Bu çalışma Şangay Kritik Klinik Uzmanlıklar İnşaat Projesi (Hibe Numarası: Shslczdzk04001) tarafından desteklenmiştir; Şanghay Bilim ve Teknoloji Komisyonu'nun Yelken programı (Hibe Numarası: 22YF1444300); Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi bütçesi dahilindeki projeler (Hibe Numarası: 2021LK091).

Bu çalışma Fudan Üniversitesi Nörobiyoloji Enstitüsü Ağrı Laboratuvarı'nda gerçekleştirildi. Deneyler onaylandı ve tüm cerrahi prosedürler ve hayvanların taşınması için Uluslararası Ağrı Araştırmaları Derneği (LASP) tarafından oluşturulan laboratuvar hayvanlarının korunmasına yönelik yönergelere sıkı sıkıya bağlı kaldı. Bu çalışma için 40-50 günlük 32 erkekten oluşan, ortalama ağırlığı 220 ± 1.38 g olan temiz dereceli Sprague-Dawley (SD) sıçanlar kullanıldı. Bu sıçanlar, Çin Bilimler Akademisi, Şanghay Yaşam Bilimleri Akademisi Deneysel Hayvan Merkezi'nden elde edildi. Hayvanlara uygun şekilde bakıldı ve bağımsız havalandırma, düzenlenmiş sıcaklık (22 ± 1 °C) ve nem (%40-%50) olan özel bir odada barındırıldı. Sıçanların kafeslerinde yeterli yiyecek ve suya erişimi vardı. Laboratuvar hayvan odası, sıçanların sirkadiyen ritimlerinin düzenliliğini korumak için 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsü izledi ve belirlenmiş personel düzenli olarak dolguyu değiştirdi. Röntgen, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'ne bağlı Yueyang Entegre Geleneksel Çin ve Batı Tıbbı Hastanesi Radyoloji Bölümü'nde yapıldı.
1. Çalışma katılımcıları ve gruplandırma
<ol><li>Dört gruba 32 sıçan atayın: naif (kontrol), sahte (sahte operasyon), CCD (kronik dorsal kök ganglion sıkışması) ve CCD + Tuina (8 sıçan / grup). Sıçanlar, hayvan tesislerinde yiyecek ve suya ücretsiz erişime sahipti. NOT: Naif sıçanlara herhangi bir müdahale yapılmazken, sahte gruba CCD grubu sıçanlarla aynı cerrahi prosedür uygulandı, ancak L4 ve L5 intervertebral foramenlerinde "L" şeklinde paslanmaz çelik bir çubuk bırakılmadı. CCD grubundaki sıçanlara tam kronik dorsal kök ganglion kompresyon modeli cerrahisi uygulandı. CCD + Tuina grubundaki sıçanlar, CCD ameliyatından sonraki dördüncü günden itibaren tuina tedavisi aldı.</li>
</ol>2. Hayvan modelinin oluşturulması
<ol><li>Sıçanları uyuşturmak için izofloran uygulayın. Sıçanlar bilincini kaybettiğinde (kuyruk hareketi refleksi veya bacak fleksiyon refleksi yok), cerrahi bölgedeki saçları bir tıraş bıçağı kullanarak tıraş edin. NOT: Analjezik ilaçlar ameliyattan 15 dakika önce uygulandı ve sıçanlara 20 mg/kg tramadol ile subkutan enjekte edildi.</li>
	<li>Fareyi bir köpük tahtaya sabitleyin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve uzuvlarını ve kesici dişlerini sabitlemek için lastik bantlar kullanın. Hazırlanan alanı en az 3 döngü boyunca steril bir alkol ve iyot değişimi ile silin.</li>
	<li>"L" şeklindeki probu yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakın).<ol><li>Deriden, yüzeysel fasyadan ve derin fasyadan katman katman 2-3 cm'lik bir kesi yapmak için makas kullanın. İlk olarak, beşinci lomber omurgaya karşılık gelen anterior superior iliak omurgayı bulun. Ardından, sırayla üçüncü ve dördüncü dikenli süreçleri bulun.</li>
		<li>Dikenli işlemi dişli forseps ile sıkıştırın ve makasın dikenli işlemin sağ tarafına yakın olmasını sağlamak için kaldırın ve dikenli işlemin sağ tarafına bağlı kası kesin.</li>
