ASCJ yetersizlik fare modelinin başarılı bir şekilde kurulması, basit bir ayak bileği yetersizliği hayvan modelini genişletir ve klinik ayak hastalıklarının incelenmesi için yeni kavramlar sağlar. Ayak hastalıklarının teşhisi ve tedavisi hakkında daha fazla araştırma yapmak için kullanılabilecek gerçek klinik durumla daha uyumlu bir hayvan modeli oluşturduk. Deneyden bir hafta önce, fareleri denge kirişi ve yürüyüş eğitimine tabi tutun, bir denge kirişinin veya U şeklindeki borunun bir ucundan diğerine durmadan gidin.
Farenin sağ arka bacaklarının ayak bileği eklemindeki kılları uyuşturduktan ve çıkardıktan sonra, açıkta kalan cildi bir iyot çubuğu ile dezenfekte edin. Steril bir cerrahi ped kullanarak fareyi mikrocerrahi hayvan ameliyathanesine aktarın. Transvers servikal ve anterior talofibular ligament grupları için, sağ ayak bileği ekleminin üzerindeki deride bir neşter ile yedi milimetre eğik aşağı doğru uzunlamasına bir kesi yapın.
Ve ayak bileği ekleminin önündeki mikroskobik düz forseps ile sonda. Talus gövdesinin ve fibulanın alt sınırındaki anterior talofibular bağın açığa çıkmasını sağlayarak, bir neşter ile hafifçe kesin. Uzun ve kısa fibula tendonlarını ve ekstansör digitorum longus tendonlarını ayırın.
Servikal bağı ortaya çıkarın ve bir neşter ile kesin. Transvers servikal ligament artı deltoid ligament grubu için, sağ ayak bileği ekleminin medial derisinde sekiz milimetrelik dikey bir kesi yapın ve kesmek için DL'yi medial malleolden künt olarak ayırın. Daha sonra servikal bağı daha önce gösterildiği gibi kesin.
Sahte grup için, sağ ayak bileği ekleminde sahte ameliyat yapın. Kesi steril normal salinle yıkandıktan sonra 5-0 cerrahi naylon iplikle dikildikten sonra dikişli insizyon iyot sürüntüsüyle dezenfekte edilir. Ameliyattan iki hafta sonra açılı eklem şişmesi azaldığında, fareleri her gün bir saat boyunca fare döner yorgunluk makinesinde çalıştırın.
Denge kirişi testi için, bir ucunda 15 derece eğimli dairesel bir ahşap kirişi bir fotoğraf tripod klipsi ile sıkıştırın ve diğer ucunu kapalı bir kasete bağlı bir çalışma yüzeyine yerleştirin. Farelerin ışının bir ucundan diğerine sorunsuz bir şekilde hareket etmesini sağlamak için ameliyattan bir hafta önce denge kirişi eğitimi yapın. Bir farenin, ışından 60 saniyede iki kez duraklamadan geçtiğinde testi geçtiğini düşünün.
Her denemeden sonra, önceki farenin kalan kokusunun bir sonraki fareyi etkilemesini önlemek için denge kirişine %75 alkol püskürtün. Denge kirişi testini gerçekleştirin ve her farenin denge kirişini arka arkaya iki kez geçtiği ortalama süreyi kaydedin. Ve sağ arka ayağın kirişten kayma sayısı, bağımlı değişkenler olarak.
Ayak izi analizi için, deney masasına U şeklinde bir plastik kanal yerleştirin ve plastik kanalın bir ucunu kapalı bir kasete bağlayın. Kanala düz bir pigment kağıdı yerleştirin. Ardından fareyi iki elinizle tutun ve ön ve arka ayakları toksik olmayan kırmızı ve yeşil pigmentle eşit şekilde boyayın.
Şimdi, boyalı fareyi kanalın bir ucuna yerleştirin ve kasetin diğer ucuna hareket etmesine izin verin. Pigmentli kağıdı ayak izleriyle birlikte alın, işaretleyin ve havalandırılan ve gölgeli bir alanda kurumasını bekleyin. Önceki farenin kalan kokusunun bir sonraki fareyi etkilemesini önlemek için, her fare geçtikten sonra U şeklindeki plastik kanala %75 alkol püskürtün.
Her kağıtta art arda üç adet net fare ayak izi seçin. Bir cetvel kullanarak, sol ve sağ ayak izleri arasındaki adım genişliği ile farenin sağ ayağının ayak izinin adım uzunluğunu ölçün. Ayak bileği örneklerinin etrafındaki fazla yumuşak dokuyu çıkarmak için mikroskobik cımbız ve makas kullanın.
Ardından, numuneleri %10 EDTA dekalsifikasyon solüsyonu içeren bir santrifüj tüpüne yerleştirin ve farklı grupları işaretleyin. Ardından, dekalsifikasyon için santrifüj tüpünü çalkalama masasına yerleştirin. Dekalsifikasyon solüsyonunu günde bir kez değiştirin ve numunelerin dekalsifikasyonunu belirleyin.
