In vitro ölçü, ilaç parçalanmasının etkilerini, çözünme davranışını ve aktif bileşenin içeriğini dikkate alan katı Çin tıbbı preparatının çözeltilerinin çözünmesini incelemek için uygun bir önlemdir. Çok indeksli bileşenin algılanması, nötr etkiyi ve farklı bileşenlerin çözünme farkını daha iyi yansıtabilir. Prosedürü gösterecek olan Quinyun Du, laboratuvarımdan olağanüstü bir öğrenci olacak.
Başlamak için, referans madde stok çözeltisini elektronik analitik terazide ayrı ayrı 10,6 miligram salidrosit, 5,24 miligram gallik asit ve 5,21 miligram etil gallik asit tartarak hazırlayın. Daha sonra bunları ayrı ayrı beş mililitrelik hacimsel bir şişeye ekleyin. Daha sonra çözünmesi için HPLC sınıfı metanol ekleyin ve beş mililitreye kadar seyreltin.
Ve son olarak, sırasıyla mililitre başına 2.120, 1.048 ve 1.042 miligram kütle konsantrasyonlarına sahip referans madde stok çözeltisini elde etmek için iyice çalkalayın. Test numunesi çözeltisini hazırlamak için, 30 dakika boyunca ultrasonik temizleme makinesi kullanarak 10 mililitre HPLC sınıfı metanol ile 2.8 gram rhodiola granülü çıkarın. Ardından, sistem uyarlanabilirlik testi için 0,22 mikrometrelik bir filtre ile filtreleyin.
Daha sonra mililitre salidrosit başına 0.590 miligram, mililitre gallik asit başına 2.030 miligram ve mililitre etil galat başına 1.930 miligram içeren karışık bir referans çözeltisi hazırlayın. Rhodiola granüllerinin her bir karakteristik bileşeninin teorik içeriğini elde etmek için, 500 mililitre konik şişeye 2.8 gram rhodiola granülü yerleştirin. 200 mililitre ultra saf su ekleyin ve 60 dakika boyunca ultrasonik olarak ekstrakte edin.
Ardından 0,22 mikrometre filtre ile filtreleyin. Test çözeltisinin içeriğini belirledikten sonra, makalede açıklandığı gibi yüksek performanslı sıvı kromatografisi için kromatografik koşulları ayarlayın. Doğrusal ilişkiyi araştırmak için, gallik asit ve etil galatın referans stok çözeltilerini ve standart bir eğri çizmek için gradyan konsantrasyon çözeltisini elde etmek üzere salidrositin referans stok çözeltilerini seyreltin.
Ardından, karışık referans çözeltisinin 10 mikrolitresini HPLC sistemine günde altı kez enjekte edin ve her bir özellik bileşeninin tepe alanını kaydederken numuneleri aynı HPLC koşullarıyla çalıştırın. Daha sonra hazırlanan numune çözeltisinden 10 mikrolitre enjekte edin ve HPLC'nin tepe bölgelerini farklı zaman aralıklarında kromatografik koşullara göre belirleyin. Daha önce gösterildiği gibi test numunesi çözeltisini hazırlamak için aynı rhodiola granül grubundan altı numune alın ve her numunenin 10 mikrolitresini HPLC sistemine enjekte edin.
Tekrarlanabilirliği belirlemek için örnekleri daha önce gösterildiği gibi çalıştırın. Test çözeltisi için aynı rhodiola granül partisinin altı porsiyonunu hazırladıktan sonra, her bir indeks bileşeninin referans substratının yaklaşık% 50'sini ekleyin. Bu örnekleri, makalede açıklandığı gibi iyileşme oranını hesaplamak için daha önce gösterildiği gibi HPLC sisteminde çalıştırın.
Çözünme testini gerçekleştirmek için, ilaç çözünme aparatının çözünme kabına 100 mililitre ultra saf su ekleyin ve sıcaklığı 100 rpm'lik bir dönme hızıyla 37 santigrat derecede tutun. Daha sonra bir çözünme kabına 2.8 gram rhodiola granülü ekleyin ve çözünme süresini hemen kaydetmeye başlayın. Farklı zaman aralıklarında bir enjektör ile numunenin toplam bir mililitresini toplayın ve çözünme kabındaki hacmi hemen aynı sıcaklıkta bir çözünme ortamı ile oluşturun.
Toplanan numuneleri derhal 0.22 mikrometre mikro gözenekli bir membrandan doldurun ve sonraki filtratı alın. Her bileşenin içeriğini belirledikten sonra, HPLC ile her zaman noktasında, her zaman noktasının çözünmesini ve makalede açıklandığı gibi kümülatif çözünmeyi hesaplayın. Numunenin kromatogramı ve referans çözeltisi elde edildi.
Gallik asit, salidrosit ve etil gallatına karşılık gelen üç farklı pik, elüsyon gradyanının rodiola granüllerindeki üç indeks bileşeni için iyi bir çözünürlüğe sahip olduğunu göstermektedir. Her bileşenin çözünme eğrileri, gallik asidin kümülatif çözünmesinin bir dakika sonra% 80'in üzerinde olduğunu göstermektedir. Salidrosit ve etil gallik asit için, beş dakika sonra% 65'in üzerindeydi.
Bununla birlikte, her bir indeks bileşeninin kümülatif çözünmesi 30 dakika sonra azalmıştır. Standart eğrinin seyreltme sorununu ayarlayarak, numune işleminin ön deneyine göre, özel toplama zaman noktasını kaçırmalarını önlemek için numuneler hızlı bir şekilde toplanmalıdır.