		<li>Ardından, vertebral plakanın dış yüzeyine bağlı kası, sağ tarafta direnç olana kadar künt bir şekilde inceleyin. Çıkıntı zigapofiziyal eklemdir. Benzer şekilde, zigapofiziyal eklem üzerindeki kas ve fasyayı kör bir şekilde inceleyin. NOT: Sıçanın kafa yönüne işaret eden enine prosese ilk önce zigafizyal eklemin alt dış ön kısmına dokunulacaktır. Enine sürecin altında, sinir kökleri ve çevresindeki yumuşak dokularla dolu olan ve genellikle bulunması kolay olmayan intervertebral foramen bulunur.</li>
		<li>İlk olarak, intervertebral foramenin konumunu belirlemek için "L" şeklinde bir prob kullanın ve ardından intervertebral foramenlere yerleştirmek için "L" şeklinde bir paslanmaz çelik çubuk (0,4 mm çapında ve 4 mm uzunluğunda yapılması gerekir) kullanın.</li>
		<li>Dorsal kök gangliyonu başarılı bir şekilde sıkıştırılırsa, sıçan bir kuyruk hareketi ve bacak fleksiyon refleksi sergileyecektir. Paslanmaz çelik çubuğu dördüncü ve beşinci lomber intervertebral foramenlere yerleştirin. Daha sonra kas, fasya ve cildi katman katman dikin (3-0, Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	</ol></li>
	<li>Fareyi uyanana kadar termostatik bir kutuya koyun. Uyandıktan sonra, sıçanın sağ arka bacağının işlevinin normal olup olmadığını gözlemleyin. Sürüklenme varsa, operasyonun motor sinirlerine zarar verdiği ve sıçanın atılması gerektiği anlamına gelir. Sağ arka bacağın işlevi normalse, sıçan kullanılabilir ve beslenmek için bir kafese yerleştirilebilir.</li>
</ol>3. Tuina terapisi
<ol><li>Rahat bir ortam oluşturun: Tuina terapisine başlamadan önce, uyum sağlaması için fareyi 30 dakika boyunca kısıtlayıcıya alıştırın (Şekil 1). Bu cihaz, sıçanın uyluğunu tamamen açığa çıkarabilir ve hareketsiz hale getirerek Tuina manevralarını kolaylaştırabilir (bkz. NOT: Tedavi odasındaki sıcaklık 22-26 °C arasında, nem oranı %40-%50 arasında tutulmalıdır.</li>
	<li>Tuina'nın standardizasyonu: Terapistlerin Tuina'nın basıncını ve sıklığını izleyebilen ve gerçek zamanlı geri bildirim verileri sağlayabilen kablosuz parmak kılıfları taktığından emin olun. İlk olarak, Tuina'yı parmak manşonlarının geri bildirim verileriyle uygulayın, kuvveti 5 N'ye ve frekansı 2 Hz'e ayarlayın. Ardından, prosedür boyunca tutarlı bir kuvvet ve frekansı koruyarak sıçanlar üzerinde aynı manevraları yapın (Şekil 2). NOT: Önceki çalışmalarımıza dayanarak, hesaplanan optimum baskı kuvveti 5 N'dir (ayrıntılar için Tartışma bölümüne bakın).</li>
	<li>Akupunktur noktasını tanımlayın: sağ arka ekstremitenin gastroknemius kasını sıçanın Tuina alanı olarak, gastroknemius kasının iki başının birleştiği yerde, yaklaşık olarak BL5714'ün bulunduğu yerde seçin.</li>
	<li>Tuina'yı gerçekleştirin: terapistin sıçanın uyluğunun arka yönüne baktığından ve sıçanın sağ arka bacağını sağ üst uzuvlarıyla tuttuğundan emin olun. Başparmağınızı BL57 akupunktur noktasına dikey olarak yerleştirin ve 5 N'luk bir basınç uygularken ön kol ve parmakların ritmik küçük aralıklı dönme hareketi gerçekleştirmek için kuvvet uyguladığından emin olun (Şekil 3).</li>
	<li>Tedavi sırasında, manipülasyon geri bildiriminin kuvvetinin ve frekansının önceden ayarlanmış değerlere karşılık geldiğinden emin olun. Ameliyattan sonraki dördüncü günden itibaren müdahaleyi başlatın, Tuina 15 dakika boyunca günde bir kez, 18 gün boyunca sürekli olarak gerçekleştirilir.</li>
</ol>4. Ağrı için davranış testi
NOT: Davranış testleri modelleme öncesi, modelleme sonrası, müdahale günü 1, müdahale günü 3, müdahale günü 7, müdahale günü 14, müdahale günü 17 ve müdahale günü 21'de yapılmıştır.
