Silikon pencerelerin dökümü ve yerleştirilmesi için yapılan bu prosedür, uzunlamasına intravital görüntülemenin önündeki teknik engelleri azaltır. Protokolümüz, hayvanlar tarafından iyi tolere edilen sağlam, kolayca uyarlanabilir pencereler üretir. Bu tekniği kullanarak, karaciğer, pankreas ve meme bezindeki kanser ve bağışıklık hücrelerini görüntüledik.
Minimum ayarlamalarla, birçok anatomik konuma ve biyolojik soruya uyarlanabilir. Bu tekniği ilk kez deneyenler için, şırıngadan az miktarda yapıştırıcı salınımı yapın. Çok fazla yapıştırıcı uygulamak görüntüleme alanını bulanıklaştıracak ve cerrahi alanın çalışmasını zorlaştıracaktır.
Yeni hazırlanmış silikon polimer olan PDMS'nin az miktarda polidimetilsiloksanını temiz ve pürüzsüz bir yüzeye bırakarak silikon pencereyi dökmeye başlayın ve istenen kalınlığı elde etmek için hacim-alan oranını ayarlayın. PDMS istenen döküm yüzeyinde biriktirildikten sonra, aynı doku bölgelerinin tekrar tekrar görüntülenmesi için işaretler sağlamak üzere silikonun içine paslanmaz çelik bir ızgaraya hafifçe bastırın. Hava kabarcıklarını çıkarmak ve silikon polimerin gazını gidermek için, kaplanmış yüzeyi 45 dakika boyunca vakumlu bir kurutucuya yerleştirin.
Tamamlandığında, polimeri 45 dakika boyunca 75 ila 80 santigrat derecede bir fırında kürleyin. Polimeri kalıbın kenarlarında puanlayın ve kürlenmiş pencereleri döküm için kullanılan yüzeyden nazikçe soymak için forseps kullanın. Fareyi sol lateral decubitus pozisyonuna getirin.
Anestezi uygulanan fareyi, tıraş edilen cerrahi bölgeye hacimce %10 hacim povidon iyot çözeltisi ve hacimce %70 hacim etanol art arda üç kez uygulayarak ameliyat için hazırlayın. Steril bir cerrahi alanın korunmasına özen gösterilmelidir. Daha sonra, kostal kemerin üç milimetre altında sağ kanatta 10 milimetrelik bir kesi yapmak için steril makas ve forseps kullanın.
Cildin bir santimetrekarelik bir bölümünü çıkarın ve periton bölümünün cilt bölümünden biraz daha küçük bir bölümünü çıkarmak için ikinci bir çift steril makas ve forseps kullanın. Steril bir kuyucuk plakası üzerine az miktarda cerrahi yapıştırıcı koyun ve görüntülenecek alanın kenarları etrafındaki karaciğer yüzeyine uygulamak için 31 gauge şırınga ile çekin, ardından pencereyi istenen alana yerleştirin ve yapıştırıcı kuruyana kadar yaklaşık iki dakika boyunca karaciğere sıkıca tutun. Pencerenin kenarlarını periton altına katladıktan sonra, şimdi periton altında bulunan pencerenin kenarlarına az miktarda cerrahi yapıştırıcı biriktirin, pencereye sabitlemek için forseps ile periton üzerine bastırın.
Benzer şekilde, cildi aşağı itmeden önce az miktarda cerrahi yapıştırıcı biriktirerek periton kapatın, ardından cildin pencerenin üzerinde tekrar büyümesini önleyecek bir jant oluşturmak için pencerenin kenarlarına yapıştırıcı uygulayın. Pencereyi pankreasa yerleştirmek için, fareyi sağ lateral dekübit pozisyonuna yerleştirin ve daha önce gösterildiği gibi peritonun, bir bölümünü çıkarmadan önce sol kanatta kesi yapın. Steril salin ile ıslatılmış steril pamuklu çubuklar kullanarak, pankreası görselleştirmek için dalağı yavaşça çekti.
