A medida in vitro é uma medida adequada para inspecionar a dissolução de soluções de preparação sólida de medicina chinesa que levam em conta os efeitos da desintegração de drogas, o comportamento de dissolução e o conteúdo de ingrediente ativo. A detecção de componentes multiíndices pode refletir melhor a influência neutra e a diferença de dissolução de diferentes componentes. Demonstrando o procedimento será Quinyun Du um aluno extraordinário do meu laboratório.
Para começar, preparar a solução-mãe da substância de referência pesando 10,6 miligramas de salidrocida, 5,24 miligramas de ácido gálico e 5,21 miligramas de ácido etílico-gálico separadamente numa balança analítica electrónica. Em seguida, adicione-os individualmente num balão aferido de cinco mililitros. Em seguida, adicione metanol de grau HPLC para dissolver e diluir para cinco mililitros.
E, finalmente, agitar bem para obter a solução-estoque de substância de referência com concentrações em massa de 2,120, 1,048 e 1,042 miligramas por mililitro, respectivamente. Para preparar a solução da amostra de teste, extraia 2,8 gramas de grânulos de rhodiola com 10 mililitros de metanol de grau HPLC, usando uma máquina de limpeza ultra-sônica por 30 minutos. Em seguida, filtre-o com um filtro de 0,22 micrômetro para o teste de adaptabilidade do sistema.
Em seguida, prepare uma solução de referência mista que contenha 0,590 miligramas por mililitro de salidrocida, 2,030 miligramas por mililitro de ácido gálico e 1,930 miligramas por mililitro de galato de etila. Para obter o conteúdo teórico de cada componente característico dos grânulos de rhodiola, colocar 2,8 gramas de grânulos de rhodiola em balão cónico de 500 mililitros. Adicione 200 mililitros de água ultrapura e extraia por ultrassom por 60 minutos.
Em seguida, filtre-o com um filtro de 0,22 micrômetro. Após a determinação do teor da solução de ensaio, definir as condições cromatográficas para a cromatografia líquida de alta eficiência, tal como descritas no manuscrito. Para investigar a relação linear, diluir as soluções-estoque de referência de ácido gálico e galato de etila, e as soluções-estoque de referência de salidrocida para obter a solução de concentração de gradiente para desenhar uma curva padrão.
Em seguida, injete 10 microlitros da solução de referência mista no sistema de HPLC seis vezes ao dia e execute as amostras com as mesmas condições de HPLC, enquanto registra a área de pico de cada componente de recurso. Em seguida, injete 10 microlitros da solução de amostra preparada e determine as áreas de pico da HPLC de acordo com as condições cromatográficas em diferentes intervalos de tempo. Colher seis amostras do mesmo lote de grânulos de rhodiola para preparar a solução da amostra de ensaio, tal como demonstrado anteriormente, e injectar 10 microlitros de cada amostra no sistema de HPLC.
Execute as amostras conforme demonstrado anteriormente para determinar a reprodutibilidade. Depois de preparar seis porções do mesmo lote de grânulos de rhodiola para a solução de ensaio, adicionar cerca de 50% do substrato de referência de cada componente do índice. Execute essas amostras no sistema de HPLC, como demonstrado anteriormente, para calcular a taxa de recuperação conforme descrito no manuscrito.
Para realizar o teste de dissolução, adicione 100 mililitros de água ultrapura no copo de dissolução do aparelho de dissolução de drogas e mantenha a temperatura em 37 graus Celsius com uma velocidade de rotação de 100 rpm. Em seguida, adicione 2,8 gramas de grânulos de rhodiola em um copo de dissolução e comece a registrar a duração da dissolução imediatamente. Recolher um total de um mililitro da amostra com um injector em intervalos de tempo diferentes e completar o volume no copo de dissolução com um meio de dissolução à mesma temperatura imediatamente.
Encha imediatamente as amostras coletadas através de uma membrana microporosa de 0,22 micrômetro e pegue o filtrado subsequente. Depois de determinar o conteúdo de cada componente, em cada ponto de tempo por HPLC, calcule a dissolução de cada ponto de tempo e a dissolução cumulativa conforme descrito no manuscrito. O cromatograma da amostra e a solução de referência foram obtidos.
Três picos diferentes correspondentes ao ácido gálico, salidrocida e galato de etila mostram que o gradiente de eluição teve uma boa resolução para os três componentes do índice em grânulos de rhodiola. As curvas de dissolução de cada componente mostram que a dissolução cumulativa do ácido gálico foi superior a 80% após um minuto. Enquanto para o salidrocida e o ácido etílico-gálico, foi superior a 65% após cinco minutos.
No entanto, a dissolução cumulativa de cada componente do índice diminuiu após 30 minutos. Ajustando a questão da diluição da curva padrão, de acordo com o experimento preliminar do tratamento da amostra, as amostras devem ser coletadas rapidamente para evitar que percam um ponto de tempo de coleta especial.