<ol><li>Aşağıdaki adımları izleyerek Mekanik Stimülasyon Yanıt Eşiğini (Pençe Geri Çekilme Eşiği, PWT) gerçekleştirin (Şekil 4).<ol><li>Sıçanların ayaklarındaki mekanik stimülasyonun yanıt eşiğini test etmek için von Frey yöntemini kullanın. Sıçanları, 40 cm yükseklikte 10 mm × 10 mm açıklıklara sahip metal tel ızgara standına yerleştirilmiş 20 cm × 10 cm × 20 cm ölçülerinde şeffaf temperli cam bölmeye yerleştirin. Oda sıcaklığını 23 ± 2 °C'de ve çevredeki ortamı sessiz tutun.</li>
		<li>Elektronik Von Frey lifleri ile mekanik çekilme eşiğini ölçün (bkz. Sıçanın ayak merkezini, bacağını kaldırmak veya ondan kaçınmak gibi gözle görülür şekilde hareket edene kadar uyarın. Makine maksimum basınç değerini (N) otomatik olarak kaydeder.</li>
		<li>Aynı fareyi tekrar uyarmadan önce 15 saniye veya daha fazla bekleyin. Sıçanın pençelerinde dokunsal hassasiyetlenmeyi önlemek için her stimülasyonu 5 saniyenin altında tutun. Ardışık üç ölçüm 10 N'den daha az farklılık gösterene kadar testi beş kez tekrarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Termal stimülasyona yanıt olarak Pençe Çekme Gecikmesi (PWL) gerçekleştirin (Şekil 5).<ol><li>PWL'yi Hargreaves yöntemini kullanarak değerlendirin15,16. Sıçanları, 20 cm x 10 cm x 20 cm ölçülerinde şeffaf temperli camdan yapılmış, havalandırma deliği olan şeffaf bir cam kapaklı küçük bir odaya yerleştirin. Cam kapağın orta alanını, sabit bir sıcaklığa ulaşana kadar bir ısıtma plakası kullanarak 45 °C'ye ısıtın.</li>
		<li>Davranışsal test aşamasında, çevresel faktörlerin test sonuçları üzerindeki etkisini en aza indirmek için sıçanları her gün en az 2 saat davranış laboratuvarına alıştırın.</li>
		<li>Resmi testten önce, çevreye uyum sağlamalarına ve paraziti azaltmalarına izin vermek için fareleri 30 dakika boyunca davranış laboratuvarına yerleştirin.</li>
		<li>Isıtma plakasını 45 °C'ye ısıtın ve farenin arka bacaklarını ısıtma plakasına yerleştirin.</li>
		<li>Pençe çekme gecikmesi (PWL), termal stimülasyona yanıt olarak ısıtmanın başlangıcından pençe çekme refleksinin ortaya çıkmasına kadar geçen süre olarak tanımlandı. Her testte, aynı arka uzuv arka arkaya üç kez test edin ve bu arka uzuvun yanıt gecikmesini elde etmek için ortalama değer. Testten sonra, fareleri beslenmek için kafeslerine geri koyun.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Perfüzyon
<ol><li>Hazırlık: önceden %0.9 tuzlu su çözeltisi ve %4 paraformaldehit çözeltisi hazırlayın. Tuzlu su çözeltisini 37 °C sabit sıcaklığa ayarlanmış bir fırına koyun ve paraformaldehit çözeltisini daha sonra kullanmak üzere 4 °C'de buzdolabında saklayın.</li>
	<li>Anestezi uygulayın ve erişim sağlayın.<ol><li>Derin anesteziyi indüklemek için sıçanın karın boşluğuna% 25 Üretan (0.6 mL / 100 g, Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte ederek başlayın. Ayak parmağı, kornea veya dönme refleksi gözlenene kadar bekleyin. Fareyi bir köpük tahtaya sabitleyin.</li>
		<li>Göğüs kemiğini makasla kesin ve cildi ve fasyayı katman katman açın. Diyaframı kesin ve kalbi tamamen ortaya çıkarmak için her iki taraftaki kaburgaları kesin. Perikardları dikkatlice ayırın. Akciğerleri kalpten ayırın.</li>
		<li>Kalbi kendine doğru çekerek aortu çekmek ve ortaya çıkarmak için forseps kullanın. İğneyi, sol ventrikülü ve aortu düz bir çizgide ve aynı yatay düzlemde hizalayın. Daha sonra iğneyi sol ventrikülden aort içine sokun, iğne aort içinde görünene kadar.</li>
