateş böceği luciferase GFP'nin on katı enjekte etmek için 30 kalibrelik bir iğneyle donatılmış 100 mikrolitrelik bir şırınga kullanın. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, kesiyi mümkün olduğunca sıkı bir şekilde düğümleyen 160 ipek dikişle kapatın. Ve dikişin uçlarını mümkün olduğunca kısa kestiriyor.
Daha sonra yavrunun anesteziden kurtulmasına izin verin, sıcak olana kadar sıcak bir noktada, pembe ve hayvanı kafesine geri döndürmeden önce spontan hareket edebilene kadar izleyin. Fareler ameliyattan 15 dakika sonra nakledilen insan mezenkimal stromal hücrelerini takip etmek için, intraperitoneally PBS Luciferian potasyum tuzu kilogram başına 125 miligram ile yeniden anestezi yavru enjekte. Enjeksiyondan 10 dakika sonra, orta binning, 1 f-stop ve 26 santimetre görüş alanı ile 5-15 saniye aralıklarla sıralı görüntüler elde etmek için küçük bir hayvan görüntüleme sistemi kullanın.
Daha sonra otomatik ilgi bölgelerine göre akciğerlerden gelen parlaklık aktivitesini ölçmek için görüntüleme yazılımını kullanın. İnsan mezenkimal kök hücreleri etiketli luciferase firefly'da yüksek düzeyde GFP ekspresyonu gözlenir. Mezenkimal kök hücreler daha fazla hücre yüzey marker ekspresyonu ve osteositler, kondrositler ve adipositler içine ayırt yeteneği ile karakterize edilebilir.
VIVO'da nakledilen insan mezenkimal hücrelerinin Lüminesans görüntülemesi, normal salin ile tedavi edilen sıçanların akciğer bölgelerinde Parlak sinyal eksikliğini ortaya koymaktadır. Mezenkimal kök hücre ile tedavi sıçanlarda, bu hayvanların trakea ve merkezi akciğer bölgelerinde parlaklık gözlenir. Nitekim, bu temsili analizde, parlaklık yoğunluğunun nicelleştirilmesi, mezenkimal kök hücre ile tedavi edilen sıçanların normal tuzlu ile tedavi edilen sıçanlara göre parlaklık aktivitesinde yaklaşık 13 kat artış sergilediğini ortaya koymuştur.
Bu prosedürü çalışırken, çevreleyen arterleri sınırlamadan trakea incelemek ve izole etmek önemlidir. Bu teknik, insan hasta modu ile ışınları kullanarak hücre ve neonatal Palmer hastalığı ilaçların intratrakeal uygulama etkilerinin incelenmesine olanak sağlar.
