Name: assessing whole-body lipid-handling capacity in mice
Uploaded: 2020-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH), R00-DK114498 hibesi ve Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA) tarafından desteklenmektedir, CRIS: 3092-51000-062 Y. Z.

Hayvanlar, Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (BCM) tarafından onaylanan hayvan bakımı ve deneysel protokolleri takiben standart koşullarda barındırılmaktadır. Hayvanlar standart veya özel bir diyet, su reklam libitum ile beslenir ve 12 saatlik gündüz / gece döngüsü ile tutulur.
1. Açlık serum lipitlerinin ölçülmesi
<ol><li>Fareleri 17:00'den sonra yeni bir kafese aktarın ve bir gecede suya ücretsiz erişimle hızlı olun (deneyden önce yaklaşık 16 saat oruçla). Gece orucu, farelerin gastrointestinal yollarının tamamen boşaltımını sağlar. NOT: Fareler oruç sırasında dışkılarını yerler, bu nedenle yiyecek çekme işlemi yeterince oruç tuttuklarından emin olamazlar.</li>
	<li>Ertesi sabah, fareyi kuyruğundan kavrayın ve bir yüzeye yerleştirin. Fareyi kısıtlayıcıya yerleştirmek için farenin kuyruğuna hafifçe geri çekin. Farenin nefes almasına izin verirken farenin hareketini yeniden eğitmek için burun kısıtlamasını yerleştirin. Burun kısıtlamasının düğmesini sıkın. Hayvanın normal nefes gördüğünden emin olmak için göğüs hareketlerini izleyin ve bir farenin kısıtlayıcılarda geçirdiği süreyi en aza indirin.</li>
	<li>Serbest hareket eden farenin kuyruk damarında yüzeysel bir kesi (çentik) yapın ve kesiden 25 μL kanı, fareyi kısıtlamadan cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/3'üni doldurarak) çekin. Kanı hızla bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin.</li>
	<li>Stilistik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>Tüm fareler için kan çekmeyi tamamlayın.</li>
	<li>Kanı oda sıcaklığında 1 saat boyunca bozulmadan bırakarak pıhtılaşmasını kesin. Pıhtılaşmış kan örneklerini 4 °C'de 2.000 x g'da, soğutulmuş bir tezgah üstü mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün ve analiz için süpernatantı (serum) aktarın. NOT: Serum analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir. Uzun süreli depolama için serumu –70°C'de tutun.</li>
	<li>Üreticinin sağladığı protokolü kullanarak her lipid metabolitini analiz edin.</li>
</ol>2. Oral Intralipid Tolerans Testi
<ol><li>Saat 17:00'den sonra, ertesi gün kendilerine verilecek intralipid hacminin hesaplanması için fareleri tartın. Ardından, fareleri yeni bir kafese aktarın ve gece boyunca (16 saat) oruçlayın.</li>
	<li>Ertesi sabah, sonraki kanama adımlarında tanımlanmasına yardımcı olmak için bir kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.</li>
	<li>Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurarak) 15 μL kan çekin ve kanı hızla T = 0 serum için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur.</li>
	<li>Gavage fareleri% 20 intralipid, 18G gavage iğnesi kullanarak gram vücut ağırlığı başına 15 μl oranında, oruç öncesi vücut ağırlığını kullanarak. Her fareyi 1 dakika istifle. NOT: Hayvanı tartın ve uygun gavage iğne boyutunu belirleyin. Genellikle, 18 kalibrelik bir gavage iğnesi fareler için >25 g uygundur ve 20-22 kalibrelik bir gavage iğnesi daha küçük hayvanlar için daha uygun olacaktır. Fareyi, hayvanın başını yerinde tutmak için cildi omuzların üzerinde kavrayarak reçete edin. Gavage iğnesini ağzına yerleştirin ve ardından yemek borusuna ulaşılana kadar üst damak boyunca hafifçe ilerleyin. Tüp direnç olmadan geçmelidir. Uygun derinliğe ulaşıldıktan sonra, Intralipid yavaşça uygulanabilir. Intralipid'i idare ettikten sonra iğne yerleştirme sırasında aynı açıyı izleyerek iğneyi yavaşça çıkarın. Hayvanı kafese geri koyun ve zahmetli solunum veya diğer sıkıntı belirtilerini izleyin. NOT: Oral gavage veya kuyruk kanaması teknikleri konusunda deneyimsiz olan araştırmacılar her fareyi 2 dakika veya daha uzun süre istifleyebilirler.</li>
	<li>T = 1, 2, 3, 4, 5 ve 6 saatte kan alın: Kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin ve kanı hızla bir mikrosenjrifuge tüpüne üfleyin.</li>
	<li>Kan örneklerini oda sıcaklığında 2.000 x g'da mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün. Yüzen yağ tabakası da dahil olmak üzere süpernatant'ı depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir. NOT: Süpernatant plazma olmalıdır. Bazı örnekler santrifüjleme zamanında zaten pıhtılaşmışsa, trigliserit ölçümünü etkilemez.</li>
	<li>Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>2 μL trigliserit standardı yükleyin ve 96 kuyulu bir plakaya süpernatantlar toplar.</li>
	<li>200 μL trigliserit reaktif ekleyin ve plakanın renk gelişimi için 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.</li>
	<li>Laboratuvar plakası okuyucusunda 660 nm referans dalga boyu ile emiciliği 500 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.</li>
</ol>3. β3 Adrenerjik Reseptör Agonist CL 316,243 Uyarılmış Lipoliz Tahlil
<ol><li>CL 316,243'ü steril salin içinde 5 mg/mL (50x) stok çözeltisi olarak hazırlayın ve kullanıma kadar –20°C'de saklayın.</li>
	<li>Sabahları, deney için gereken seyreltilmiş CL 316.243 çözelti miktarını hesaplamak için fareleri tartın. Fare, 1 mg / kg vücut ağırlığının son dozu için seyreltilmiş CL 316,243'ün gram vücut ağırlığı başına 10 μL alacaktır.</li>
	<li>Fareleri suya ücretsiz erişim ile yeni bir kafese aktarın ve 4 saat boyunca oruçlayın.</li>
	<li>Tuzlu su kullanarak 50x stoktan yeterli 1x CL 316.243 çözeltisi yapın. 1x CL 316,243 çözeltisinin son konsantrasyonu 0,1 mg/mL'dir. Kontrol tedavi grubu için salin kullanın.</li>
	<li>Kanama adımları sırasında kolay tanımlama için aynı kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.</li>
	<li>Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara 15 μL kan çekin (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurun) ve kanı hızla T = 0 örneği için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin. NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur.</li>
