הפרוטוקול מתאר כיצד להקליט פרופיל ניידות יונים עבור השברים המיוצרים עם הפעלת מולקולה בספקטרומטר המסה, ולהבדיל בין מבנים איסומריים. הפרוטוקול מאפשר לסווג את הגליקנים ל -11 קבוצות לגבי כמה מהמאפיינים המבניים העיקריים שלהם, ובכך לספק מידע שאחרת קשה להשיג. זה יכול לשמש לבניית רשתות מולקולריות שהן גנריות ביותר ומותאמות למשפחות מולקולריות רבות, כגון מטבוליטים או תרופות מעניינות בתחומי מחקר רבים.
הגישה מפיקה את המרב ממושג חדש בספקטרומטריית ניידות היונים, ותהיה שימושית כאשר ספקטרומטריית המסה לבדה לא תצליח להפלות בין שני מבנים. הניסוי דורש שליטה טובה בספקטרומטריית מסה וניידות יונים. עם זאת, הנסיין צריך להיות מוצלח ביישום השיטה אם אחד עוקב בזהירות כל אחד מהשלבים.
מי שידגים את ההליך יהיה סיימון אוליבייה, דוקטורנט מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, הגדר רצף IMS של מעבר יחיד מהדף כוונון, מקם את הכלי במצב ניידות ופתח את החלון בקרת רצף מחזורי. בחר מצב מתקדם מהכרטיסיה פונקציות מחזוריות של חלון חדש זה, בחר הוסף חבילה ולאחר מכן יחיד/מרובה מעברים.
המתן עד שרצף של אירועי ניידות יופיע בכרטיסיה רצף של אותו חלון. התאם את הרצף כך שכל היונים הקליברנטיים יבצעו מעבר יחיד סביב מסלול המרוצים המחזורי של IMS. עם זאת, אל תשנה את זמן ההזרקה או את זמן ההוצאה והרכישה, הפחת את הזמן הנפרד לאלפית השנייה.
אם יונים מסוימים של תערובת הכיול אינם מתאימים בחלון זמן ההגעה המוצג, שנה את הסינכרון של ה- IMS עם דוחף מנתח TOF התאוצה האורתוגונלית על-ידי הגדלת מספר הדחיפות לסל בכרטיסיה הגדרות ADC. כדי להקליט רכישה של שתי דקות בחלון בקרת רצף מחזורי, לחץ על רכישה כדי לפתוח את החלון המוקפץ הגדרות רכישה, הזן את שם הקובץ, תיאור ואורך הרכישה, דקות ולחץ על שמור. העבר את הכלי למצב TOF מהדף כוונון MS כדי לבדוק את יציבות האות.
הקלט רכישת טרשת נפוצה מלאה של המדגם למשך דקה אחת, אשר יהיה שימושי כדי לבדוק את התבנית האיזוטופית ואת נוכחותם של מזהמים פוטנציאליים. מקם את הכלי במצב MSMS מהכרטיסיה פרופיל Quad/MS של דף הכוונון הראשי. בחר את המסה של הברזל הממוקד בשדה המסה של MSMS לבידוד ברביעייה.
רשום רכישה של דקה אחת כדי לבדוק את בידוד המבשר בעת עיבוד הנתונים. כדי לבצע בחירה מבוססת ניידות של איזומר העניין, העבר את המכשיר למצב ניידות בחלון בקרת רצף מחזורי, מהכרטיסיה פונקציות מחזוריות, בחר הוסף חבילה ולאחר מכן חתך. המתן להופעת רצף מורכב של אירועי ניידות בכרטיסיה רצף.
מקם את האירוע 'הוצא ורכוש' מיד לאחר האירוע הנפרד הראשון ולאחר מכן לחץ על הפעל. חפש את תוצאות ההפרדה הראשונית שיוצגו בזמן אמת. הגדל את משך הזמן של האירוע הנפרד הראשון עבור הפרדה מרובת מעברים על-ידי שינוי ערך הזמן עבור אירוע זה ברצף עד שהרזולוציה של פסגות IMS תהיה משביעת רצון.