		<li>Aortu ve aort içindeki iğneyi kelepçelemek için forseps kullanın ve ardından sol atriyumu makasla kesin. Bu sırada, sol atriyumdan büyük miktarda kan fışkıracaktır. Salin çözeltisi için valfi açın ve salin enjeksiyonunu toplamda yaklaşık 150-200 mL perfüz 37 °C salin çözeltisine bağlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Salin perfüzyonu tamamlandıktan sonra, %4 paraformaldehit çözeltisine geçin ve %4 paraformaldehit çözeltisi ile 4 °C'de toplam yaklaşık 400 mL perfüzasyon yapın. Paraformaldehit perfüzyonunu başlatırken, sıçanın ön dişlerini bir çift forseps ile tutun ve bir elinizle kuyruğu tutup geriye doğru çekerken öne doğru çekin, bu da omurgayı tamamen uzatmak ve DRG örneklemesini kolaylaştırmak için intervertebral foramenleri artırmak için avantajlıdır.</li>
	<li>Perfüzyon sırasında, sıçanın karaciğeri, mezenter ve büyük omentum, karaciğer sertleşene kadar yavaş yavaş soluklaşır. Ardından, akış hızını yavaşlatın ve tüm paraformaldehit perfüze olana kadar saniyede yaklaşık 2 damlaya ayarlayın.</li>
</ol>6. Dorsal kök ganglion koleksiyonu
NOT: Perfüzyondan sonra, sıçan omurgasının bel bölümünü hızla kesin. Bu konumlandırma yöntemini kullanarak her iki taraftaki iliak krestin en yüksek noktalarını L5 lomber spinöz prosese bağlayarak L5 ve L4 intervertebral foramenini bulun ve dorsal kök ganglionunu intervertebral foramenlerden çıkarın. Spesifik toplama yöntemi aşağıdaki gibidir:
<ol><li>Omurilik kanalının (torasik omurilik kanalı) girişinden, makası omurilik kanalına sokun ve tüm laminalar tamamen çıkarılana kadar her iki taraftaki laminaları kesin ve tüm omurilik kanalını açığa çıkarın. NOT: Laminaları keserken omurilik ve omurilik kanalı dışındaki sinir köklerine zarar vermemeye dikkat edin.</li>
	<li>Omuriliği ve posterior longitudinal ligament'i dikkatlice çıkarın. İntervertebral foramenin iç deliğine bağlı dura mater'i ayırın.</li>
	<li>İnci şeklinde ve hafif sarımsı olan dorsal kök ganglionunu kelepçelemek ve çıkarmak için oftalmik forseps kullanın. NOT: Sinir dokusunun kırılganlığı ve zayıf tokluğu nedeniyle, dorsal kök ganglionunu çekerken gücü ve çekme yönünü kavramak ve kaba kuvvet kullanmamak gerekir.</li>
	<li>Dorsal kök ganglionunu çıkarırken, dorsal kök ganglionunun düzgün çekilmesini kolaylaştırmak için dura mater ve araknoid dahil olmak üzere çevredeki yumuşak dokuları önceden temizlediğinizden emin olun.</li>
	<li>Dorsal kök ganglionunu emici kağıda yerleştirin, aksonu bir bıçakla kesin ve dorsal kök ganglionunun yüzeyindeki kan damarlarını temizleyin.</li>
	<li>Kırpma işleminden sonra, dorsal kök ganglionunu tartın ve yeterli bir süre boyunca, genellikle yaklaşık 2-4 saat boyunca,% 4 konsantrasyonda ve 4 ° C sıcaklıkta %4'lük bir paraformaldehit çözeltisine daldırın, ardından dorsal kök ganglionunu kademeli dehidrasyon için önceden hazırlanmış% 10,% 20 ve% 30 PB sükroz çözeltisine (4 ° C) aktarın.</li>
</ol>7. Kriyoseksiyon