	<li>Seyreltilmiş CL 316,243 çözeltisini (veya deneye dahil edilirse kontrol) intraperitoneal olarak 10 μL/ g vücut ağırlığı hacminde enjekte edin. Her fareyi 1 dakika istifle. Her 60 dakikalık deney için en fazla 5 fare veya iki kişilik bir ekip için 10 fare kullanın.</li>
	<li>T = 5, 15, 30, 60 dakika kan çekin: kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin.</li>
	<li>Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.</li>
	<li>4 °C'de 2.000 x g'da 5 dakika boyunca soğutmalı bir mikrosantrifüjde kan örnekleri döndürün. Süpernatant depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir.</li>
	<li>1 μL 2x seri seyreltilmiş gliserol standartlarını (0.156, 0.312, 0.625, 1.25 ve 2.5 mg/ml Trioleine eşdeğer konsantrasyonlar) yükleyin ve süpernatantları 96 kuyulu bir plakaya toplar. 100 μL serbest gliserol reaktif ekleyin ve rengin gelişmesi için plakanın 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.</li>
	<li>Laboratuvar plakası okuyucu kullanarak emiciliği 540 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+chylomicron+uptake+into+lacteals.">Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, 52-57 (2010).</li><li>Nuno, J., de Oya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoprotein+lipase:+review.">Lipoprotein lipase: review.</a> Revista Cl&#237;nica Espa&#241;ola. 170 (3-4), 83-87 (1983).</li><li>Williams, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+processes+that+handle+--+and+mishandle+--+dietary+lipids.">Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids.</a> Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).</li><li>Burla, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MS-based+lipidomics+of+human+blood+plasma:+a+community-initiated+position+paper+to+develop+accepted+guidelines.">MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines.</a> Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).</li><li>Umpleby, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone+measurement+guidelines:+Tracing+lipid+metabolism:+the+value+of+stable+isotopes.">Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes.</a> Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).</li><li>Mitchell, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+paired+sibling+analysis+of+the+beta-3+adrenergic+receptor+and+obesity+in+Mexican+Americans.">A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).</li><li>Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caloric+restriction+in+C57BL/6J+mice+mimics+therapeutic+fasting+in+humans.">Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans.</a> Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).</li><li>Hayek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+increases+high+density+lipoprotein+(HDL)+levels+both+by+increasing+the+transport+rates+and+decreasing+the+fractional+catabolic+rates+of+HDL+cholesterol+ester+and+apolipoprotein+(Apo)+A-I.+Presentation+of+a+new+animal+model+and+mechanistic+studies+in+human+Apo+A-I+transgenic+and+control+mice.">Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).</li><li>Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+evidence+for+the+absence+of+a+functional+cholesteryl+ester+transfer+protein+gene+in+mice+and+rats.">Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry &amp; Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).</li><li>Tall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+cholesterol+ester+transfer+protein+and+relationship+to+coronary+artery+disease+risk.">Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk.</a> Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).</li><li>Singh, A. K., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglyceride+and+cardiovascular+risk:+A+critical+appraisal.">Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal.</a> Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).</li><li>Miller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglycerides+and+cardiovascular+disease:+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).</li><li>Dron, J. S., Hegele, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Hypertriglyceridemia.">Genetics of Hypertriglyceridemia.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455 (2020).</li><li>Dole, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relation+between+non-esterified+fatty+acids+in+plasma+and+the+metabolism+of+glucose.">A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose.</a> Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).</li><li>Bartelt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue+activity+controls+triglyceride+clearance.">Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance.</a> Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).</li><li>de Souza, C. J., Burkey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta+3-adrenoceptor+agonists+as+anti-diabetic+and+anti-obesity+drugs+in+humans.">Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans.</a> Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).</li><li>Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-adrenergic+control+of+lipolysis+and+thermogenesis+in+adipose+tissues.">Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues.</a> Journal of Experimental Biology. 221, (2018).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Açıklanan üç tahlil, laboratuvarda birkaç kritik hususla birlikte sağlam bir şekilde işlev görür. Açlık serum lipit düzeylerinin belirlenmesi ve oral intralipid tolerans testi için gece oruç gereklidir. Oral intralipid tolerans testi için, özellikle 1 ve 2 saatlik zaman noktalarında bir yağ tabakası oluşumunu en aza indirmek için kanı oda sıcaklığında döndürmek önemlidir; oluşursa bu yağ tabakasını atmamak önemlidir. Süpernatant lipid tabakası ile transfer emin olun ve trigliserit tay...

