La medida in vitro es una medida adecuada para inspeccionar la disolución de soluciones de preparación sólida de medicina china que tienen en cuenta los efectos de la desintegración del fármaco, el comportamiento de disolución y el contenido del ingrediente activo. La detección del componente multiíndice puede reflejar mejor la influencia neutral y la diferencia de disolución de los diferentes componentes. Demostrando el procedimiento estará Quinyun Du, un estudiante extraordinario de mi laboratorio.
Para empezar, prepare la solución madre de la sustancia de referencia pesando 10,6 miligramos de salidrocida, 5,24 miligramos de ácido gálico y 5,21 miligramos de ácido ílico por separado en una balanza analítica electrónica. A continuación, añádalos individualmente en un matraz aforado de cinco mililitros. Luego agregue metanol de grado HPLC para disolver y diluir a cinco mililitros.
Y finalmente, agite bien para obtener la solución madre de sustancia de referencia con concentraciones de masa de 2.120, 1.048 y 1.042 miligramos por mililitro, respectivamente. Para preparar la solución de muestra de prueba, extraiga 2,8 gramos de gránulos de rhodiola con 10 mililitros de metanol de grado HPLC, utilizando una máquina de limpieza ultrasónica durante 30 minutos. Luego fíjelo con un filtro de 0.22 micrómetros para la prueba de adaptabilidad del sistema.
Luego prepare una solución de referencia mixta que contenga 0.590 miligramos por mililitro de salidrocida, 2.030 miligramos por mililitro de ácido gálico y 1.930 miligramos por mililitro de galato de etilo. Para obtener el contenido teórico de cada componente característico de los gránulos de rhodiola, coloque 2,8 gramos de gránulos de rhodiola en un matraz cónico de 500 mililitros. Agregue 200 mililitros de agua ultrapura y extraiga ultrasónicamente durante 60 minutos.
Luego fílvelo con un filtro de 0,22 micrómetros. Después de determinar el contenido de la solución de ensayo, establezca las condiciones cromatográficas para la cromatografía líquida de alta resolución como se describe en el manuscrito. Para investigar la relación lineal, diluir las soluciones madre de referencia de ácido gálico y galato de etilo, y las soluciones madre de referencia de salidrocida para obtener la solución de concentración de gradiente para dibujar una curva estándar.
Luego inyecte 10 microlitros de la solución de referencia mixta en el sistema HPLC seis veces al día y ejecute las muestras con las mismas condiciones de HPLC, mientras registra el área pico de cada componente de la característica. A continuación, inyecte 10 microlitros de la solución de muestra preparada y determine las áreas pico de la HPLC de acuerdo con las condiciones cromatográficas en diferentes intervalos de tiempo. Tome seis muestras del mismo lote de gránulos de rhodiola para preparar la solución de muestra de prueba como se demostró anteriormente, e inyecte 10 microlitros de cada muestra en el sistema de HPLC.
Ejecute los ejemplos como se demostró anteriormente para determinar la reproducibilidad. Después de preparar seis porciones del mismo lote de gránulos de rhodiola para la solución de prueba, agregue aproximadamente el 50% del sustrato de referencia de cada componente índice. Ejecute estas muestras en el sistema HPLC, como se demostró anteriormente, para calcular la tasa de recuperación como se describe en el manuscrito.
Para llevar a cabo la prueba de disolución, agregue 100 mililitros de agua ultrapura en la taza de disolución del aparato de disolución del medicamento y mantenga la temperatura a 37 grados centígrados con una velocidad de rotación de 100 rpm. A continuación, agregue 2,8 gramos de gránulos de rhodiola en una taza de disolución y comience a registrar la duración de la disolución inmediatamente. Recoja un total de un mililitro de la muestra con un inyector en diferentes intervalos de tiempo y enrase el volumen en la taza de disolución con un medio de disolución a la misma temperatura inmediatamente.
Llene inmediatamente las muestras recolectadas a través de una membrana microporosa de 0,22 micrómetros y tome el filtrado posterior. Después de determinar el contenido de cada componente, en cada punto de tiempo por HPLC, calcule la disolución de cada punto de tiempo y la disolución acumulativa como se describe en el manuscrito. Se obtuvo el cromatograma de la muestra y la solución de referencia.
Tres picos diferentes correspondientes al ácido gálico, salidrocida y galato de etilo muestran que el gradiente de elución tenía una buena resolución para los tres componentes del índice en los gránulos de rhodiola. Las curvas de disolución de cada componente muestran que la disolución acumulada del ácido gálico fue superior al 80% después de un minuto. Mientras que para salidrocida y ácido gálico etílico, fue superior al 65% después de cinco minutos.
Sin embargo, la disolución acumulada de cada componente del índice disminuyó después de 30 minutos. Ajustando el problema de dilución de la curva estándar, de acuerdo con el experimento preliminar del tratamiento de la muestra, las muestras deben recolectarse rápidamente para evitar que pierdan un punto de tiempo de recolección especial.
