Bu protokol, hem EST tespiti hem de faj figürü için çok düzeyli bir yöntem sunar. Ayrıca, farklı kontrol teknolojilerinin EMR seviyelerini karşılaştırmak için tasarruflar için büyük bir endeks tanıttı. Bu uygun maliyetli teknik akıllı, yüksek verimli ve çok işlevlidir.
20.000 salgın gen ve analitik faj toplayan bir veteriner izleme ağı olan VAMS'ın kurulmasını sağlamıştır. Bu yöntem aynı zamanda tıpta, tarımda, hayvan kalp pilinde ve balıkçılıkta patojenik bakterilerin izlenmesi ve kontrol edilmesi için de kullanılabilir. Bu protokol ve bu şirket belgesinin bir olmasını sağlamalıdır.
Teknik eğitim rehberi ile biz. Bunu takip etmek, herkesin kısa sürede tekniğe hakim olmasına yardımcı olacaktır. Kalite kontrol organizması E.coli'yi ve 93 test salmonella suşunu Mueller-Hinton agar plakalarında inkübe ederek başlayın.
Daha sonra, her bir suşun hazırlanan aşısını 10 kez seyreltin. 200 mikrolitre steril normal salini, negatif kontrol olarak 96 oyuklu bir plakanın a-1 kuyusuna aktarın. Daha sonra iki E.coli süspansiyonunu sırasıyla pozitif ve kalite kontrolleri olarak a-2 ve a-3 kuyularına pipetleyin.
Kalan 93 kuyucuğa, 200 mikrolitre seyreltilmiş test suşu ekleyin. Antimikrobiyal agar plakalarının hazırlanması için. İlk olarak, LAR indeksine göre test edilen farklı antibakteriyel ajanlar için konsantrasyon aralıklarını ayarlayın.
CLSI standart agar seyreltme yöntemini izleyerek antibiyotik çözeltisi için bir log-iki ikiye katlama seyreltme şeması gerçekleştirin. Şimdi 18 mililitre erimiş Mueller-Hinton agar ortamı içeren sterilize edilmiş bir cam şişeye iki mililitre antimikrobiyal çözelti ekleyin. İyice karıştırdıktan sonra, bir biyo güvenlik kabini içindeki plakalara dökün.
Agarın oda sıcaklığında katılaşmasına izin verin. Agar yüzeyinin kurumasını sağlamak için plakaların kapağının altında bir boşluk bıraktığınızdan emin olun. İnkübe edilmiş plakaların alt tarafında antimikrobiyal ajan türlerini ve ilgili konsantrasyonlarını etiketleyin.
Her bir antimikrobiyal ajan için çoklu inkübe edilmiş plakaları, log iki katına çıkan seyreltme sırasına göre düzenlenmiş bir yığın halinde düzenleyin. Son olarak, her ajan için kontrol görevi görecek iki ilaçsız agar plakası hazırlayın. Bir biyo güvenlik kabini içindeki 96 noktalı matrisli bir aşılayıcının desteğine sterilize edilmiş bir aşılama pimi plakası takın.
Daha sonra, hazırlanan tohum bloğunu test edilmiş suşlar ve mobil taşıyıcı üzerinde bir agar inkübe plakası ile düzenleyin. Mobil taşıyıcıyı, tohum bloğu aşılama pimi plakasının altına gelene kadar itin. Şimdi çalıştırma koluna basın ve 96 pimi tohum bloğunun 96 kuyusundaki aşıya doğru yönlendirerek aşılama pimi plakasını indirin.
Çalıştırma kolunu kontrollü bir şekilde serbest bırakın ve her bir aşıyı iyice karıştırmak ve daldırmak için aşılama pimi plakasını otomatik olarak sıfırlayın, çalıştırma kolunu iki ila üç kez itin. Daha sonra, inkübasyon plakası aşılama pimi plakasının altında olacak şekilde taşıyıcı plakayı kaydırın ve konumlandırın. Çalıştırma kolunu aşağı bastırın, aşılama pimi plakasını indirin ve inkübe edilmiş plakanın yüzeyi ile tam teması sağlamak için bir ila iki saniye bırakın.
Bir tur aşılamayı tamamlamak için çalıştırma kolunu bırakın. İnkübe edilmiş plakayı değiştirin ve antimikrobiyal agar plakaları partisi tamamlanana kadar işlemi tekrarlayın. Başka bir test edilmiş suş grubunu aşılamak için yeni bir aşılama pimi plakasına ve tohum bloğuna geçin.
Aşılanmış antimikrobiyal agar plakalarını, aşı noktalarından gelen nem tamamen agar içine emilene kadar oda sıcaklığında inkübe edin. İnkübasyondan sonra, plakaları ters çevirin ve inhibe edilmemiş bakterilerin koloniler oluşturmasına izin vermek için inkübasyona devam edin. Görüntü toplama ve veri istatistiklerini gerçekleştirmek için, programı başlatmak için 96 nokta vuruşlu AST görüntü alma sistemine tıklayarak başlayın.