Karbonhidratlar ve lipitler enerji metabolizması için iki ana substrattır. Anormal lipid metabolizması tip II diyabet, kardiyovasküler hastalıklar, yağlı karaciğer hastalıkları ve kanserler de dahil olmak üzere birçok insan hastalığı ile sonuçlanır. Diyet lipitleri, özellikle trigliseritler, bağırsak yoluyla lenfatik sisteme emilir ve kalbe yakın chylomicronlarda venöz dolaşıma girer1. Lipitler, yağ asidi moietiesinin kas ve yağ dokusu gibi periferik organlarda lipoprotein lipazının etkisiyle kurtarıldığı kan dolaşımındaki lipoprotein parçacıkları tarafından taşınır2. Kalan kolesterol bakımından zengin kalıntı parçacıkları karaciğer tarafından temizlenir3. Fareler, lipid metabolizmasını incelemek için laboratuvarlarda bir araştırma modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Kapsamlı genetik araç seti ve nispeten kısa bir üreme döngüsü ile, lipitlerin nasıl emdiğini, sentezlendiğini ve metabolize edildiğini incelemek için güçlü bir modeldir.
Lipid metabolizmasının karmaşıklığı nedeniyle, sofistike lipidomik çalışmalar veya izotopik izleyici çalışmaları genellikle lipit türlerinin veya lipid ile ilgili metabolik akıların ve kaderlerin koleksiyonlarını ölçmek için kullanılır4,5. Bu, özel ekipman veya uzmanlığa sahip olmayan araştırmacılar için büyük bir zorluk yaratır. Bu yazıda teknik olarak zorlu teknikler kullanılmadan önce ilk test görevi görebilecek üç tahlil sunuyoruz. Fareler için terminal olmayan prosedürlerdir ve bu nedenle lipid taşıma kapasitesindeki potansiyel farklılıkları belirlemek ve etkilenen süreçleri daraltmek için çok yararlıdır.
İlk olarak, açlık serumu lipid moleküllerinin ölçülmesi, bir farenin genel lipit profilinin tespitine yardımcı olabilir. Fareler oruç tutmalıdır, çünkü birçok lipit türü yemeklerden sonra yükselir ve artışın boyutu diyetin bileşimini güçlü bir şekilde etkiler. Toplam kolesterol, trigliserit ve esterlenmemiş yağ asidi (NEFA) dahil olmak üzere birçok lipid molekülü, ticari bir kit ve emiciliği okuyabilen bir plaka okuyucu kullanılarak ölçülebilir.
İkinci olarak, oral intralipid tolerans testi lipid işleme yeteneğini emilim ve metabolizmanın net bir etkisi olarak değerlendirir. Ağızdan uygulanan bir intralipid dolaşımdaki trigliserit seviyelerinde (1-2 saat) bir artışa neden olur, daha sonra serum trigliserit seviyeleri bazal seviyelere (4-6 saat) geri döner. Bu tahlil, bir farenin eksojen lipitleri ne kadar iyi idare edebileceği hakkında bilgi sunar. Kalp, karaciğer ve kahverengi yağ dokusu trigliseritlerin aktif tüketicileridir, beyaz yağ dokusu ise onu bir enerji rezervi olarak depolar. Bu işlevlerdeki değişiklikler test sonuçlarında farklılıklara yol açacaktır.
Son olarak, depolanan lipitleri harekete geçirmek için lipoliz teşvik etmek kilo kaybı için olası bir strateji olarak kabul edilir. Yağ dokusundaki β3-adrenerjik reseptör sinyal yolu adiposit lipolizinde önemli bir rol oynar ve insan genetiği obezite ile ilişkili β3-adrenerjik reseptörde fonksiyon kaybı polimorfizmi Trp64Arg tespit etti6. Cl 316,243, spesifik ve güçlü bir β3-adrenerjik reseptör agonisti, yağ dokusu lipolizini ve gliserol salınımını uyarır. Bir farenin CL 316,243'e verdiği yanıtın değerlendirilmesi, bileşiğin gelişimi, iyileştirilmesi ve etkinliğinin anlaşılması hakkında değerli bilgiler sağlayabilir.
Toplu olarak, bu testler farelerin lipid metabolik durumundaki değişiklikler için bir başlangıç ekranı olarak kullanılabilir. Enstrümanların ve reaktiflerin erişilebilirliği için seçilirler. Bu testlerden elde edilen sonuçlarla araştırmacılar, hayvanlarının metabolik uygunluğunun genel bir resmini oluşturabilir ve daha sofistike ve hedefli yaklaşımlara karar verebilirler.

