気管内点眼は、チルマンの有効性を評価するために、幹細胞や薬剤を新生児肺に送達するための臨床バイオ技術です。この技術は、新生児ラットにおける様々な一次適用で使用するためのボナフィデスであり、肺疾患治療のための相対的に容易かつ費用対効果の高い尺度である。出生後5日目に、麻酔付きスプレイグ・ドーリーラットの子犬を60度斜めの挿管スタンドで拘束する。
そして、各子犬の4つの手足すべてに実験室のラベリングテープを貼り付けて、それらを所定の位置に固定します。各鼻の下にテープを貼って頭を固定します。そして、穿刺気管切開のための最初の首を特定します。
75%アルコール準備パッドを使用して、切開部を消毒してください。そして、頸動脈を損傷しないように、気管の上に垂直3センチメートルの正中線切開を行います。フックなしで湾曲したテーパードピンセットを使用して、脂肪と筋肉の層を解離して気管を見つけます。
気管が観察されるとき、ピンセットを使用して気管をつかみ、30ゲージ針を備えた100マイクロリットルの注射器を使用して、5番目のホタルルシメラーゼGFP標識した食塩水の30マイクロリットルの間葉間質細胞の10倍を気管に注入する。すべての細胞が注入されたら、160シルクステッチで切開を閉じて、結び目をできるだけしっかりと結びます。そして、縫合糸の端をできるだけ短く切断する。
その後、子犬が麻酔から回復することを可能にし、暖かく、ピンク色で、動物をケージに戻す前に自発的な動きが可能になるまで、監視と暖かい場所で。ラットが手術から回復した15分後に移植されたヒト間葉間質細胞を追跡するために、腹腔内に再麻酔下の子犬をPBSで1キログラム当たり125ミリグラムで注入する。注射の10分後、小さな動物イメージングシステムを使用して、ミディアムビニング、1 Fストップ、および26センチメートルの視野を有する5〜15秒間隔でシーケンシャル画像を取得する。
次に、画像化ソフトウェアを使用して、対象の自動領域に基づいて肺からの発光活性を定量化します。ヒト間葉系幹細胞に標識されたルシファーゼホタルには高レベルのGFP発現が認められる。間葉系幹細胞は、細胞表面マーカー発現と、骨細胞、軟骨細胞、および葉細胞に分化する能力によってさらに特徴づけることができる。
VIVOで移植されたヒト間葉細胞の発光画像は、正常な生理学的生理学的に処理されたラットの肺領域における発光シグナル伝達の欠如を明らかにする。間葉系幹細胞で処理されたラットでは、それらの動物の気管および中央肺領域内で発光が観察される。実際、この代表的な分析では、間葉系幹細胞で処理されたラットが、正常生理食症で処理されたラットと比較して約13倍の発光活性の増加を示すことが明らかになった。
この手順を試みる場合、周囲の動脈を制限することなく、気管を解剖し、隔離することが重要です。この技術は、ヒト患者のモードを用いた光線を用いて、新生児パーマー病の細胞および薬物の気管内投与の効果の研究を可能にする。
