Name: in vivo imaging and therapeutic treatments in an orthotopic mouse model of ovarian cancer
Uploaded: 2010-08-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer at JoVE.com

Dr Harvey Hensley Biz onun uzman teknik destek için teşekkür ederiz. Hayvan Tesis ve Küçük Hayvan Görüntüleme Tesisi Laboratuvarı: Bu çalışma, Fox Chase Kanser Merkezi&#39;nde (FCCC) tesislerinin kullanımı yararlanmıştır. Bu çalışma FCCC / UPenn (P50 CA083638), FCCC çekirdek hibe (P30 CA006927) Yumurtalık Kanseri SPOR ve Yumurtalık Kanseri Araştırma Fonu tarafından desteklenmiştir.

Over Tümör Hücreleri I. Hazırlık <ol><li> Grow kültür lusiferaz ifade yumurtalık kanseri hücre hatları. Lusiferaz Kaynakları Firefly, Renilla, ya da diğer türler olabilir. Floresan proteinleri ifade Hücreler de kullanılabilir. Bu gösteri için ateşböceği lusiferaz ifade yumurtalık kanseri hücre hattı, OVCAR5, kullanın. </li><li> Rutin hücre kültürü tekniği kullanılarak Hasat hücreleri. </li><li> Fosfat hücre süspansiyonu (10.000 hücre / mcL) enjeksiyon saatine kadar buz üzerinde tamponlu salin (PBS) tutun. </li></ol> II. İntrabursal Enjeksiyon Bu prosedür, ikinci bir kişiden yardım gerektirir. Tüm cerrahi işlemler aseptik koşullarda yapılmaktadır. Bu cerrahi kıyafetleri giyen ve steril cerrahi aletler, şırınga ve iğneler kullanarak içerir. <ol><li> 3 mL ketamin hidroklorür (100 mg / ml), 1.6 ml (100 mg / ml) ksilizin hidroklorür, acepromazine (10 mg / ml) 1.5 ml ve 20 ml% 0.9 sodyum klorür karıştırılarak anestezik çözüm hazırlayın. </li><li> Hayvan kimlik numarası ve gözlemlenebilir sağlık kontrol edin. Ketamin ksilizin-acepromazine hazırlanmış bir doz hacmi 8 ~ 9 ml / kg vücut ağırlığı (BW) ile intraperitoneal (ip) enjeksiyonu ile anestezi ile hayvan anestezisi. </li><li> Hayvan hayvanın arka pençeleri forseps veya parmak ile ayak tutam yaparak kabul edilebilir bir ova anestezi altında olduğunu onaylayın. Pedal refleks varsa, hayvan bu prosedüre tepkisiz kadar derin bir anestezi düz bekleyin. </li><li> Hayvan dorsal tarafına kadar steril bir gazlı bezle başını dönük ve kuyruğu size doğru yatırın. Yumurtalıkların üzerinde sol veya sağ ve orta hat kesi noktasında yer almaktadır. Kesi noktada% 70 alkol ile kürk Tıraş veya ıslak. </li><li> Forseps kullanılarak ıslak cilt kaldırın ve makas dorsomedial konumda ve doğrudan over yağ yastığı üzerinde küçük bir kesi yapmak. Over yağ yastığı periton duvar yüzeyinin altında görünür olmalıdır. Fat pad, onu çevreleyen koyu pembe doku aksine beyaz renk ile kolayca tanınabilir. </li><li> Periton duvarını kaplayan yavaşça kaldırın ve yukarıda açıklandığı gibi küçük bir kesi (5). </li><li> Orta hat kesi bitişik batırılmış steril tuzlu gazlı bez yerleştirin. Over yağ yastığı bulun ve yavaşça dışarı çekin ve gazlı bez üzerine geri kalanı. Bulldog klip ile yağ yastığı sıkma yumurtalık sabitleyin. Diseksiyon mikroskobu, pozisyon altında yumurtalık bursa giden yumurtalık tübül viraj içine iğne (30 gauge, G) ekleme için izin vermek. Iğne uygun konuma takıldığında, bursa altında görünür olmalıdır. </li><li> Şırınga enjeksiyon yerinde konumlandırılmış bursa ve yumurtalık arasındaki 5 mcL hücre süspansiyonu enjekte etmek için şırınga pistonu yavaşça itin. Bu adım, iki kişi gerekir. Bir kişi, diğer kişi iğne konumlandırma koruyor pistonu iter. Ponksiyon sitesi mühür hızlı iğne çıkarın ama bursa ve tübül gözyaşı hafifçe yeterli değil. Bursa uygun enjeksiyon biraz şişmiş olarak görünmelidir. </li><li> Bulldog klipten yağ yastığı bırakın ve periton boşluğuna yavaşça üreme yolları ve yağ yastığı arka değiştirin. Alt astar üzerine üst periton astar çekerek vücut duvarı yavaşça kapatın. Cerrahi zımba veya yara klipleri ile cilt kapatın. </li><li> Kendi kafesine geri kurtarma hayvan koyun ve hipotermi önlemek ve kurtarma hızlandırmak için güvenli bir ısı kaynağı sağlar. Monitör, solunum hızı ve kolaylığı, kas tonusu dönüş, ve gönüllü bir hareket yeteneğine. Bu kurtarma yolunda ilerlemesi tüm iyi göstergeleridir. Staples veya yara klipleri, 7 gün veya daha fazla cerrahi sonrası