Görev çubuğundan test bilgileri'ni seçin. Yeni bir test görevi oluşturmak için yeni'ye tıklayın ve gerekli ayrıntıları doldurun. Ardından, yeni oluşturulan görevi seçmek için veri toplamaya ve ardından fotoğraf ve test öğesine basın.
Antibiyotiğin başlangıç konsantrasyonunu seçmek için antibiyotik adını ve gradyanını seçmek için antibiyotikleri seçin. Son olarak, görüntü alma dönüştürücüsü ile bağlantı kurmak için bağlan'a tıklayın. Ardından, inkübe edilmiş plakaları algılama plakası tabanına yerleştirin ve bunları görüntü elde etme dönüştürücüsüne yerleştirin.
Plakaların görüntülerini çekmek için koleksiyona tıklayın. Antibiyotiklere basın ve bir sonraki plaka setini seçin. Başlangıç gradyanını belirlemek için gradyanı seçin, ardından bir sonraki görüntü toplama turuna geçin.
Koloni oluşumunu belirlemek ve görüntüleri minimum inhibitör konsantrasyonlara, yani MIC değerlerine dönüştürmek için gönder'e tıklayarak prosedürü sonlandırın. Tüm MIC sonuçlarına erişmek için sorguya tıklayın. Farklı fajlar üretmek için çift katmanlı agar yöntemini kullanarak başlayın.
Fajları uygun bir paralel konsantrasyona seyreltin ve 96 kuyulu tohum bloğuna 200 mikrolitre faj aşısı ekleyin. Daha sonra, incelenecek her suş için çift katmanlı bir inkübe plakası hazırlayın. Kurumasını sağlamak için çift katmanlı plakanın kapağının altında bir boşluk bırakın.
Hazırlanan faj tohum bloğunu ve çift katmanlı plakayı 96 nokta vuruşlu inokülatörün mobil taşıyıcısına yerleştirin. Tüm fajları yarı agar yüzeyine aktarın. Tüm inoküler nem yarı agar içine emilene kadar plakaların oda sıcaklığında kalmasına izin verin.
Şimdi test edilen suşlar için plakaları 37 santigrat derecede dört ila altı saat inkübe edin. Her bir çift katmanlı plakanın deneysel sonucunun görüntüsünü elde etmek ve kaydetmek için görüntü elde etme dönüştürücüsünü kullanın. Elde edilen görüntülere dayalı olarak farklı nokta şekillerinin sayısını ve morfolojilerini bir elektronik tabloya kaydedin ve farklı faj türlerinin ilgili oranlarını hesaplayın.
Ampisilinli plakalarda salmonella büyümesinin morfolojik çalışması, a-1'deki negatif kontrolün büyüme göstermediğini gösterdi. A-4'teki salmonella suşunun MIC'si mililitre başına 64 mikrogram iken, a-5'inki mililitre başına 16 mikrogram idi. Ampisilin, siprofloksasin ve amoksisilin-klavulanik asidin yüzde direnç değerleri %50'den yüksekken, doksisiklin, florfenikol, sefotaksim ve enrofloksasin %30 ila %50 arasında idiGentamisin, amikasin ve meropenem %30'dan az yüzde direnç değerleri gösterdiSiprofloksasin ve amoksisilin-klavulanik asidin LAR indeksleri önemli ölçüde ertelendi.
Çift katmanlı plakalar üzerinde salmonella büyümesinin morfolojik analizleri, fajların dört ana nokta morfolojisinin gözlendiğini göstermiştir. Yuvarlak berrak litik nokta, plakadaki konakçıyı güvenilir bir şekilde öldürebilen, ancak o konakçının pahasına başarılı bir şekilde çoğalabilen veya çoğalamayan bir fajdan geliyordu. Plakların toplanması gerçek plaklardan oluşmuştur.
Bulanık litik nokta, plakadaki konakçıyı güvenilir bir şekilde öldürmeyen ve bu konakçının pahasına başarılı bir şekilde çoğalabilen veya çoğalamayan bir fajdan kaynaklandı. Litik olmayan nokta, litik olmayan doğayı gösterdi. Bu teknik, 96 agar lensi bir kerede kolayca verimli bir şekilde aktarır ve cihazlar görüntüleri otomatik olarak tanır ve ardından çizgi zarını hesaplar.
Bu teknolojinin, fajların araştırılmasını ve sanayileşmesini teşvik etmesi bekleniyor ve fajların uygulanması, AMR problemini azaltmanın ve çözmenin şaşırtıcı yollarından biri.
