Daha önce, sadece pasif ısı çarpması modelleri iyi kurulmuştur. Bu eforlü sıcak çarpması modeli büyük sınırlamalardan arındırılmıştır ve insan patofizyolojisini daha yakından taklit eder. hayatı tehdit eden bir durum olduğu için insanlarda sıcak çarpmasını etkili bir şekilde incelemek mümkün değildir.
Bu preklinik model, insan eforel sıcak çarpmasının klinik özelliklerini korur. Bu teknik, soğutma hızının eforlu sıcak çarpmasından geri kazanım üzerindeki etkilerini, ilaç yutulmasından kaynaklanan komorbiditeleri ve sıcak çarpması maruziyetinin uzun vadeli sonuçlarını test etmeye yardımcı olur. Prosedürü gösteren jamal Alzahrani, Dr. Clanton'ın laboratuvarından son sınıf doktora öğrencisi.
Fareyi uyuşturdıktan sonra, hayvanın gözlerini ameliyat sırasında hasar veya yaralanmadan korumak için Veteriner Merhem gibi göz yağlama kullanın. Cerrahi bölgeyi hazırlamak için, alt karnı küçük hayvan saç makası veya piyasada bulunan bir saç çıkarıcı ile tıraş edin. Kilogram buprenorfin başına 0.1 miligram deri altı ilk dozunu uygulamak.
Bölgeyi üç yıkama povidone-iyot veya Klorheksidin ile yıkayın, ardından% 70 izopropil alkol durulayın, ardından fareyi cerrahi bölgeye aktarın, cerrahi bölgeyi fare üzerinde izole etmek için yapışkan bir örtü kullanın. Aseptik teknikte steril aletler kullanarak, linea alba boyunca orta hatta costal marjdan yaklaşık 0,5 santimetrelik bir kesi yapın, ardından cildi kas tabakasından ayırın ve linea alba üzerinde bağırsaklara veya iç organlara zarar vermemeye dikkat dürerek biraz daha küçük bir kesi yapın. Kas tabakası açıldıktan sonra steril telemetreyi kaudal arterlerin ve damarların önündeki intraperitoneal boşluğa yerleştirin ve serbestçe yüzmesini sağlamak için sindirim organlarına sırt yerleştirin.
Steril 5-O emilebilir bir dikiş ile karın açıklığı kapatın ve 5-O proline dikiş ile basit bir kesilmiş dikiş kullanarak cildi kapatın. Fareyi kafesinin altındaki bir sokulma mikrodalga ısıtma yastığı ile temiz kafesine yerleştirin. Anesteziden iyileşmenin ilk saatinde fareyi her 15 dakikada bir izleyin ve ardından hayvan barınma tesisine geri dönün.
Eforlü sıcak çarpması protokolünden bir gece önce, fareyi odaya alışmak için oda sıcaklığında çevre odasına yerleştirin. Sürekli çekirdek sıcaklığını veya bir gecede ortalama 30 saniyelik aralıklarla TC toplamak için veri toplama sistemini kullanın. Eforlu sıcak çarpması protokolü sabahında, farenin ateşi olmadığından veya bu süre zarfında aşırı stres yaşamadığından emin olmak için oda sıcaklığını artırmadan önce farenin normal 36 ila 37,5 santigrat derecelik diurnal sıcaklık aralığında veya altında olduğundan emin olun.
Fare stabil ve normal dinlenme çekirdeği sıcaklığı aralığında olduğunda, yiyecek ve suyu çıkarın ve hayvanı tartın. Oda kapısını kapatın ve oda sıcaklığını 37,5 santigrat derece ve% 40 ila% 50 bağıl nem veya istenen çevresel sıcaklık ve nem hedefine yükseltin. Oda sıcaklığını ve nemini kalibre edilmiş bir sıcaklık ve nem monitörü ile doğrulayın.
Protokol sırasında ışığı ve rahatsızlıkları minimumda tutmak için odayı karartma perdesi ile çevreleyin. Uzaktan IR aydınlatmalı kameralar aracılığıyla fareyi protokol sırasında sürekli izleyin. İkinci kamerayı koşu tekerleğine yakın yerleştirilmiş sıcaklık ve nem monitörüne odaklayın.
Hayvanın yakınında doğru sıcaklık okumaları sağlamak için çevre odası ayar noktası için kontrol ünitesinde ayarlamalar yapın. Oda, sıcaklık monitöründeki ikinci kamera tarafından ölçülen hedef sıcaklığına ulaştığında, odanın kapısını hızla açın ve fareyi zorla çalışan tekerleğe yerleştirin. Zorla çalışan tekerlek protokolünü dakikada 2,5 metre hızla başlatın ve fare 41 santigrat derecelik bir çekirdek sıcaklığına ulaşana kadar hızı her 10 dakikada bir dakikada 0,3 metre artırın.