silinebilir. </li></ol> III. Ağızdan sonda İdaresi <ol><li> 18 ~ 20 G sonda ile iğne ya da beslenme tüpü yuvarlak uçlu kullanın. Gavaj iğne hayvanın başının ucundan son kaburga mesafe daha uzun olmamalıdır. </li><li> Hayvanların kimlik numarası ve gözlemlenebilir sağlık kontrol edin. Başparmak ve işaret parmakları ile omuzlar üzerinde cilt tutarak yavaşça berduş hayvan. Kısıtlama, yolun her iki tarafında ve dışarı uzatılabilir ön bacaklar için yeterli sağlam olmalıdır. Hayvan iğne kavramak mümkün olmamalıdır. </li><li> Yavaşça parmağı ile boyun ve yemek borusu ile düz bir çizgi oluşturan, hayvanın kafasını geri çekin. Hayvanın içinde başparmak ile sırt desteği. </li><li> Yavaşça ve kuvvet olmadan, ağız ve dil üzerinden iki tarafında gavaj iğne takın. Tek bir düzgün hareket, iğne ağız ve yemek borusundan aşağı çatı karşı geçmelidir. Yerçekimi toplantı direnişle karşılaşmadan iğne rehberlik etmelidir. Herhangi bir resistan varsace, iğne kaldırmak ve yeniden başlatın. Hayvanın gag ve yutma refleksinin yerleştirilmesi sırasında tetiklenen olabilir. Ancak, hiçbir direniş ya da hayvan nefes nefese olması gerekir. Hayvan iğne burun delikleri ve göğüs hareketi kontrol ederek ne zaman nefes olduğunu emin olmak için çok önemlidir. </li><li> Yavaş yavaş doz hacmi dağıtmak için şırınganın pistonu itin. </li><li> , Yemek borusu takıldı yolu olarak aynı açı ve yolağı gavaj iğne yavaşça çıkarın. </li><li> 5 ~ 10 dakika, kafes ve solunumu ve davranış hayvan dönün. </li></ol> Vivo Görüntüleme IV. Kaliper Yaşam Bilimleri İntrabursal boşluğuna enjekte edilen hücrelerin davranışlarını izlemek için kullanın. Bu sistemi kullanarak deneyler genellikle tümör implantasyonu zaman 4 ~ 16 haftalık bir zaman dilimi var. <ol><li> D-luciferase (ateşböceği lusiferaz substratı) 5 ~ 20 mg 1 ml PBS içinde eriterek ve sterilizasyon için 0.22 mikron zarından filtreleme çözümü hazırlayın. </li><li> Indüksiyon odasına oksijen ve isofluran gaz hem çevirerek şarj edin. Sadece indüksiyon odasına gaz akışı AÇIN. Hayvanlar yansıması için hazır olana kadar izofluran debisi düşük bir düzeyde tutulur. </li><li> Hayvanların kimlik numarası ve gözlemlenebilir sağlık kontrol edin. Isofluran gaz ücret indüksiyon odasında hayvan yerleştirin. </li><li> Hayvan, hayvan anestezi göründüğünde odasından çıkarın. 200 mcL ip enjeksiyon yoluyla 30 G iğne kullanılarak hazırlanmış luciferase çözüm sunun. Çalışma boyunca luciferase enjeksiyon ve görüntü performansı arasındaki zaman tutarlı tutmak için enjeksiyon zamanını kaydetmek için önemlidir. </li><li> Indüksiyon odasına enjekte luciferin-hayvan arkasına yerleştirin. </li><li> Görüntüleme sistemi uygun ayarları ayarlayın. Ilk hayvan görüntü almadan önce sistemi başlatmak için emin olun. </li><li> Indüksiyon odasına gaz akışı KAPATIN ve görüntüleme odasına gaz akışı AÇIK konuma getirin. </li><li> Anestezi hayvan dorsal veya ventral tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Uygun anestezi indüksiyonu korumak için bir burun konisi hayvanların burun yere emin olun. Hayvan yeşil aydınlatma tarafından belirtildiği gibi &quot;faiz grid noktası&quot; içinde olduğundan emin olun. </li><li> Odanın kapısını kapatın ve uygun bir zamanda görüntü elde. Zaman kinetiği tarafından tespit edilebilir. </li><li> Hayvan görüntüleme odasından çıkarın ve onun kafes içine geri koyun. &quot;İntrabursal Enjeksiyon&quot; anlatıldığı gibi hayvanların kurtarma izleyin. </li></ol> V. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/2125/2125fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 ortotopik bir fare modeli over tümör hücrelerinin Vivo görüntüleme. Lusiferaz ifade OVCAR5 hücreleri sağ yumurtalık intrabursally enjekte edilen ve zaman içinde görüntülenmiş. Görüntüler IVIS Spectrum görüntüleme sistemi kullanarak enjeksiyon gün sonra 13 (solda), 17 (orta) ve 22 (sağ) alınmıştır. Dorsal yüzü üst panelinde gösterilir ve ventral tarafta alt panel. Not tümör hücrelerinin peritoneal yayılım enjeksiyonu takiben 22 gün. Fox Chase Kanser Merkezi&#39;nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.