<table><tbody><tr><td>20% Intralipid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I141</td><td></td></tr><tr><td>BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml</td><td>Shaotong</td><td>B07F1KRMYN</td><td></td></tr><tr><td>CL 316,243 Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5976</td><td></td></tr><tr><td>Curved Feeding Needles (18 Gauge)</td><td>Kent Scientific</td><td>FNC-18-2-2</td><td></td></tr><tr><td>Free Glycerol Reagent</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6428</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol Standard Solution</td><td>Sigma</td><td>G7793</td><td></td></tr><tr><td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>999-34691</td><td></td></tr><tr><td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>991-34891</td><td></td></tr><tr><td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>995-34791</td><td></td></tr><tr><td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>993-35191</td><td></td></tr><tr><td>Matrix Plus Chemistry Reference Kit</td><td>Verichem</td><td>9500</td><td></td></tr><tr><td>Micro Centrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-168</td><td></td></tr><tr><td>Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-362-574</td><td></td></tr><tr><td>NEFA STANDARD SOLUTION</td><td>Fujifilm Wako Diagnostics</td><td>276-76491</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Boston Bioproducts</td><td>BM-220</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Triglycerides Reagent</td><td>Fisher Scientific</td><td>TR22421</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Reagents</td><td>Thermo Scientifi</td><td>TR13421</td><td></td></tr></tbody></table>