Çekirdek sıcaklığı elde edildikten sonra, belirgin bir bilinç kaybı, geriye doğru düşme veya bayılma ve tekerleğe tutunmaya devam edememe ile karakterize edilen semptom sınırlaması gerçekleşene kadar hızın sabit kalmasına izin verin. Farenin tekerlekte fiziksel bir tepki belirtisi olmadan üç geri dönüş olduğunda zaman noktasını onaylayın. Alternatif olarak, protokolün ne zaman durdurulacasını belirlemek için yerel IACUC kurallarını izleyerek insancıl uç noktayı tanımlayın.
Bu uç nokta, esasen tüm farelerde semptom sınırlamanın biraz üzerindedir. Hızlı soğutma protokolünü gerçekleştirmek için, fare semptom sınırlamasına ulaştığında tekerleği durdurun ve fareyi zorunlu koşu tekerleğinden hemen çıkarın. Fareyi tartın ve oda sıcaklığında iyileşmek için ev kafesine geri yerleştirin.
Bu süre zarfında, odanın kapısını açık bırakın ve haznenin hızla soğumasını sağlamak için inkübatör setini oda sıcaklığına döndürün, bu da% 99'dan fazla uzun süreli hayatta kalma ile sonuçlanır. Daha şiddetli bir eforlü sıcak çarpması maruziyeti gerçekleştirmek için, eforlü sıcak çarpması protokolü sırasında hayvanın kafesini 37,5 santigrat derecelik oda içinde tutun. Hayvan semptom sınırlamasına ulaştığında, uzak kamera tarafından gözlemlendiği gibi bilince geri dönene kadar koşu tekerleğinde kalmalarına izin verin, ardından fareyi hızlı bir şekilde koşu tekerleğinden çıkarın ve çok daha yavaş bir soğutma profiliyle sonuçlanması için doğrudan önceden ısıtılmış kafesine geri döndürün, esasen eforlu sıcak çarpması hipotermik fazını ortadan kaldırın.
Oda ile dengeyi iyileştirmek için bu süre zarfında filtre üstlerini kafesten çıkarın. Oda sıcaklığına önceden soğutulmuş bir geri kazanım kafesi, %100 sağkalım oranına sahip bastırılmış hipotermik bir fazla sonuçlanacak daha az şiddetli bir alternatif prosedür gerçekleştirmek için kullanılabilir Şiddetli eforlu sıcak çarpması protokolü için, kurtarma sırasında fareleri dikkatlice izleyin ve tımar gibi iyileşme sırasında normal hareketler de dahil olmak üzere insancıl uç noktaları sürekli kontrol edin, normal nefes alma ve yalama. Bu süre zarfında çekirdek sıcaklığını izleyin.
Farelerin, çekirdek sıcaklıkları iyileşme aşamasında yönü tersine çevirirse, sonunda 40 santigrat dereceyi aşarsa iyileşme olasılığı düşüktür. Böyle bir durumda, denemeyi sonlandırın ve fareyi standart insancıl uç noktalar için değerlendirmeye devam edin. Bir farenin erken geri kazanımında eforel sıcak çarpması protokolünün tamamı sırasında tipik thermoregulatory profilleri, oda ısıtma aşaması, artımlı egzersiz aşaması, sabit durum egzersiz aşaması ve hızlı veya yavaş bir soğutma yöntemiyle bir geri kazanım aşaması olarak tanımlanabilecek dört farklı aşamadan oluşur.
Şiddetli model için, geri kazanım sıcaklığı profili, çekirdek sıcaklığının iki saatlik iyileşme süresi boyunca 37 santigrat derecenin üzerinde kaldığını gösterdi. Dişi fareler bu modelde sıcak çarpmasına karşı daha dirençliydi ve erkek farelerden yaklaşık iki kat daha uzun mesafeler koştu. İki modelde 39,5 santigrat dereceye kadar iyileşmek için gereken sürede bir fark gözlenmedi.
Bununla birlikte, 37,5 santigrat derecelik çevre sıcaklığına soğuma süresi büyük ölçüde uzadı. En önemli şey, hayvanların ameliyat sonrası ve efor sonrası sıcak çarpması sonrası her zaman dikkatli bir şekilde izlenmesidir. Bu yöntem, birkaç aya kadar sıcak çarpması maruziyetinin uzun vadeli etkilerinin incelenmesine yardımcı olmuştur ve ayrıca, nonsteroidal antiinflamatuar ilaçların ve epigenetiklerin yutulması gibi sıcak çarpması hastalığındaki ek faktörlerin etkilerini ölçmemize izin verdi.
