Bu protokol, bir araştırmacının farelerin enerjik dengesinde farklılıklar olup olmadığını belirlemesine izin verir, bu da vücut ağırlığındaki bir değişiklikden sorumlu fizyolojik süreçleri tanımlamaya yardımcı olabilir. Ayrıca, kahverengi yağın enerji harcama kapasitesini belirlemek için de kullanılabilir. Bu teknik, tüketilen oksijeni ve kontrollü bir ortamda tek bir fare tarafından üretilen CO2'yi ölçen bir tekniktir.
Kullanıcıların bu bireysel faredeki enerji harcamasını hesaplamalarını ve farklı tedavilerin veya genetik manipülasyonların enerji harcamasını değiştirip değiştiremeyeceği konusunda belirlemelerini sağlar. Başlamak için, muhafazayı ve hava akışını kontrol eden yazılımı açın ve yazılımın bilgisayarın ekipmanla iletişimini test etmesine izin verin. İletişim kurulduktan sonra dosyayı tıklatın, sonra deneme yapılandırmasını açın ve satıcı tarafından önceden tasarlanmış veya önceki bir testten ayarlanan deneme yapılandırmasını seçin.
Ardından, deneme özellikleri penceresini açmak için denemeye tıklayın, ardından özelliklere tıklayın. Özellikler penceresinde, ortam sıcaklığı ve 12 saatlik ışık döngüleri de dahil olmak üzere çevresel muhafazanın parametrelerini ayarlayın. Ardından, her metabolik kafesin parametrelerinin tanımlandığı deneme kurulum penceresini açmak için deneme ve ardından kurulum'a tıklayın.
Daha sonra, sekiz haftalık dişi fareleri barındıran metabolik kafeslerdeki besleyicilere önceden tartılmış miktarda yiyecek ekleyin. Ayrıca, su şişelerini yerleştirin ve şişelerin doğru şekilde kapatılmış olup olmadığını kontrol edin ve sızıntı yapmayın. 24 saat sonra, kafeslerde kalan yiyecekleri tartın ve fareleri tartın.
Fareler sistemde barındırıldıktan iki ila üç gün sonra dolaylı kalorimetre ve aktivite ölçümlerine başlayın. İlk olarak, CLAMS sistemlerini oksijen ve karbondioksit zirkonya bazlı dedektörü bilinen bileşimdeki bir kalibrasyon gazı kullanarak kalibre edin. Tank çıkış basıncının inç kare başına 5 ila 10 pound arasında olmasını sağladıktan sonra, gaz sensörlerini kalibre etmek ve test etmek için kalibrasyon yardımcı yazılımını açın.
Denemeye tıklayın, ardından kalibre edin ve başlat tuşuna basın. Sensörlerin test edilip, yazılımın kullanıcıdan oksijen kimliğinin değeri bir olana kadar gaz sensörünün düğmelerini çevirmesini istemesini bekleyin. Adım tamamlandığında sonrakini tıklatın.
Farelerin vücut ağırlığını ve bileşimini ölçtükten sonra, deney ve çalıştırmaya tıklayarak oksijen, karbondioksit ve aktivite ölçümlerine başlayın. En az 48 saat sonra, deney'i tıklatarak denemeyi durdurun, sonra durdurun. Verileri vermek için dosyayı tıklatın, sonra tüm konuları CSV dosyası olarak dışa ve dışa aktar.
Karanlık evrede, fareler daha yüksek oksijen tüketimine ve karbondioksit üretimine sahiptir ve bu nedenle daha yüksek enerji harcamasına sahiptir. Düzenli bir diyette fareler ve karanlık döngüde meydana gelen gıda yutulması ile beslenen bir durum, karbonhidrat kullanmayı tercih ettiğini gösteren bire yakın solunum değişim aralığı oranı değerleri ile karakterize edilir. Farelerin çoğunlukla uyuduğu ve böylece hızlı olduğu ışık döngüsü sırasında, RER değerlerinin 0,7'ye daha yakın olmasıyla yağ oksidasyonuna bir kayma vardır.
Buna göre XYZ lazer ışını kırılma sayısı olarak ölçülen fiziksel aktivite karanlık fazda artar ve ışık fazı sırasında azalır. Yüksek yağlı diyet beslenmesi yağsız kitleyi değiştirmeden vücut ağırlığını ve yağ kütlesini arttırır. Yüksek yağlı diyetle beslenen fareler, esas olarak gram yiyecek başına daha yüksek kalori yoğunluğu nedeniyle günde daha fazla kilokalori yediler.
Bununla birlikte, fiziksel aktivite, karanlık dönemde bile yemek ve yüksek yağlı diyetle beslenen fareler arasında benzerdir. Yüksek yağlı diyetle beslenen farelerin alt solunum katsayısı oranı değerleri, oksidasyon için birincil substrat olarak yağ kullanmayı tercih ettiğini gösterir. Karbondioksit üretimi olmasa da oksijen tüketimi, yüksek yağlı diyetle beslenen farelerde artar ve bu da fare başına enerji harcamasında önemli bir artışa neden olur.
Enerji harcaması, esas olarak oksijen tüketimini, karbondioksit üretimini ve dolayısıyla enerji harcamasının kendisini yükselten termojenik adipositlerin adrenerjik aktivasyonu sonucu beta-3 agonist enjeksiyonu ile artırılmıştır. ISTIRIDYE ile enerji harcamasını ölçmek için kalibrasyon tamamlanmalı ve ANCOVA analizini yapmak için vücut ağırlığı ölçülmelidir. Ayrıca gıda alımı hem adaptasyon döneminde hem de ölçümler sırasında ölçülmelidir.
Fareler ilk gıda alımını ve vücut ağırlığını geri kazandığında adaptasyon süresi sona erer. Bu prosedür, ilaçların fare aktivitesi ve davranışı üzerindeki akut etkilerini test etmek için de kullanılabilir. Bu sistemi ayrıca, hangi nöron popülasyonunun kontrol ettiğini gösteren işbirliğine dayalı bir çalışmada kullanıyoruz Bu teknik, kilo alımıyla ilgili hastalıkları incelemek ve besin tercihini, fiziksel aktiviteyi, termogenez ve enerji dengesini kontrol eden süreçleri tanımlamak için gereklidir.