Bir aylık dekalsifikasyondan sonra, numuneleri gradyan alkolle kurutun ve ardından temizleme amacıyla sekiz saat boyunca N-bütanol kullanın. Son olarak, temizlenmiş numuneleri gömmek için koronal pozisyonda parafine daldırın. Kesitlere ayırmadan önce, tüm düzlemlerin kesilmesini kolaylaştırmak için numuneleri dört santigrat derece buzdolabından eksi 20 santigrat derece dondurucuya yaklaşık 10 dakika aktarın.
Numuneleri mikrotom üzerine sabitleyin ve altı mikrometre kalınlığında bölümlere ayırın. Aynı zamanda, bir şırınga iğnesinin kemik dokusuna kolay nüfuz etmesi için numunelerin beklenen seviyede kesilip kesilmediğini gözlemlemek için bir mikroskop kullanın. Arka arkaya iki veya üç tam parafin bölümünü kestikten sonra, tam genişleme için bunları 40 santigrat dereceye ayarlanmış tablet makinesine aktarın.
Ardından parafin bölümlerini bir cam sürgü ile çıkarın. Son olarak, slaytları gruplar ve sayılarla işaretleyin. Sağlam ASCJ eklem yapısını mikroskop altında gözlemlemek.
Bölümleri 40 ila 50 dakika boyunca 60 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin. Ardından, el yazmasında açıklandığı gibi, bölümleri ksilen ile üç kez mumdan arındırın. Mumdan arındırılmış bölümleri üç dakika boyunca iki kez %100 etanole, ardından her biri beş dakika boyunca %90 ve %80 etanole yerleştirin.
Ardından bölümleri beş dakika boyunca çift damıtılmış suyla yıkayın. Hematoksilen içinde bir dakika beklettikten sonra, bölümleri renksiz hale gelene kadar çift damıtılmış suyla yıkayın. Bölümleri %1 asit etanol farklılaştırma solüsyonunda 30 saniye bekletin ve çift damıtılmış suyla yıkayın.
Bölümler %1 amonyak çözeltisi ile boyandıktan ve çift damıtılmış su ile yıkandıktan sonra, numuneleri bir dakika boyunca eozin boyama çözeltisi ile boyayın. Ve sonra her biri bir dakika boyunca arka arkaya% 95 ve% 100 etanol koyun. Son olarak, bölümlere bir dakika boyunca ksilen dört uygulayın.
Slaytlardaki numunelere bir damla nötr reçine yapıştırdıktan sonra bölümleri havayla kurutun ve bir kapak astarı ile örtün. Ardından, beş ve 20X'te parlak alanda dik bir floresan mikroskobu ile görüntü alın. Hematoksilen ve amonyak lekeli bölümleri iki dakika boyunca %0,05 hızlı yeşile batırın.
Ardından bölümleri %1 asetik asit çözeltisinde 30 saniye ve %0.1 safranin içinde beş dakika bekletin. Ardından slaytları daha önce gösterildiği gibi etanol ve ksilen ile işleyin. 5X ve 20X'te parlak alanda dik bir floresan mikroskobu ile görüntü alın.
Üç gün, sekiz hafta ve 12 haftalık ameliyattan sonra, kopan bağ gruplarının denge kirişinden geçmesi sahte gruba göre önemli ölçüde daha uzun sürdü. Ameliyattan önce, sağ arka ayak adım uzunluğu üç fare grubu arasında karşılaştırılabilirdi. Ancak ameliyattan 12 hafta sonra basam uzunluğu bağ kesisi yapılan grupta sham grubuna göre daha kısaydı.
Ameliyattan önce, aktivite sırasında farelerin ayaklarının termal nosisepsiyon tepki süresi, üç fare grubu arasında benzerdir. Ameliyattan sonra, bağ kesim grubundaki fareler, sahte gruba kıyasla daha uzun yanıt süreleri gösterdi. Kopmuş bağ gruplarında sağ arka ayağın ASCJ'sinde pürüzlü yüzeyler, osteofit birikimi, dejeneratif değişiklikler izlendi.
Ve sahte gruptan önemli ölçüde daha yüksek kemik hacmi fraksiyonu. Ligament kesi grubundaki ASCJ'nin kıkırdak tabakasında süreksizlik ve kondrosit sayısında azalma görüldü. Ayrıca, ligament amputasyonu olan farelerin Malkin ve Osteoarthritis Research Society International skorları, sham grubundan anlamlı olarak daha yüksekti.
Sağ arka ayağın sahte grubunun ASCJ eklem kıkırdak tabakasındaki tip iki kollajen, bağları kopmuş iki fare grubundan daha homojen ve daha yüksekti. Bu çalışma, ayak bileği instabilitesinin tanı ve tedavisinde kullanılabilir ve bu hastalığın klinik tedavileri için deneysel bir referans sağlar.