<ol><li>Dorsal kök ganglionunu 0.01 M PBS çözeltisine yerleştirerek başlayın. Onları 10 dakika çalkalayın ve ardından sükroz çözeltisini yıkayın. Dorsal kök gangliyonlarının her iki segmentinin akson liflerini dikkatlice kesin. Kriyoseksiyon makinesinin dondurma kafasını temizleyin ve buna optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiğini ekleyin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>Dondurma kafasını sıvı nitrojen içeren metal bir kabuğun yüzeyine yerleştirin, doku donana kadar bekleyin, çıkarın ve düz bir şekilde kesin. Bundan sonra, dondurma kafasını dilimleyicinin tabanına yerleştirin. Dorsal kök gangliyon dilimlerinin kalınlığı 15 mm olmalıdır. Dilimlediğiniz ince kesitleri tahta bir kutuya sırayla dizin ve -20 °C buzdolabında, ışıktan uzakta saklayın.</li>
</ol>8. Hematoksilen ve Eozin boyama
<ol><li>Bölümleri 2 dakika ksilene yerleştirin ve her biri 2 dakika boyunca %100, %95, %80 ve %70 dahil olmak üzere bir dizi alkolde kurutun. Daha sonra bölümleri 2 dakika damıtılmış suya, 1 dakika hematoksilene, 5 dakika musluk suyuyla durulama yapın ve 30 saniye boyunca% 1 tuzlu alkol çözeltisinde, ardından 30 saniye doymuş lityum karbonatta farklılaşma gerçekleştirin.</li>
	<li>Daha sonra, dilimleri her biri 2 dakika damıtılmış su ve musluk suyuna, 5 dakika eozin çözeltisine (%0,5), damıtılmış suda 1 dakika hızlı durulama, her biri %95 ve %100 alkolde 2 dakikalık iki tur, sodyum bikarbonat eklenmiş %100 ksilen içinde 30 s, her biri 3 dakikalık üç tur ksilen ve son olarak, nötr balzam ile kapatın (bkz.</li>
</ol>

Sıçan DRG Sıkıştırma Modeli için Standartlaştırılmış Tuina Protokolü

<ol>
	<li>Vos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=national+incidence,+prevalence,+and+years+lived+with+disability+for+328+diseases+and+injuries+for+195+countries,+1990-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> The Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).</li><li>Amin, R. M., Andrade, N. S., Neuman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumbar+Disc+Herniation.">Lumbar Disc Herniation.</a> Current Reviews in Musculoskeletal Medicine. 10 (4), 507-516 (2017).</li><li>Stochkendahl, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Clinical+Guidelines+for+non-surgical+treatment+of+patients+with+recent+onset+low+back+pain+or+lumbar+radiculopathy.">National Clinical Guidelines for non-surgical treatment of patients with recent onset low back pain or lumbar radiculopathy.</a> European Spine Journal. 27 (1), 60-75 (2018).</li><li>Bostelmann, R., Steiger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+&amp;#34;An+evidence-based+clinical+guideline+for+the+diagnosis+and+treatment+of+lumbar+disc+herniation+with+radiculopathy&amp;#34.">Comment on &amp;#34;An evidence-based clinical guideline for the diagnosis and treatment of lumbar disc herniation with radiculopathy&amp;#34.</a> The Spine Journal. 14 (9), 2273 (2014).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bone-setting+massage+combined+with+acupuncture+and+moxibustion+on+simple+lumbar+disc+herniation+and+its+effect+on+pain+and+sensory+disorder+of+lower+limbs.">Effect of bone-setting massage combined with acupuncture and moxibustion on simple lumbar disc herniation and its effect on pain and sensory disorder of lower limbs.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 38 (10), 244-247 (2020).</li><li>Lin, X. -. Y., Yang, J., Li, H. -. M., Hu, S. -. J., Xing, J. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+root+ganglion+compression+as+an+animal+model+of+sciatica+and+low+back+pain.">Dorsal root ganglion compression as an animal model of sciatica and low back pain.</a> Neuroscience Bulletin. 28 (5), 618-630 (2012).