הקלט רכישה של דקה אחת לעיון. לחץ על השהה, מקם את האירוע 'הוצא ורכוש' מתחת לאירועי 'הוצא', 'הוצא' ל'חנות מקדימה' ו'חסימה והוצאה'. התאם את משך האירועים כך שהשיא הממוקד יהיה באזור 'הוצא אל טרום-חנות', וכל יון אחר נמצא באזור 'הוצא' או 'החזק' ו'הוצא'.
מקם את האירוע 'הוצא ורכוש' בסוף הרצף מתחת להוצאה מחדש מקדם-חנות והאירועים הנפרדים השניים. לחץ על הפעל כדי להציג את האוכלוסיה שנבחרה. בדוק את איכות הבידוד.
הקלט רכישה של דקה אחת לעיון. בכרטיסיה רצף, בעמודה לצד זמני האירוע המוגדרים על-ידי המשתמש, חפש את הזמנים המסוכמים של כל האירועים. שימו לב לשרירי הבטן של הזמן שנמצאו על קו האירוע Reinject מקדם-חנות לביצוע כיול CCS.
הגדר את משך הזמן של האירוע נפרד ישירות בהמשך ההוצאה והרכישה לאלפית שנייה אחת. בשורה הוצא מחדש מקדם-חנות, סמן את התיבה אפשר הפעלה ומטב את הפיצול עם הפקד המוכלל. אם הפיצול אינו משביע רצון עם הפקד המובנה, בטל את הסימון בתיבה אפשר הפעלה והמשיך לייעל באופן ידני את מתחי החזרה, להגדיל את מעבר הצבע לפני המערך ולהוריד את מתח היסט המערך עד שהתוצאות יהיו משביעות רצון.
כדי להקליט רכישה של שתי דקות בחלון המוקפץ רכישה, סמן את האפשרות שמור על זמן דריפט כדי ליצור קובץ המכיל רק את זמני ההגעה, לעומת M חלקי Z המסומן כ_dt.raw. לאחר ביצוע ניתוח טרשת נפוצה של תערובת פנטאסכריד arabinoxylan, הספקטרום הציג דפוס איזוטופי עם שיא יחיד ב M מעל Z 685.24 מציע כי שתי התרכובות הן isomeric בטבע. התוספות של pentasaccharides הופרדו באמצעות תא IMS מחזורי, ושלוש פסגות הופרדו עם זמני הגעה שונים.
XA3XXX טהור מציג את הפסגות ב 83 ו 90 אלפיות השנייה, בעוד XA2XX מציג שיא ב 94 אלפיות השנייה. לאחר השלב הראשון של הפרדת IMS, נפלטו יונים השייכים ל- XA3XX, והשיא ב- 94 אלפיות השניה נבחר לניתוח IMS-IMS. הפרדה של שלושה מעברים בוצעה לאחר הזרקה מחדש של היון ללא הפעלה, ושיא עבור XA2XX הושג ב 199 אלפיות השניה.
נתוני ה- IMS-IMS MS שנוצרו בוטלו באמצעות זמן ההגעה וממדי M חלקי Z, ויצרו את ספקטרום IMS-IMS- IMS. הפסגות מעל 0.2% עוצמה יחסית יוצאו לכיול CCS, וכתוצאה מכך ספקטרום IMS-IMS-IMS מכויל CCS. תמיד חשוב לבדוק את הבידוד של יון מבשר, אחרת, הספקטרום עשוי לבוא מתערובת של דריבית הריבית והמזהמים.
השתמשנו בעבר בספקטרום IMS-IMS-IMS כדי לבנות רשתות ולסווג תרכובות, אך ניתן להשתמש בהן גם כדי לחפש במסדי נתונים זיהויים מורכבים. טכניקה זו היא מאוד לאחרונה, אבל אנו מצפים שזה יהיה מאוד שימושי בגליקומיקה, כמו גם בכל הקשר שבו אנליסטים מתמודדים עם מולקולות isomeric.
