Protokol, kütle spektrometresinde bir molekülün aktivasyonu üzerine üretilen parçalar için bir iyon hareketlilik profilinin nasıl kaydedileceğini ve izomerik yapılar arasında ayrım yapılacağını açıklar. Protokol, glikanların bazı temel yapısal özelliklerine göre 11 gruba ayrılmasına izin verir ve böylece elde edilmesi zor bir bilgi sağlar. Son derece jenerik olan ve birçok araştırma alanında ilgi çekici metabolitler veya ilaçlar gibi birçok moleküler aileye uygun moleküler ağlar oluşturmaya hizmet edebilir.
Bu yaklaşım, iyon hareketlilik spektrometrisinde yeni bir kavramdan en iyi şekilde yararlanır ve kütle spektrometrisinin tek başına iki yapı arasında ayrım yapamayacağı durumlarda yararlı olacaktır. Deney, kütle spektrometresi ve iyon hareketliliği konusunda iyi bir hakimiyet gerektirir. Bununla birlikte, deneyci, adımların her birini dikkatlice takip ederse, yöntemi uygulamada başarılı olmalıdır.
Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora öğrencisi Simon Ollivier olacak. Başlamak için Ayar sayfasından tek geçişli bir IMS dizisi ayarlayın, aleti Mobilite moduna geçirin ve Döngüsel Sıra Denetimi penceresini açın. Bu yeni pencerenin Döngüsel İşlevler sekmesinden Gelişmiş mod'u, Paket Ekle'yi ve ardından Tekli/Çok Geçişli'yi seçin.
Aynı pencerenin Sıra sekmesinde bir dizi mobilite olayının görünmesini bekleyin. Sekansı, tüm kalibrant iyonlarının döngüsel IMS yarış pistinin etrafında tek bir geçiş yapması için uyarlayın. Enjekte etme süresini veya Çıkarma ve Edinme süresini değiştirmeyin, ancak Ayrı süreyi bir milisaniyeye düşürün.
Kalibrasyon karışımının bazı iyonları görüntülenen varış zamanı penceresine sığmazsa, ADC Ayarları sekmesindeki kutu başına itme sayısını artırarak IMS'nin ortogonal ivmeli TOF analizörünün iticisiyle senkronizasyonunu değiştirin. Döngüsel Sıra Denetimi penceresinde iki dakikalık bir alımı kaydetmek için, Edinme Ayarları açılır penceresini açmak için Al'a tıklayın, Dosya Adı, Açıklama ve Edinme Uzunluğu, dakikalar girin ve Kaydet'e tıklayın. Sinyalin kararlılığını kontrol etmek için cihazı MS Tune sayfasından TOF moduna geçirin.
Bir dakika boyunca numunenin tam bir MS alımını kaydedin, bu da izotopik paterni ve potansiyel kirleticilerin varlığını kontrol etmek için yararlı olacaktır. Cihazı ana Ayar sayfasının Quad/MS profil sekmesinden MSMS moduna getirin. Kuadrupolde izolasyon için MSMS Kütle alanında hedeflenen demirin kütlesini seçin.
Verileri işlerken öncü yalıtımını kontrol etmek için bir dakikalık bir alma kaydedin. İlgilenilen izomerin mobilite tabanlı bir seçimini gerçekleştirmek için, Döngüsel Sıra Denetimi penceresinde cihazı Hareketlilik moduna geçirin, Döngüsel İşlevler sekmesinden, Paket Ekle'yi ve ardından Dilimleme'yi seçin. Dizi sekmesinde karmaşık bir mobilite olayları dizisinin görünmesini bekleyin.
Eject and Acquire olayını ilk Ayrı olaydan hemen sonra konumlandırın ve ardından Çalıştır'ı tıklatın. Gerçek zamanlı olarak görüntülenecek ilk ayrımın sonuçlarını arayın. IMS tepe noktalarının çözünürlüğü tatmin edici olana kadar dizideki bu olayın zaman değerini değiştirerek çok geçişli bir ayırma için ilk Ayrı olayın süresini artırın.