<ol>
	<li>Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 59, 225-249 (2009).</li><li>Lynch, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hereditary+ovarian+carcinoma:+heterogeneity,+molecular+genetics,+pathology,+and+management.">Hereditary ovarian carcinoma: heterogeneity, molecular genetics, pathology, and management.</a> Mol Oncol. 3, 97-137 (2009).</li><li>Yap, T. A., Carden, C. P., Kaye, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+chemotherapy:+targeted+therapies+in+ovarian+cancer.">Beyond chemotherapy: targeted therapies in ovarian cancer.</a> Nat Rev Cancer. 9, 167-181 (2009).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur J Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Shaw, T. J., Senterman, M. K., Dawson, K., Crane, C. A., Vanderhyden, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+intraperitoneal,+orthotopic,+and+metastatic+xenograft+models+of+human+ovarian+cancer.">Characterization of intraperitoneal, orthotopic, and metastatic xenograft models of human ovarian cancer.</a> Mol Ther. 10, 1032-1042 (2004).</li><li>Greenaway, J., Moorehead, R., Shaw, P., Petrik, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-stromal+interaction+increases+cell+proliferation,+survival+and+tumorigenicity+in+a+mouse+model+of+human+epithelial+ovarian+cancer.">Epithelial-stromal interaction increases cell proliferation, survival and tumorigenicity in a mouse model of human epithelial ovarian cancer.</a> Gynecol Oncol. 108, 385-394 (2008).</li><li>Connolly, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ovarian+cancer.">Animal models of ovarian cancer.</a> Cancer Treat Res. 149, 353-391 (2009).</li><li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging.">Bioluminescence imaging.</a> Proc Am Thorac Soc. 2, 537-540 (2005).</li><li>Lehmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+and+multimodal+in+vivo+imaging+of+tumor+hypoxia+and+its+downstream+molecular+events.">Longitudinal and multimodal in vivo imaging of tumor hypoxia and its downstream molecular events.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 14004-14009 (2009).</li><li>Connolly, D. C., Hensley, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenograft+and+Transgenic+Mouse+Models+of+Epithelial+Ovarian+Cancer+and+Non-Invasive+Imaging+Modalities+to+Monitor+Ovarian+Tumor+Growth+In+Situ:+Applications+in+Evaluating+Novel+Therapeutic+Agents.">Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non-Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In Situ: Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents.</a> Current Protocols in Pharmacoogy. 45, (2009).</li></ol>

