Hidrojen Sülfür Üreten Bakterilerin Tespiti için Hassas Bir Görsel Yöntem

Hidrojen sülfür üreten bakteriler, hidrojen sülfür üretmek için kükürt içeren amino asitleri ve proteinleri kullanabilir. Burada, bakterilerdeki hidrojen sülfürü tespit etmek için hassas ve basit bir yöntem oluşturduk. Bu yöntem, 96 kuyucuklu şeffaf mikrotitrek plakaları kullanan bizmut sülfür çökeltmesinin değiştirilmiş bir versiyonudur.

Bakteri kültürü, L-sistein içeren bizmut çözeltisi ile birleştirildi ve sonunda siyah bir çökelti gözlenen 20 dakika boyunca kültürlendi. Prosedürleri gösteren, laboratuvarımızdan bir araştırma görevlisi olan Wei Zhu olacaktır. Bakteri kolonilerini bir Luria-Bertani veya LB agar plakasından 100 mililitre LB ortamına aktararak başlayın ve bakteri konsantrasyonu mililitre başına yaklaşık 1 milyar hücre olana kadar 12 ila 16 saat boyunca 37 santigrat derecede kültüre alın.

Fusobacterium nucleatum ve Proteus vulgaris'in bir bakteri kolonisini Triptikaz soya suyu veya TSB agar plakalarından 100 mililitre TSB ortamına aktarın ve bakteri konsantrasyonu mililitre başına yaklaşık 1 milyar hücre olana kadar 24 saat boyunca anaerobik olarak 37 santigrat derecede kültüre aktarın. 96 delikli mikrotitre plakalarında 100 mikrolitre bakteri kültürünü 100 mikrolitre yeni hazırlanmış bizmut çözeltisi ile karıştırın ve 37 santigrat derecede 20 dakika boyunca kültürleyin. Her bakteri suşu için, analizi üçlü olarak gerçekleştirin.

20 dakika sonra renk değişikliği olup olmadığını kontrol edin. Çözeltinin rengi açık sarıdan siyaha değişirse, bu bakterilerin hidrojen sülfür veya H2S üretebildiğini gösterir. Bu ölçümü üç kez tekrarlayın.

Bizmut sülfit çözeltisi ile karıştırılmış farklı konsantrasyonlarda sodyum hidrosülfit kullanarak yöntemin duyarlılığını belirleyin. Son olarak, siyah bizmut sülfür çökeltisinin oluşumunu gözlemleyerek bisülfit ve sülfit iyonlarının varlığını belirleyin. Renk üretimi yoktan en koyu siyah renk üretimine kadar görsel bir ölçek kullanarak kuyuların rengini puanlayın.

Hidrojen sülfür testinin performansı, seçilen bakteri suşlarının saf kültürleri kullanılarak araştırılmıştır. Sonuçlar, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa ve Proteus vulgaris'in siyah bizmut sülfür çökeltisi ile hidrojen sülfür üretebileceğini göstermiştir. Salmonella paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila ve Klebsiella pneumoniae ise herhangi bir siyah çökelti gösteremedi.

Bu yöntemin en önemli avantajı, çoğaltılmasının kolay olması ve özel ekipman gerektirmemesidir.