Bu protokol, insan CAR-T ve tümör hücrelerini kullanır ve CART19 uygulamasıyla ilişkili toksisiteleri doğru bir şekilde gösterir. Bu nedenle, klinikte gözlemlenenleri özetlemek. Bu platformu kullanmanın temel avantajı, insan T hücrelerinin ve tümör hücrelerinin kullanıldığı çevrilebilir ve klinik olarak ilgili bir model sağlamasıdır.
Bu model sadece CART19 ile ilişkili toksisitelerin verimli bir şekilde değerlendirilmesine izin vermekle kalmaz, aynı zamanda gelişmiş tedavi stratejileri yoluyla bu toksisitelerin üstesinden nasıl gelebileceğimizi daha iyi anlamamızı sağlar. Başlamak için, motor zayıflığı, kambur vücut ve vücut ağırlığı kaybı gibi sağlıklarındaki değişiklikleri değerlendirmek için CART19 uygulanan fareleri günde iki kez izleyin. Fareler motor zayıflığı ve kilo kaybı geliştirdiğinde, tümör yükünü analiz etmek için periferik kanlarını toplayın.
Ve makalede tarif edildiği gibi sitokinler için serum izolasyonu yapın. İzolasyondan sonra, serum mikro-santrifüj tüplerini 80 santigrat derecede saklayın ve multipleks tahlili kullanarak kemokinleri ve sitokinleri analiz etmek için cera kullanın. MRI görüntüleme için, 120 mikrolitre gadolinyumu 880 mikrolitre salin solüsyonu ile karıştırın ve bir mililitrelik bir insülin şırıngasına yükleyin.
Hazırlanan çözeltinin 100 mikrolitresini intraperitoneal olarak her fareye enjekte edin. Fareyi uyuşturun ve kemirgen uyumlu beşik probuna yerleştirin. Sonra dişlerini ısırma çubuğuna asın.
Farenin kafasını 25 milimetre hacimli bobine çekin ve izofluran anestezi sistemine bağlı burun konisini ayarlayın. Tarama süresince konumu korumak için ısırma çubuğunun düğmesini sıkın. Solunum değerlendirmesi için, bir solunum izleme cihazının probunu diyaframa yakın bir yere takın ve cerrahi bantla sabitleyin.
Farelerin durumunun sabit kalması için solunum hızını dakikada 20 ila 60 nefes arasında tutun. Hayvan probunu Dikey Delikli Küçük Hayvan MRI sistemi içindeki küçük deliğe yerleştirin ve hayvanın kafasını bobinin ortasına yerleştirin. Kilidi kullanarak cihazı dik konumda sabitleyin ve cihazı bilgisayara bağlayın.
Ardından, tarama konumlarını ve tarama türlerini ayarlamak için ParaVision yazılımını açın. Tüm deney grupları için tutarlı tutarken optimal sagital ve eksenel pozisyonları belirleyin. T1 ağırlıklı MRI verilerini toplamak için, 300 milisaniye tekrarlama süresi, 9,5 milisaniye yankı süresi, 4,00 X 2,00 X 2,00 santimetre görüş alanı ve 192 X 96 X 96 matris ile T1 ağırlıklı çok kesitli, çoklu eko dizisi kullanın.
T2 ağırlıklı MRI görüntüleri için, benzer parametrelere sahip çok kesitli, çok yankılı bir dizi kullanın. Taramalar tamamlandıktan sonra, probu delikten çıkarın ve dişleri ısırma çubuğundan çıkararak fareyi nazikçe çıkarın. Yazılımdan veri çıkarıldıktan sonra, hiperyoğunluk bölgelerinin miktar tayini ve 3D hacim sunumu için analiz yazılımı kullanın CD19 + tümör hücresi popülasyonları, CART19 ile tedavi edilen fareler ve akış sitometrisi kullanılarak tedavi edilmeyen fareler arasında karşılaştırıldı.
CART19 hücreleri ile tedavi edilen farelerde önemli ağırlık azalması gözlendi. Kilo kaybı, CART hücresi ile ilişkili toksisitelerle ilişkili olan CRS görünümünün bir belirtisi olarak kabul edilir. Multipleks bir test, CART19 uygulamasından önce ve sonra NSG fare serumunda sitokinlerin ve kemokinlerin ekspresyonunu ortaya çıkardı.
T2 ağırlıklı görüntüler, CART19 ile tedavi edilen farelerde nöroinflamasyon sırasında ödem ve olası inflamatuar infiltrasyon kanıtlarını ortaya çıkardı. T1 ağırlıklı MRG, beyin parankiminde kontrast artışı gösterirken, vasküler geçirgenliğin arttığını gösterir. Kemirgen beyninin üç boyutlu rekonstrüksiyonları, beyindeki gadolinyum sızıntısının hacmini oluşturan vasküler geçirgenliğe karşılık gelen T1 hiperintens bölgelerine dayalı olarak birleştirildi.
CART19 uygulamasından sonra farelerin günlük fiziksel izlenmesinin, periferik kanama ile birlikte, beyinde CRS veya nörotoksisiteyi gösteren herhangi bir değişikliği tam olarak değerlendirmek için MRG'ye devam etmenin en iyi göstergesi olacağını hatırlamak önemlidir. Bu teknoloji, ek CAR-T hücre tedavilerine yaygın olarak uygulanabilir ve bilim adamlarının yeni CAR-T hücrelerinden kaynaklanan potansiyel toksisiteleri verimli bir şekilde test etmelerini sağlayacaktır. Önerilen bu model, CAR-T hücresi ile ilişkili toksisitelerin nasıl izlenebileceğini, tedavi edilebileceğini ve yeni CAR-T-hücresi modellerini doğrulamak için kullanılabileceğini anlamada bir basamak taşıdır.
