Bu protokol, çeşitli doku mühendisliği ve ilaç dağıtım uygulamaları için kullanılabilecek toksik çözücüler olmadan kitosan mikrojellerinin uygun şekilde üretilmesini sağlar. Bu teknik özel ekipman veya eğitim gerektirmez ve toksik emülsiyon teknikleri veya solvent durulamaları gerektirmez, bu da onu son derece biyouyumlu ve klinik bir ortama çevrilebilir hale getirir. Bu tekniği büyüme plağı yaralanmalarının tedavisinde biyomateryal bir strateji olarak uyguladık.
Ancak bu tekniğin diğer rejeneratif tıp uygulamalarında da faydalı olacağına inanıyoruz. Bu teknik, sürekli ilaç salınımı potansiyeline sahip enjekte edilebilir, biyolojik olarak parçalanabilir, biyomateryal iskele sisteminden yararlanacak diğer rejeneratif tıp uygulamalarına uygulanabilir. % 6'lık bir hacim kitosan çözeltisi oluşturmak için 10 mililitrelik bir Luer kilit şırıngasına asetik asit ve saflaştırılmış kitosan ekleyerek başlayın.
Bir dişi dişi Luer kilit konektörü kullanarak, iki Luer kilit şırıngasını bağlayın, ardından kitosan çileci asit içinde tamamen çözünene kadar çözeltiyi ileri geri karıştırın. Şimdi kitosan içeren şırıngaya 100 mikrolitre genipin çözeltisi ekleyin ve şırıngalar arasında 30 saniye boyunca ileri geri karıştırın, ardından karışımı şırıngadan 35 milimetrelik bir Petri kabına çıkarın. Petri kabını parafin filmle örtün ve nemlendirilmiş bir atmosferde gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.
Hidrojeli daha küçük parçalara ayırmak için bir spatula kullanın, ardından temiz bir 10 mililitrelik şırınganın arkasına istenen ağ boyutunda bir filtre yerleştirin. Kırık jel parçalarını filtreyle donatılmış şırıngaya aktarın ve 6 mililitre çift damıtılmış su ekleyin. Şırıngayı bir Luer kilit konektörü aracılığıyla başka bir temiz 10 milimetrelik şırıngaya bağlayın.
Mikrojeller oluşturmak için jel ve su karışımını şırıngadan filtreyle zorlayın. İlk filtrelemeden sonra, filtreyi içeren şırıngayı açın ve karışımı tekrar bu şırıngaya ekleyin. Karışımı tekrar filtreden geçirin.
Şimdi, filtrelenmiş jel karışımını 50 mililitrelik bir konik tüpe aktarın ve hacmi 20 mililitreye getirmek için çift damıtılmış su ekleyin. Homojen bir çözelti elde etmek için çözeltiyi vorteksleyin. Mikrojelleri oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 100 kez g'de santrifüj yapın.
Santrifüjlemeden sonra, üst sulu fazı çıkarın ve mikrojelleri 10 mililitre% 70 etanol içinde yeniden askıya alın, ardından mikrojelleri vorteksleyin ve sterilize etmek için bir saat boyunca UV ışığı altına yerleştirin. Şimdi, mikrojelleri oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 1000 kez g'de santrifüj edin. Etanolün atılmasını sağlayın ve çift damıtılmış su ile 3 kez durulayın.
Mikrojel peletleri eşit miktarda çift damıtılmış suda yeniden askıya alın. PH'daki artışla birlikte, mikrojeller Feret çapındaki değişimle gösterildiği gibi şişmede bir azalma gösterdi. Ayrıca, mikrojel parçacıklarının boyutu, kullanılan filtrenin gözenek boyutuna bağlıdır.
200 numaralı ağ küçük parçacıklar üretirken, 100 numaralı ağ büyük parçacıklara yol açtı. Yaralı bölgede mikrojellerin varlığı kıkırdak rejenerasyonunu teşvik etti. Alcian mavisi hematoksilin boyaması, yaralı dokuya enjekte edilen mikrojellerin erken kemikli çubuk oluşumunu önlediğini ve biyoaktif ajanlar SDF-1a ve TGF-B3 ile yüklü mikrojellerin kıkırdak oluşumunu desteklediğini göstermiştir.
Etkili filtrelemenin gerçekleşebilmesi için tel örgü filtrenin şırıngaya doğru şekilde yerleştirildiğinden emin olmak önemlidir. Mikrojel boyutunun homojen bir dağılımını sağlamak için filtrasyonu birkaç kez tekrarlamak da önemlidir. Bu mikrojeller, terapötiklerin sürekli salınımı potansiyeline sahip bir biyomalzeme iskele substratı gerektiren çok çeşitli doku mühendisliği uygulamalarına uygulanabilir.
