장내 주입은 Chilman의 효능을 평가하기 위해 줄기 세포와 약물을 신생아 폐에 전달하기위한 임상 생체 기술입니다. 이 기술은 신생아 쥐에서 다양한 1 차 적인 응용 프로그램과 함께 사용하기위한 선의일 수 있으며 폐 질환 치료를위한 상대적이고 비용 효율적인 측정입니다. 산후 5일째, 마취된 스프라그-Dawley 쥐 새끼를 60도 각도의 삽관 스탠드에 제지합니다.
그리고 실험실 라벨 링 테이프를 각 강아지의 네 개의 사지모두에 부착하여 제자리에 고정합니다. 각 코 아래에 테이프를 바르면 머리를 고정합니다. 그리고 천자 기관 절제술에 대한 첫 번째 목을 정확히 찾아.
75%의 알코올 준비 패드를 사용하여 절개 부위를 소독합니다. 그리고 경동맥을 손상시키지 않도록 기관 위의 수직 3센티미터 중간선 절개를 합니다. 후크없이 곡선 테이퍼 핀셋을 사용하여 지방과 근육 층을 분리하여 기관지 위치를 찾으십니다.
기관체를 관찰할 수 있을 때, 핀셋을 사용하여 기관지를 파악하고 30 게이지 바늘을 장착한 100 마이크로리터 주사기를 사용하여 제5 반딧불 루시파라기 GFP의 10배를 기관지상에 식염수 기질 세포 30마이크로리터에 주입한다. 모든 세포가 주입되면 매듭을 가능한 한 단단히 묶는 160 실크 스티치로 절개를 닫습니다. 그리고 봉합사의 끝을 가능한 한 짧게 절단합니다.
그런 다음 새끼가 마취에서 회복하여 동물을 케이지로 되돌리기 전에 따뜻하고 분홍색이며 자발적인 움직임이 가능할 때까지 모니터링할 수 있는 따뜻한 장소에서 회복할 수 있습니다. 쥐가 수술에서 회복된 후 15분 후에 이식된 인간 중간엽 기질 세포를 추적하기 위해 PBS에서 루시페리아 칼륨 소금 1kg당 125밀리그램으로 재 마취 새끼를 재마취한 새끼를 주사합니다. 주입 후 10분 후, 작은 동물 이미징 시스템을 사용하여 5-15초 간격으로 중간 비닝, 1f-stop 및 26센티미터 시야필드로 순차적인 이미지를 수집합니다.
그런 다음 이미징 소프트웨어를 사용하여 관심의 자동 영역에 기초하여 폐에서 발광 활성을 정량화합니다. GFP 발현의 높은 수준은 인간 중간엽 줄기 세포로 표지된 루시파 반딧불이에서 관찰된다. 중간엽 줄기 세포는 그들의 세포 표면 마커 발현 및 골세포, 연골 세포 및 백혈구로 분화하는 그들의 능력에 의해 추가적인 특징이 될 수 있다.
VIVO에서 이식된 인간 중간엽 세포의 발광 화상 진찰은 정상 식염수로 취급된 쥐의 폐 지구에 있는 발광 신호의 부재를 제시합니다. 중간 엽 줄기 세포로 치료 된 쥐에서 발광은 그 동물의 기관 및 중앙 폐 영역 내에서 관찰됩니다. 실제로, 이러한 대표적인 분석에서 발광 강도의 정량화는 중간엽 줄기 세포로 치료된 쥐가 정상 식염수로 치료된 쥐에 비해 발광 활성이 약 13배 증가한 것으로 나타났다.
이 절차를 시도할 때 주변 동맥을 제한하지 않고 기관을 해부하고 격리하는 것이 중요합니다. 이 기술은 인간 환자의 모드와 광선을 사용하여 세포 및 신생아 Palmer 질병의 내추기 의 효력의 연구 결과 할 수 있습니다.
