Bu protokol, iskelet kası sıcaklığını ölçmek için doğrudan ve uygun maliyetli bir yöntem sağladığı için önemlidir. Ayrıca, çeşitli bağlamlarda ve farmakolojik ajanların uyarımı altında kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, aynı anda test edilebilecek hayvan sayısıdır.
Burada tarif edilen minimum hayvan rahatsızlığı, kızılötesi termografi gibi yüksek teknolojili yöntemlere duyulan ihtiyacı ortadan kaldırır. Bireyler, hareket halindeyken ev kafesi içindeki veya koşu bantlarındaki hayvanların sıcaklığını ölçmekte zorlanabilirler. Bu, alışkanlık denemeleri sırasında ölçüm teknikleri uygulanarak hafifletilebilir.
Kapalı transponderleri eldivenli eller arasında ısıtarak başlayın ve transponderlerle çalışırken steriliteyi koruduğunuzdan emin olun. Bir sıcaklık tarayıcısı kullanarak sıcaklığı ölçün ve transponderin sıcaklık değişimlerini okuyup okumadığını kontrol edin. Fareyi el yazmasında açıklandığı gibi anestezi yaptıktan sonra, sağ arka ekstremitedeki deriden sığ bir kesim yapmak için cerrahi makas kullanın.
Önceden programlanmış ve açılmamış steril bir transponderin keskin kenarını, gastroknemiusa paralel olarak insizyona yerleştirin. Yeşil pistonun yukarı baktığından ve görünür olduğundan emin olun. Transponder aplikatörünün açılması artık görünmeyene kadar transponder aplikatörünü insizyona itmeye devam edin.
Aplikatörü 180 derece çevirin, böylece yeşil piston farenin uzuvlarına doğru aşağı bakacak ve artık deneyci tarafından görülemeyecek şekilde. Transponder aplikatörü gastroknemiusun bitişiğinde veya kısmen içine yerleştirildikten sonra, yeşil pistonu iterek aplikatörün basıncının araştırmacının elini fareden uzaklaştırmasına izin verin. Forseps kullanarak açık cildi bir arada tutun.
Steril bir otomatik klipsli bir yara klipsi yerleştirin, gerekirse bükün. Fasya tabakasını kapatmak için steril otomatik klipsten önce emilebilir dikişler kullanın. Transponder okuyucuyu kullanarak, fare kasının sıcaklığını kontrol edin.
Fareyi anesteziden çıkardıktan sonra, bir ısıtma yastığının üstündeki temiz bir ev kafesine yerleştirin ve ev kafesinin alışkanlığa başlamak için kokusuz havlulu bir çay topu içerdiğinden emin olun. Test odasındaki yükselticiye bir konum atayın ve kafa karıştırıcı değişkenlerden kaçınmak için, farklı bağlamsal uyaranlar alacak şekilde ayarlanmış yükselticileri en az iki metre ayırın. Manyetik şeritler kullanarak, yükseltici boyunca cerrahi tabakalar takın ve deneycinin hareketine yanıt olarak fare aktivitesinden kaynaklanan sıcaklık dalgalanmalarını en aza indirmek için görsel bir bariyer oluşturun.
Kontrol ve yırtıcı koku havluları ile çay topları hazırlayın. Hayvanı hazırlanan test odasına aktarın. Hayvanı yükselticide önceden belirlenmiş bir yere yerleştirin ve yükselticinin yerini alışkanlık ve test prosedürleri arasında değiştirmekten kaçının.
Ev kafesi topunu farenin ev kafesinden çıkarın. Kafesi bir bezle veya cerrahi tabakayla kurtarın ve farenin bir ila iki saat boyunca test alanına alışmasına izin verin. Alışma tamamlandıktan sonra, nesnenin temel sıcaklığını ölçmek ve kaydetmek için tarayıcıyı kullanın.
Kafesi ortaya çıkarın ve çay topunu ev kafesinin zeminine yerleştirin. Kafes kapağını ve bez kaplamayı yerine takın. Kronometreyi başlatın ve test deneklerinin sıcaklıklarını aynı çay topu yerleştirme sırasına göre ölçün.
İstenilen zaman noktalarını takip ederek ölçümlerin sıcaklıklarını ve saat zamanını kaydedin. Koşu bantlarını test için hazırlayın ve şokörlerin işlevsel olduğundan emin olun. Hayvanların alışkanlık ve test prosedürleri için aynı koşu bandını kullandığından emin olun.
Fareyi test odasına götürün ve ev kafesinde bir ila iki saat boyunca alışmasına izin verin. Fareyi koşu bandına hareket ettirmeden önce, temel sıcaklığını ölçün ve kaydedin. Kolay yerleştirme ve çıkarma için, kontrol veya yırtıcı koku havlularını tavana veya koşu bandının ön kısmının altına yapıştırın.
Fareyi atanan koşu bandına yönlendirin. Koşu bandı kayışını ve şokerini açın, kronometreyi çalıştırın ve test deneklerinin ölçümlerini koşu bantlarında kuruldukları sırayla alın. İstenilen zaman noktalarını takip ederek ölçümlerin sıcaklıklarını ve saat zamanını kaydedin.
Test tamamlandıktan sonra, şok cihazını ve koşu bandını kapatın ve fareyi ev kafesine geri getirin. Koşu bandını sıvı deterjan ve su kullanarak temizleyin ve artık yırtıcı kokuyu giderin. Tekrarlanan alışkanlık denemeleri, farelerin kas sıcaklığını önemli ölçüde azalttı ve farelerin test ortamına ve protokolüne alıştığını gösterdi.
Dördüncü denemenin kombine cinsiyet analizi, hareket öncesi ve temel sıcaklık ölçümleri arasında anlamlı bir fark göstermedi ve test bağlamına bir saatlik alışmanın etkinliğini gösterdi. Farelerde oksitosin kullanan farmakolojik stimülasyon, 30 dakika sonra maksimum bir düşüşle taban çizgisine göre kas sıcaklığının azaldığını gösterdi. Kas sıcaklıkları oksitosin enjeksiyonundan 60 dakika sonra normalleştirildi.
Sprague Dawley sıçanlarında, yırtıcı kokuyu bağlamsal uyaranlar olarak çıkardıktan sonra kas sıcaklığında sürekli bir artış gözlendi. Sprague Dawley sıçanları, kontrol kokusuna kıyasla, gelincik kokusuna tepki olarak sıcaklıkta sağlam bir artış gösterdi. Diğer engelleyici kokuların varlığında, gelincik kokusu diğer tüm koşullara kıyasla sağlam bir termojenik değişim üretir ve korur.
Bu prosedürü denerken, hayvanları test protokolüne alıştırmak ve her test gününde bir ila iki saatlik bir alışma planlamak çok önemlidir.