Yumurtalık kanseri tüm jinekolojik maligniteler 1 arasında önde gelen ölüm nedenidir. Bu hastalığın yüksek ölüm oranı, geç tanı ve güvenilir tanı yöntemleri 2 eksikliği büyük ölçüde kaynaklanmaktadır. Ayrıca, geleneksel kemoterapi genellikle kanser 3 chemoresistance ve nüks karşılaşır. Bu nedenle, yeni terapötikler bu hastalığın etkin bir şekilde hedef gereklidir. Insan yumurtalık kanseri hedefleyen yeni tedavi geliştirme, temsil eden bir hayvan modeli geliştirmek için kritik öneme sahiptir. Ortotopik bir hayvan modeli, metastaz ortak sitesi temsil eden), 2 tümör oluşumunu birincil site üretir), geleneksel xenograftlarının modellere göre avantajları şöyle: 1. (örneğin, subkutan ya da tümör hücrelerinin intraperitoneal enjeksiyonu), ve 3), tümör hücrelerinin sağlar uygun mikroçevresinin 4, 5, 6, 7, 8 ile etkileşim. Kemirgenler, yumurtalık çevreleyen ve yumurtalık sürekli eşsiz bir bursal membran var. Kemirgen Bu benzersiz anatomisini orthotopically over tümör hücrelerinin enjeksiyonu sağlar. Böylece İntrabursal zarının içinde büyüyen ve tümör ilerledikçe periton boşluğuna yayılan Intrabursally enjekte over tümör hücrelerinin, insan hastalığına benzer şekilde davranırlar. Hücreleri stabil bir şekilde ifade luciferases veya floresan proteinlerle enjeksiyon da, gerçek zamanlı olarak tümör hücrelerinin izleme davranışı sağlar. Bioluminescent ve / veya floresan görüntüleme teknolojisi sayesinde, zaman ve non-invaziv bir şekilde 9, 10, 11 çalışma tümör büyümesi, dağıtım ve regresyon uzun bir süre boyunca sürekli görüntü tümör hücreleri yapar. Ortotopik modeli kuran, hızlı enjeksiyon üzerine bursa iğneyi çıkarmak için kritik öneme sahiptir. Ani iğne mühürler ponksiyon sitesi çıkarılması ve enjekte edilen hücrelerin dışarıya sızmasını önler. Ancak, aynı zamanda, hareketin bursa gözyaşı nazik olmalıdır. Enjeksiyon sırasında sızıntı meydana gelirse, karın içinde tohum hücreleri neden ve olası erken yumurtalık dışına yayılan çalışma, yani bulandırabilir. Bu durumda, belli bir hayvan kaydedildi ve periton tedavisi ya da alternatif sonraki analizlerde elimine önce birden fazla tümör sitelerinin gelişimi için takip. Ağızdan sonda gerçekleştirmeden önce, bu hayvanın başının ucundan son kaburga ölçerek gavaj tüpün uzunluğu kontrol etmek için kritik öneme sahiptir. Hayvan burnu tüp işaretlemek için yararlı olur ve bu işareti geçmiş tüp geçemiyor. Bu işareti geçmiş tüpün yerleştirilmesi, mide perforasyonu neden olabilir. Tüpün uzunluğu Belirlenmesi 20 kapsamında gr ağırlığında küçük hayvanlar veya hayvanların özellikle önemlidir. Yemek borusundan aşağı gavaj iğne yerleştirilmesi üzerine, hiçbir direniş ya da hayvan mücadele olmalıdır. Bu reflüye yol ve daha sonra yanlış doz hacmi teslim yanı sıra hayvan stres ekleyerek gibi çözeltisi veya süspansiyonu çok hızlı bir şekilde yönetmek için önemlidir. Zaman zaman karşılaştırılabilir görüntüleme sonuçlar için, lusiferaz substrat ve görüntüleme enjeksiyonu arasındaki zaman tutarlı tutmak için arzu edilir. Substrat enjeksiyondan sonra dizi görüntü sinyalleri kinetiği dikkate alarak ve zaman atlamalı tespit edilebilir. Yumurtalık kanseri gelişimi ve yayılması daha iyi anlaşılması ve değerlendirilmesi, sonuçta, bu ölümcül hastalığı olan hasta sonucu artırabilir yeni tedavi rejimleri, yumurtalık kanseri, oral ilaç teslimat ve in vivo görüntüleme ortotopik fare modeli geliştirilmesi gerekli teknikleri.