assessing whole-body lipid-handling capacity in mice

Lipid metabolizmasının değerlendirilmesi metabolik fonksiyonun değerlendirilmesinin temel taşıdır ve in vivo metabolizma çalışmaları için gerekli kabul edilir. Lipitler, sentezlerinde ve metabolizmalarında yer alan birçok yolak ile birçok farklı molekülden oluşan bir sınıftır. Beslenme ve obezite araştırmaları için lipid hemostazını değerlendirmek için bir başlangıç noktasına ihtiyaç vardır. Bu makalede, ustalaşmak için çok az uzmanlık veya pratik gerektiren ve çoğu laboratuvar tarafından farelerdeki lipid metabolizması anormalliklerini taramak için uyarlanabilen üç kolay ve erişilebilir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemler (1) oral intralipid tolerans testi yoluyla diyet lipid işleme yeteneği için ticari kitler (2) tahlilleri kullanarak birkaç açlık serum lipit molekülünün ölçülmesi ve (3) farelerde CL 316.243 adlı bir farmasötik bileşiğin yanıtının değerlendirilmesidir. Birlikte, bu yöntemler farelerde lipit işleme yeteneğine üst düzey bir genel bakış sağlayacaktır.

Her testin farelerin lipit metabolizması hakkında değerli bilgiler sunduğunu üç alıntı ile gösteriyoruz. Sekiz haftalıktan başlayarak sekiz haftalık yüksek yağlı diyet (HFD) beslenmesi ile zorlanan C57BL / 6J erkek fareler için, toplam kolesterol seviyeleri önemli ölçüde yükselirken, serum trigliserit ve NEFA değildi (Tablo 1), kandaki trigliserit ve NEFA'nın ağırlıklı olarak bir diyet yağ zorluğu ile düzenlenmediğini düşündürmektedir. İkinci fare kohortunda, C57BL6'n?...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice at JoVE.com

Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

assessing-whole-body-lipid-handling-capacity-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

3.9K Görüntüleme.  Baylor College of Medicine. Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.

Video: Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Gelişim Biyolojisi

Shotgun Lipidomics of Rodent Tissues

Lipids play a vital role as essential components of all prokaryotic and eukaryotic cells. Constant technological improvements in mass spectrometry have made lipidomics a powerful analytical tool for monitoring tissue lipidome compositions in homeostatic as well as disease states. This paper presents a step-by-step protocol for a shotgun lipid analysis method that supports the simultaneous detection and quantification of a few hundred molecular lipid species in different tissue and biofluid samples at high throughput. This method leverages automated nano-flow direct injection of a total lipid extract spiked with labeled internal standards without chromatographic separation into a high-resolution mass spectrometry instrument. Starting from sub-microgram amounts of rodent tissue, the MS analysis takes 10 min per sample and covers up to 400 lipids from 14 lipid classes in mouse lung tissue. The method presented here is well suited for studying disease mechanisms and identifying and quantifying biomarkers that indicate early toxicity or beneficial effects within rodent tissues.

Shotgun mass spectrometry-based lipidomics delivers a sensitive quantitative snapshot of a broad spectrum of lipid classes simultaneously in a single measurement from various rodent tissues.