Referans için bir dakikalık bir alma kaydedin. Duraklat'ı tıklatın, Çıkar ve Al olayını Çıkar, Ön Depoya Çıkar ve Beklet ve Çıkar olaylarının altına konumlandırın. Olayların süresini, hedeflenen tepe noktası Ön Depoya Çıkar bölgesinde ve diğer iyonlar Çıkar veya Beklet ve Çıkar bölgesinde olacak şekilde ayarlayın.
Eject and Acquire olayını dizinin sonunda, Ön Mağazadan Yeniden Enjekte Et ve ikinci Ayrı olaylarının altına yerleştirin. Seçili popülasyonu görüntülemek için Çalıştır'ı tıklatın. İzolasyonun kalitesini kontrol edin.
Referans için bir dakikalık bir alma kaydedin. Sıra sekmesinde, kullanıcı tanımlı olay zamanlarının yanındaki sütunda, tüm olayların toplam zamanlarını arayın. CCS kalibrasyonunu gerçekleştirmek için Pre-Store'dan Reinject etkinliğinin hattında bulunan Time Abs'yi not alın.
Doğrudan Çıkar ve Al'ı devam ettiren Ayrı olayının süresini bir milisaniyeye ayarlayın. Mağaza Öncesinden Yeniden Enjekte Et satırında, Etkinleştirmeyi Etkinleştir kutusunu işaretleyin ve yerleşik denetimle parçalanmayı optimize edin. Parçalanma yerleşik denetimle tatmin edici değilse, Etkinleştirmeyi Etkinleştir kutusunun işaretini kaldırın ve reenjeksiyon voltajlarını manuel olarak optimize etmeye, Ön Dizi Degradesini artırmaya ve sonuçlar tatmin edici olana kadar Dizi Ofset voltajını düşürmeye devam edin.
Edinme açılır penceresine iki dakikalık bir alma işlemi kaydetmek için, Sapma Süresini Koru seçeneğini işaretleyerek yalnızca varış saatlerini içeren bir dosya oluşturun ve _dt.raw olarak etiketlenmiş Z üzerinden M'yi seçin. Arabinoksilan pentasakkarit karışımının MS analizini yaptıktan sonra, spektrum, iki bileşiğin doğada izomerik olduğunu düşündüren Z 685.24 üzerinde M'de tek bir tepe noktasına sahip izotopik bir desen sergiledi. Pentasakkaritlerin adduktları siklik IMS hücresi boyunca ayrıldı ve üç tepe noktası farklı varış zamanlarıyla ayrıldı.
Saf XA3XX, zirveleri 83 ve 90 milisaniyede gösterirken, XA2XX 94 milisaniyede bir zirve sergiler. IMS ayrımının ilk aşamasından sonra, XA3XX'e ait iyonlar dışarı atıldı ve IMS-IMS analizi için 94 milisaniyedeki tepe noktası seçildi. İyonu aktivasyon olmadan yeniden enjekte ettikten sonra üç geçişli bir ayırma gerçekleştirildi ve XA2XX için 199 milisaniyede bir tepe noktası elde edildi.
Oluşturulan IMS-IMS MS verileri, varış zamanı ve M üzerinden Z boyutları kullanılarak birleştirilerek IMS-IMS spektrumları oluşturuldu. CCS kalibrasyonu için %0,2 bağıl yoğunluğun üzerindeki pikler ihraç edildi ve bu da merkezlenmiş CCS kalibre edilmiş IMS-IMS spektrumu ile sonuçlandı. Öncü iyonun izolasyonunu kontrol etmek her zaman önemlidir, aksi takdirde spektrum, ilgilenilen bileşiğin ve kirleticilerin bir karışımından gelebilir.
Daha önce ağlar oluşturmak ve bileşikleri sınıflandırmak için IMS-IMS spektrumlarını kullandık, ancak bileşik tanımlamaları için veritabanlarına karşı arama yapmak için de kullanılabilirler. Bu teknik çok yenidir, ancak glikomikte ve analistlerin izomerik moleküllerle karşı karşıya kaldığı herhangi bir bağlamda son derece yararlı olacağını umuyoruz.