<table><tbody><tr><td>Ketamine Hydrochloride</td><td>Vedco, Inc.</td><td>Not Available</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine Hydrochloride</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>Not Available</td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Vedco, Inc.</td><td>Not Available</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin Potassium Salt</td><td><a href="http://www.perkinelmer.com/Catalog/Category/ID/Substrates" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Caliper Life Sciences</a></td><td>122796</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging and therapeutic treatments in an orthotopic mouse model of ovarian cancer

İnsan kanser ve tedaviye yanıt ortotopik hayvan modellerinde daha iyi temsil edilmektedir. Bu makale, yumurtalık kanseri ortotopik fare modelinde, in vivo görüntüleme sistemi kullanarak gerçek zamanlı olarak ilaç tedavisine yanıt tümör hücresi davranış oral ilaçlar teslim ve izleme ile kanser tedavisi gelişme açıklamaktadır . Bu ortotopik modeli, lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin her yumurtalık içine fare bursa içine doğrudan enjekte edilerek topikal olarak uygulanır. D-luciferase, ateşböceği lusiferaz bir substrat enjeksiyon üzerine, lusiferaz ifade hücreleri biyoparlaklık sinyaller oluşturur. Bu sinyal in vivo görüntüleme sistemi tarafından tespit edilir ve bireysel hayvanlarda tümör büyümesini, dağıtım ve regresyon izleme non-invaziv bir araç sağlar . Maksimum doz hacmi için 10 ml / kg vücut ağırlığı mide doğrudan teslim edilmek üzere bir ağızdan sonda ile ilaç yönetimi sağlar ve klinik tedavilerde ilaçlar teslim yakından benzer. Bu nedenle, teknikleri, burada, yumurtalık kanseri, oral ilaç teslimat ve in vivo görüntüleme ortotopik fare modeli geliştirme açıklanan insan yumurtalık kanseri ve tedavi daha iyi anlaşılması için yararlı olur ve bu hastalık hedefleyen artıracaktır.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer at JoVE.com

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme izlenir<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme sistemi.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

in-vivo-imaging-therapeutic-treatments-an-orthotopic-mouse-model

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

33.2K Görüntüleme.  Women's Cancer Program.  中文 

Video: In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is important to control peritoneal dissemination. However, it is still unclear how tumor cells detach from primary lesions and attach to the mesothelium. The establishment of an appropriate animal model is needed to gain an understanding of the mechanism of peritoneal dissemination in vivo. In the current study, we introduce the process from the local injection of EOC cells into the murine ovarian surface to the development of metastasis, including the peritoneum and distant organs. Female nude mice (BALB/c nu/nu) at 8 weeks of age were used. Under a microscopic field of view, EOC cells (1 x 105 cells/&#181;l of medium-extracellular matrix (ECM)-based hydrogel/unilateral ovary/mouse) were injected into murine ovaries through a retroperitoneal approach from the dorsal flank. This proposed method is a less invasive procedure for the mouse and minimizes damage to the ovary. Here, we describe the methodological steps in the development of the original and metastatic tumor formation of EOC.