Kesi boyunca daha fazla yüzey alanı görünür hale getirmek için pankreası nemlendirilmiş pamuklu çubuklarla yeniden konumlandırın. Pankreasa erişildikten sonra, görüntüleme penceresini daha önce açıklandığı gibi istenen alana yerleştirin ve kapatın. Meme bezine erişmek için, fareyi sırtüstü pozisyona yerleştirin ve steril makas ve forseps kullanarak kasık meme uçlarından birine medial 10 milimetrelik bir kesi yapın.
Cildin meme bezinin üzerindeki 0,5 santimetrekarelik bir bölümünü çıkarın, ardından yapışmayı bozmak için steril makası iki yüzey arasına yayarak meme bezini ciltten yavaşça ayırın. Görüntülenecek alanın kenarları etrafındaki meme bezinin yüzeyine az miktarda cerrahi yapıştırıcı uygulamak için 31 gauge şırınga kullanın. Yapıştırıcı kuruyana kadar pencereyi meme bezine sıkıca yerleştirin ve tutun.
Pencerenin kenarlarını cildin altına katladıktan sonra, şimdi cildin altında bulunan pencerenin kenarlarına az miktarda cerrahi yapıştırıcı koyun ve cildi pencereye sabitlemek için forseps ile cildin üzerine bastırın. Cildin pencerenin üzerinde tekrar büyümesini önleyecek bir jant oluşturmak için yapıştırıcıyı pencerenin kenarlarına uygulayın. Görüntüleme seansına başlamadan önce, pencereyi% 70 etanol içine batırılmış bir pamuklu çubukla nazikçe silerek artık döküntülerden temizleyin.
Bir suya daldırma lensi kullanırken, ultrason jelini kabarcıklardan kaçınarak pencereye uygulayın. Görüntülemeyi başlatmak için, ızgarayı oküler boyunca odakta bulun ve yerleştirin. Ardından, ızgaranın alt kısmını sıfıra ayarlayarak yaklaşık doku görüntüleme derinliğini belirleyin.
Bilgiler, sonraki görüntüleme oturumlarında ilgili Z-düzleminin bulunmasına yardımcı olacaktır. Birden fazla görüntüleme oturumunda aynı konumu tanımlamak için, ızgaradaki kareleri referans noktası olarak kullanın. Görüntüleme oturumu sırasında, ızgara yönünü ve ızgara içinde görüntülenen her görüş alanının konumunu not edin.
Izgara, görüntüleme oturumlarının başarısında belirli ızgara alanlarına ve görüntüleme alanlarına geri dönmek için kullanılabilir. Her görüntüleme seansını takiben, pencereyi %70 etanol içine batırılmış bir pamuklu çubukla nazikçe silerek artık lens daldırma ortamını ve kalıntılarını temizleyin. Silikon pencere, zaman içinde dinamik bağışıklık hücresi infiltrasyonunu yakalamaya izin verir.
Temsili analiz, iki ve dördüncü günlerde yeniden şekillenen meme bezi dokusundaki nötrofil infiltrasyonunu göstermektedir. Silikon pencere, tümörlerin pencere yerleştirildikten sonraki haftalar boyunca birden fazla zaman noktasında görselleştirilmesini sağlar. 200 miligram PDMS ile dökülen pencereler, 150 miligramlık pencerelerden önemli ölçüde daha fazla tokluk sergiledikleri için cerrahi implantasyon için genellikle daha iyidir.
Not olarak, PDMS pencereleri standart cam kadar sert değildi, Young'ın cam pencerelerin PDMS'den önemli ölçüde daha büyük olduğu modülü ile temsil edildi. Farklı organlara pencere yerleştirme, çoğu fare zamanla kilo almaya devam ettiği için iyi tolere edildi. Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, pencereyi yapıştırıcı kullanarak tamamen kapatmaktır.
Bu, enfeksiyonu, dokunun kurumasını ve pencerenin yer değiştirmesini önler. Prosedürü takiben, silikon penceresinden ortotopik enjeksiyonlar yapılabilir ve araştırmacıların hücre proliferasyonu, hücre-hücre etkileşimleri ve terapötik etkinlik gibi çok çeşitli konuları incelemelerine olanak tanır.