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+the+etiology+and+treatment+of+low+back+pain.">Animal models for studying the etiology and treatment of low back pain.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 36 (5), 1305-1312 (2018).</li><li>Zhao, X. -. y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Tuina+on+the+expression+of+TNF-&#945;,IL-6,TGF-&#946;1+and+CTGF+in+the+degenerative+tissue+of+rabbits&#8242;lumbar+intervertebral+disc.">Effect of Tuina on the expression of TNF-&#945;,IL-6,TGF-&#946;1 and CTGF in the degenerative tissue of rabbits&#8242;lumbar intervertebral disc.</a> Journal of Chengdu Medical College. 14 (6), 741-745 (2019).</li><li>Zhang, L., Li, Z. -. y., Yu, Z. -. y., Yue, X. -. y., Fu, R. -. y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABA+and+GABAAR+in+analgesic+loop+of+CCI+rats+by+pressing+manipulation+based+on+&amp;#34;Taking+Tenderness+as+Acupoints&amp;#34;+theory.">Effect of GABA and GABAAR in analgesic loop of CCI rats by pressing manipulation based on &amp;#34;Taking Tenderness as Acupoints&amp;#34; theory.</a> Journal of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. 28 (3), 50-53 (2014).</li><li>Long, B. -. c. a. l., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analgesic+effect+of+massage+on+rats+with+neuropathic+pain+and+its+mechanism.">Analgesic effect of massage on rats with neuropathic pain and its mechanism.</a> Guangxi Medical Journal. 44 (17), 2003-2009 (2022).</li><li>Al-Bedah, A., Ali, G., Aboushanab, T., Qureshi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tui+Na+(or+Tuina)+massage:+A+minireview+of+pertinent+literature,+1970-2017.">Tui Na (or Tuina) massage: A minireview of pertinent literature, 1970-2017.</a> Journal of Complementary and Alternative Medical Research. 3, 1-14 (2017).</li><li>Au, D. W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acupressure+on+anxiety:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Effects of acupressure on anxiety: a systematic review and meta-analysis.</a> Acupuncture in Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 33 (5), 353-359 (2015).</li><li>Hsiung, W. -. T., Chang, Y. -. C., Yeh, M. -. L., Chang, Y. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acupressure+improves+the+postoperative+comfort+of+gastric+cancer+patients:+A+randomised+controlled+trial.">Acupressure improves the postoperative comfort of gastric cancer patients: A randomised controlled trial.</a> Complementary Therapies in Medicine. 23 (3), 339-346 (2015).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+interconnection+between+acupoint+&amp;#34;Ch&#233;ngsh&#257;n+(BL57)&amp;#34;+and+sciatic+nerve+in+the+rat.">Neural interconnection between acupoint &amp;#34;Ch&#233;ngsh&#257;n (BL57)&amp;#34; and sciatic nerve in the rat.</a> World Journal of Acupuncture - Moxibustion. 31 (2), 129-135 (2021).</li><li>Banik, R. K., Kabadi, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+Hargreaves+method+for+assessing+threshold+temperatures+for+heat+nociception.">A modified Hargreaves method for assessing threshold temperatures for heat nociception.</a> Journal of neuroscience methods. 219 (1), 41-51 (2013).</li><li>Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Thermal+pain+sensation+in+rats+and+mice+using+the+hargreaves+test.">Assessment of Thermal pain sensation in rats and mice using the hargreaves test.