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

To clarify the multistep process of peritoneal dissemination of ovarian carcinoma, the current study presents a murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with these tumor cells.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Kanser Araştırmaları

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional co-culture systems are frequently used to explicate tumor-stroma interactions, including their role in drug responses. However, many of the interactions that occur in vivo in the intact microenvironment cannot be completely replicated in these in vitro settings. Thus, direct visualization of these processes in real-time has become an important tool in understanding tumor responses to therapies and identifying the interactions between cancer cells and the stroma that can influence these responses. Here we provide a method for using spinning disk confocal microscopy of live, anesthetized mice to directly observe drug distribution, cancer cell responses and changes in tumor-stroma interactions following administration of systemic therapy in breast cancer models. We describe procedures for labeling different tumor components, treatment of animals for observing therapeutic responses, and the surgical procedure for exposing tumor tissues for imaging up to 40 hours. The results obtained from this protocol are time-lapse movies, in which such processes as drug infiltration, cancer cell death and stromal cell migration can be evaluated using image analysis software.

We describe a method for imaging response to anti-cancer treatment in vivo and at single cell resolution.

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Tıp

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant transgenic mouse models of ovarian cancer exist, these mice are expensive and take a long time to develop tumors. Intraperitoneal injection xenograft models lack human stroma and do not accurately model ovarian cancer metastasis. Even patient derived xenografts (PDX) do not fully recapitulate the human stromal microenvironment as serial PDX passages demonstrate significant loss of human stroma. The ability to easily model human ovarian cancer within a physiologically relevant stromal microenvironment is an unmet need. Here, the protocol presents an orthotopic ovarian cancer mouse model using human ovarian cancer cells combined with patient-derived carcinoma-associated mesenchymal stem cells (CA-MSCs). CA-MSCs are stromal progenitor cells, which drive the formation of the stromal microenvironment and support ovarian cancer growth and metastasis. This model develops early and diffuses metastasis mimicking clinical presentation. In this model, luciferase expressing ovarian cancer cells are mixed in a 1:1 ratio with CA-MSCs and injected into the ovarian bursa of NSG mice. Tumor growth and metastasis are followed serially over time using bioluminescence imaging. The resulting tumors grow aggressively and form abdominal metastases by 14 days post injection. Mice experienced significant decreases in body weight as a marker of systemic illness and increased disease burden. By day 30 post injection, mice met endpoint criteria of &gt;10% body weight loss and necropsy confirmed intra-abdominal metastasis in 100% of mice and 60%-80% lung and parenchymal liver metastasis. Collectively, orthotopic engraftment of ovarian cancer cells and stroma cells generates tumors that closely mimic the early and diffuse metastatic behavior of human ovarian cancer. Furthermore, this model provides a tool to study the role of ovarian cancer cell: stroma cell interactions in metastatic progression.

<meta charset="utf8"></head><body>Metastazı Teşvik Etmek İçin İnsan Stroma Kullanan Yumurtalık Kanserinin Ortotopik Bir Fare Modeli

Orthotopic engraftment of ovarian cancer cells mixed with human stromal cells provides a mouse model that exhibits rapid, diffuse metastatic behavior that is characteristic of human ovarian cancer. This model also allows for the study of tumor cell and stromal cell interactions, as well as their role in tumor progression and metastasis.

Metastazı Teşvik Etmek İçin İnsan Stroma Kullanan Yumurtalık Kanserinin Ortotopik Bir Fare Modeli

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için İn Vivo Görüntüleme

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Transkript

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo Tümör Görüntüleme ve İzleme

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Metastazı Teşvik Etmek İçin İnsan Stroma Kullanan Yumurtalık Kanserinin Ortotopik Bir Fare Modeli

Metastazı Teşvik Etmek İçin İnsan Stroma Kullanan Yumurtalık Kanserinin Ortotopik Bir Fare Modeli

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.