Kemirgen Dokularının Av Tüfeği Lipidomikleri

Lipids play a vital role as essential components of all prokaryotic and eukaryotic cells. Constant technological improvements in mass spectrometry have ...

Biyokimya

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic study in the liver. Here, numerous assays are described to comprehensively measure the phenotype and parameters of hepatic steatosis in mouse and hepatocyte models. 
Combining the physiological, histological, and biochemical methods, this system can be used to assess the progress of hepatic steatosis. In vivo, the measurements of body weight and nuclear magnetic resonance (NMR) provide a general understanding of mice in a non-invasive manner. Hematoxylin and Eosin (H&amp;E) and Oil Red O staining determine the histological morphology and lipid deposition of liver tissue under nutrient overload conditions, such as high-fat diet feeding. Next, the total lipid contents are isolated by chloroform/methanol extraction, which are followed by a biochemical analysis for triglyceride and cholesterol. Moreover, mouse primary hepatocytes are treated with high glucose plus insulin to stimulate lipid accumulation, an efficient in vitro model to mimic diet-induced hyperglycemia and hyperinsulinemia in vivo. Then, the lipid deposition is measured by Oil Red O staining and chloroform/methanol extraction. Oil Red O staining determines intuitive hepatic steatotic phenotypes, while the lipid extraction analysis determines the parameters that can be analyzed statistically. The present protocols are of interest to scientists in the fields of fatty liver diseases, insulin resistance, and type 2 diabetes.

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Here, optimized methods to generate in vivo and in vitro models of hepatic steatosis and to analyze the steatotic phenotypes and related physiological parameters are described.

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Tıp

Quantification of Atherosclerosis in Mice

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic inflammatory disease. Experimental atherosclerosis studies have elucidated the role of cholesterol and inflammation in the disease process. This has led to successful clinical trials with pharmaceutical agents that reduce clinical manifestations of atherosclerosis. Careful and well-controlled experiments in mouse models of the disease could further elucidate the pathogenesis of the disease, which is not fully understood. Standardized lesion analysis is important to reduce experimental variability and increase reproducibility. Determining lesion size in aortic root, aortic arch, and brachiocephalic artery are common endpoints in experimental atherosclerosis. This protocol provides a technical description for evaluation of atherosclerosis at all these sites in a single mouse. The protocol is particularly useful when material is limited, as is frequently the case when genetically modified animals are being characterized.

Murine models of atherosclerosis are useful tools to investigate pathogenic pathways on a molecular level, but require standardized quantification of lesion development. This protocol describes an optimized method to determine lesion size in the major arterial vessels including the aortic root, aortic arch, and brachiocephalic artery.

Fareler içinde ateroskleroz ölçümü

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Body Composition and Metabolic Caging Analysis in High Fat Fed Mice

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate utilization, and behaviors such as food intake and physical activity can provide important information regarding the underlying mechanisms of disease. Given the importance of body composition and metabolism to the development of obesity and its subsequent sequelae, it is necessary to make accurate measures of these parameters in the pre-clinical research setting. Advances in technology over the past few decades have made it possible to derive these measures in rodent models in a non-invasive and longitudinal fashion. Consequently, these metabolic measures have proven useful when assessing the response of genetic manipulations (for example knockout or transgenic mice, viral knock-down or overexpression of genes), experimental drug/compound screening and dietary, behavioral or physical activity interventions. Herein, we describe the protocols used to measure body composition and metabolic parameters using an animal monitoring system in chow-fed and high fat diet-fed mice.

