Bu protokol, santral sinir sistemi tümörlerine yönelik CAR T-hücresi tedavisinin lokal bölgesel dağıtımını test etmek için devam eden klinik çalışmalarda kullanılan bir intraventriküler kateter sistemini çoğaltmaktadır. Bu tekniğin temel avantajı, çoklu invaziv cerrahi prosedürler gerçekleştirmeden lokal bölgesel CAR T-hücresi tedavisinin çoklu tekrarlanan dozlarını sağlayabilmesidir. Bu sistem, farklı dağıtım bölgelerindeki farklı terapötikleri araştırmak için kullanılabilir ve böylece sinirbilimdeki sayısız araştırma alanına dair fikir verebilir.
Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi traşlı kafayla ameliyat masasına yerleştirin ve bir spatula kullanarak stereotaktik kolun altını yavaşça açın. Kanülü forsepsli olarak yerleştirin ve beyaz plastik kısmın yarısı ila üçte ikisi ve kanülün beş milimetresi açıklığın dibinden çıkıntı yapana kadar koldaki vidayı sıkarak sabitleyin. Farenin üst dişlerini stereotaksik aparatın ısırık çubuğuna yerleştirin ve sabitleyin.
Burun konisini öne doğru çekin ve sıkın, farenin izofluran soluduğundan emin olun. Ardından, aşırı basınçtan kaçınarak fareyi kulak manşetleri veya kulak çubukları kullanarak ısıtılmış stereotaksik aparata monte edin. Cerrahi bölgeyi dezenfekte edin ve makalede açıklandığı gibi kafatasına paralel bir kesim yapın.
Fasyayı uzaklaştırmak için pamuklu uç çubukları kullanın. Kraniyal plakaların buluştuğu ön ve arka işaretlere karşılık gelen kafatasındaki yer işaretlerini, bregma ve lambda'yı tanımlayın. Akriliği tutturmak için bir yüzey oluşturmak için, bir neşter kullanarak kafatası boyunca yavaşça birkaç yarık açın.
Stereotaksik kolu kullanarak, kanülü ilgi çekici yere lokalize edin. Kanül ucunu kafatası yüzeyinin bir ila iki milimetre üzerine kaldırın ve istenen koordinatlara gidin. 18 gauge'lik bir iğne veya cerrahi matkap kullanarak, açıkta kalan kafatasında kanülün girdiği yerden uzakta iki vida deliği açın ve kanül için yeterli alan sağlayın.
Matkabı kafatasına yapışana kadar vida deliğinden döndürün. Düz uçlu bir tornavida ile deliklere iki vida yerleştirin ve sabitleyin. Ardından, sabitlendiğinden emin olmak için vidayı yavaşça yukarı çekin.
Bir kanül yerleştirmek için, 18 gauge iğne veya cerrahi matkap kullanarak belirlenen koordinatlarda kafatasında bir delik oluşturun. Stereotaktik kolu kullanarak, kanülü istenen DV koordinatına indirin. Porselen 12 delikli bir plakada yaklaşık 0.3 gram akrilik reçine tozu ve 10 ila 15 damla sıvıda, hazırlanan viskoz beyaz renkli malzemeyi bir mililitrelik bir şırıngaya yükleyin.
Kafatasını kaplayın ve kanül ve vidanın etrafındaki boşlukları doldurun. Çimento esnekken stereotaktik kol üzerindeki vidayı gevşetin. Kanülü alt açıklıktaki tutucudan serbest bırakmak için yavaşça bir spatula kullanın ve stereotaktik kolu fareden uzağa çekin.
Çimento kuruduktan sonra, kukla kanülü kılavuz kanülüne yerleştirin ve sıkıca sabitlemek için saat yönünde döndürün. İşlem tamamlandıktan sonra, kurtarma için fareyi ısıtılmış ev kafesine geri getirin. Tedavi kanülünü hazırlamak için, üstünü PKG tüpüne yerleştirin.
Daha sonra, tedavi şırıngasını CAR T-hücresi süspansiyonu ile doldurun ve tedavi kanülünün üstünü kaplayan PKG tüpünün diğer ucundan yerleştirin. Fareyi uyuşturduktan sonra, kılavuz kanülü forseps kullanarak tabana sabitleyin. Kılavuz kanüle erişim sağlamak için kukla kanülü sökün ve çıkarın.
CAR T hücrelerini bir dakika boyunca demleyin ve tedavi kanülünü bir dakika daha yerinde tutun. Tedavi kanülünü çıkardıktan sonra, kukla bir kanülü sıkıca vidalayın. Daha sonra, ağrı kontrolü için meloksikamı deri altından uygulayın.
GPC2'ye yönelik CAR T-hücresi tedavisi, medulloblastomda önemli tümör regresyonuna ve talamik diffüz orta hat glioma modelinde önemli ölçüde uzamış sağkalıma neden oldu. Kılavuz kanülü tümör içi bir bölgeye yerleştirirken, kukla ve tedavi kanülü projeksiyon uzunluklarını hesaba katmak için dorsal-ventral koordinatların tümör enjeksiyonundan daha yüzeysel olabileceğini anlamak önemlidir.