This protocol describes the use of a body composition analyzer and metabolic animal monitoring system to characterize body composition and metabolic parameters in mice. An obesity model induced by high-fat feeding is used as an example for the application of these techniques.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

The nematode C. elegans has emerged as an important model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as it relates to human obesity and its associated pathologies. Several previous methodologies developed for the visualization of C. elegans triglyceride-rich fat stores have proven to be erroneous, highlighting cellular compartments other than lipid droplets. Other methods require specialized equipment, are time-consuming, or yield inconsistent results. We introduce a rapid, reproducible, fixative-based Nile red staining method for the accurate and rapid detection of neutral lipid droplets in C. elegans. A short fixation step in 40% isopropanol makes animals completely permeable to Nile red, which is then used to stain animals. Spectral properties of this lipophilic dye allow it to strongly and selectively fluoresce in the yellow-green spectrum only when in a lipid-rich environment, but not in more polar environments. Thus, lipid droplets can be visualized on a fluorescent microscope equipped with simple GFP imaging capability after only a brief Nile red staining step in isopropanol. The speed, affordability, and reproducibility of this protocol make it ideally suited for high throughput screens. We also demonstrate a paired method for the biochemical determination of triglycerides and phospholipids using gas chromatography mass-spectrometry. This more rigorous protocol should be used as confirmation of results obtained from the Nile red microscopic lipid determination. We anticipate that these techniques will become new standards in the field of C. elegans metabolic research.

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

We present robust biochemical and microscopic methods for studying Caenorhabditis elegans lipid stores. A rapid, simple, fixing-staining procedure for fluorescent lipid droplet imaging leverages the spectral properties of the lipophilic dye Nile red. We then present biochemical measurement of triglycerides and phospholipids using solid phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry.

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

Biyoloji

Imaging and Analysis of Oil Red O-Stained Whole Aorta Lesions in an Aneurysm Hyperlipidemia Mouse Model

Apolipoprotein E (Apoe)- or low density lipoprotein receptor (Ldlr)-deficient hyperlipidemic mice are the two most commonly used models for atherosclerosis research. They are used to study the impact of a various genetic factors and different cell types on atherosclerotic lesion formation and as well as test the development of new therapies. Isolation, excision of the whole aorta, and quantification of Oil Red O-stained atherosclerotic lesions are basic morphometric methods used to evaluate atherosclerotic burden. The goal of this protocol is to describe an optimized, step-by-step surgical method to dissect, perfuse-fix, isolate, stain, image and analyze atherosclerotic lesions in mouse aortas with Oil Red O. Because atherosclerotic lesions can form anywhere in the entire aortic tree, this whole aorta Oil Red O staining method has the advantage of evaluating lipid-laden plaques in the entire aorta and all branches in a single mouse. In addition to Oil Red O staining, fresh isolated whole aortas can be used for variety of in vitro and in vivo experiments and cell isolations.

This protocol provides a step-by-step procedure to analyze atherosclerotic burden in mice. Investigators can use this protocol to compare the abundance, location, and size of atherosclerotic lesions in different animals.

Anevrizma Hiperlipidemi Fare Modelinde Yağ Kırmızı O-Boyalı Bütün Aort Lezyonlarının Görüntülenmesi ve Analizi

Apolipoprotein E (Apoe)- or low density lipoprotein receptor (Ldlr)-deficient hyperlipidemic mice are the two most commonly used models for ...

Determination of Fatty Acid Oxidation and Lipogenesis in Mouse Primary Hepatocytes

Lipid metabolism in liver is complex. In addition to importing and exporting lipid via lipoproteins, hepatocytes can oxidize lipid via fatty acid oxidation, or alternatively, synthesize new lipid via de novo lipogenesis. The net sum of these pathways is dictated by a number of factors, which in certain disease states leads to fatty liver disease. Excess hepatic lipid accumulation is associated with whole body insulin resistance and coronary heart disease. Tools to study lipid metabolism in hepatocytes are useful to understand the role of hepatic lipid metabolism in certain metabolic disorders.
In the liver, hepatocytes regulate the breakdown and synthesis of fatty acids via &#946;-fatty oxidation and de novo lipogenesis, respectively. Quantifying metabolism in these pathways provides insight into hepatic lipid handling. Unlike in vitro quantification, using primary hepatocytes, making measurements in vivo is technically challenging and resource intensive. Hence, quantifying &#946;-fatty acid oxidation and de novo lipogenesis in cultured mouse hepatocytes provides a straight forward method to assess hepatocyte lipid handling. 
Here we describe a method for the isolation of primary mouse hepatocytes, and we demonstrate quantification of &#946;-fatty acid oxidation and de novo lipogenesis, using radiolabeled substrates.

De novo lipogenesis and &#946;-fatty acid oxidation constitute key metabolic pathways in hepatocyte, pathways that are perturbed in several metabolic disorders, including fatty liver disease. Here we demonstrate isolation of mouse primary hepatocytes and describe quantification of &#946;-fatty acid oxidation and lipogenesis.

Fare İlköğretim Hepatositlerde Yağ Asidi Oksidasyon ve lipogenez Belirlenmesi

Lipid metabolism in liver is complex. In addition to importing and exporting lipid via lipoproteins, hepatocytes can oxidize lipid via fatty acid ...

Hiperlipidemiye Bağlı Fare Modelinde HFpEF Patofizyolojisinin İncelenmesi

A Murine Model of Hyperlipidemia&#45;Induced Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

The pathophysiology of heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) driven by lipotoxicity is incompletely understood. Given the urgent need for animal models that accurately mimic cardio-metabolic HFpEF, a hyperlipidemia-induced murine model was developed by reverse engineering phenotypes seen in HFpEF patients. This model aimed to investigate HFpEF, focusing on the interplay between lipotoxicity and metabolic syndrome. Hyperlipidemia was induced in wild-type (WT) mice on a 129J strain background through bi-weekly intraperitoneal injections of poloxamer-407 (P-407), a block co-polymer that blocks lipoprotein lipase, combined with a single intravenous injection of adeno-associated virus 9-cardiac troponin T-low-density lipoprotein receptor (AAV9-cTnT-LDLR). Extensive assessments were conducted between 4 and 8 weeks post-treatment, including echocardiography, blood pressure recording, whole-body plethysmography, echocardiography (ECG) telemetry, activity wheel monitoring (AWM), and biochemical and histological analyses. The LDLR/P-407 mice exhibited distinctive features at four weeks, including diastolic dysfunction, preserved ejection fraction, and increased left ventricular wall thickness. Notably, blood pressure and renal function remained within normal ranges. Additionally, ECG and AWM revealed heart blocks and reduced activity, respectively. Diastolic function deteriorated at eight weeks, accompanied by a significant decline in respiratory rates. Further investigation into the double treatment model revealed elevated fibrosis, wet/dry lung ratios, and heart weight/body weight ratios. The LDLR/P-407 mice exhibited xanthelasmas, ascites, and cardiac ischemia. Interestingly, sudden deaths occurred between 6 and 12 weeks post-treatment. The murine HFpEF model offers a valuable and promising experimental resource for elucidating the intricacies of metabolic syndrome contributing to diastolic dysfunction within the context of lipotoxicity-mediated HFpEF.

Yazar Spotlight: Lipotoksisite ve HFpEF Arasındaki İlişkiyi Keşfetmek 

This protocol presents a detailed approach to replicating a murine model of hyperlipidemia-induced heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF). The design combines the administration of adeno-associated virus 9-cardiac troponin T-low-density lipoprotein receptor (AAV9-cTnT-LDLR) and poloxamer-407 (P-407).

Korunmuş Ejeksiyon Fraksiyonu ile Hiperlipidemiye Bağlı Kalp Yetmezliğinin Murin Modeli

The pathophysiology of heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) driven by lipotoxicity is incompletely understood. Given the urgent need for ...

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

Kemirgen Dokularının Av Tüfeği Lipidomikleri

Optimize Analizi

Fareler içinde ateroskleroz ölçümü

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme

Anevrizma Hiperlipidemi Fare Modelinde Yağ Kırmızı O-Boyalı Bütün Aort Lezyonlarının Görüntülenmesi ve Analizi

Fare İlköğretim Hepatositlerde Yağ Asidi Oksidasyon ve lipogenez Belirlenmesi

Korunmuş Ejeksiyon Fraksiyonu ile Hiperlipidemiye Bağlı Kalp Yetmezliğinin Murin Modeli

Korunmuş Ejeksiyon Fraksiyonu ile Hiperlipidemiye Bağlı Kalp Yetmezliğinin Murin Modeli