</a> Bio-protocol. 7 (16), e2506 (2017).</li><li>Randall, L. O., Selitto, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measurement+of+analgesic+activity+on+inflamed+tissue.">A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue.</a> Archives Internationales De Pharmacodynamie Et De Therapie. 111 (4), 409-419 (1957).</li><li>Yan, J. -. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Science of Tuina. , (2003).</li><li>Himes, B. T., Tessler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+of+some+dorsal+root+ganglion+neurons+and+plasticity+of+others+following+sciatic+nerve+section+in+adult+and+neonatal+rats.">Death of some dorsal root ganglion neurons and plasticity of others following sciatic nerve section in adult and neonatal rats.</a> The Journal of Comparative Neurology. 284 (2), 215-230 (1989).</li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Araştırma grubumuz, erken dönemde Tuina manipülasyonunun parametreleri ile ilgili çalışmalar yapmıştır. İlk olarak, Tuina manipülasyonu için kuvvet yoğunluğunu ayarlamak önemlidir. Klinik Tuina'da, uygulayıcılar kuvvet yoğunluğunu deneyimlerine ve hastaların öznel duygularına göre ayarlayarak iletişim yoluyla en iyi Tuina etkisini elde ederler. Ancak, hayvan deneylerinde bu mümkün değildir. Hayvan deneylerinde, Tuina manipülasyonunun yoğunluğunu tanımlamak için bir "yanıt eşiği" kullan...

Klinik ortamlarda, çeşitli nedenlere bağlı olarak sinir kökü sıkışmasının neden olduğu nörolojik patolojik ağrıların görülmesi yaygındır. Bu nöropatik ağrının en tipik şekli, genellikle kalıcı, tekrarlayan ve tedavisi zor olan lomber disk hernisidir (LDH). Küresel nüfusun yaklaşık %9'u LDH'den etkilenmekte ve bu da önemli sosyal ve ekonomik yüklere yol açmaktadır1. Bu tip nöropatik ağrının görülme sıklığı, insan üretimi ve yaşam tarzındaki değişiklikler nedeniyle daha genç hastalara doğru bir eğilimle her yıl artmaktadır2. Steroid olmayan ağrı kesicilerin kullanılmasına rağmen, hastaların semptomları tamamen hafifletilemez. Sonuç olarak, LDH'nin neden olduğu ağrıyı tedavi etmek için Tuina gibi alternatif tedaviler artan ilgi görmüştür.
LDH için bir konservatif tedavi şekli olan Tuina tedavisi, bel ağrısını önlemek ve tedavi etmek için dünya çapında çeşitli klinik uygulama kılavuzlarında yaygın olarak önerilmektedir 3,4. Araştırmalar, Tuina'nın LDH hastalarında serum IL-6 ve tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-α) seviyeleri gibi inflamatuar faktörleri önemli ölçüde azaltabildiğini ve hastaların ağrısını ve bel fonksiyon bozukluğunu iyileştirebildiğini göstermiştir5. Bununla birlikte, Tuina terapisinin ağrı giderici etkilerinin arkasındaki spesifik mekanizma belirsizliğini korumaktadır.
Hayvan modelleri, LDH6'nın neden olduğu nöropatik ağrıyı incelemek için değerli bir araçtır. Tuina tedavisinin etkinliğini değerlendirmek ve LDH'nin patolojik fizyolojisinin örneklerini sağlamak için davranışsal ölçümlere izin verirler. Örneğin, dorsal kök ganglion hücrelerindeki değişiklikleri doğrulamak için uyluktaki dorsal kök gangliyonlarından örnekler alınabilir. Dorsal Kök Ganglion (CCD) modelinin kronik kompresyonu, disk herniasyonunun neden olduğu klinik sinir sıkışması vakalarında görülen patolojik değişikliklerle tutarlı olan dorsal kök ganglion hücrelerinin morfolojisine zarar verdiğinden, LDH'nin patolojik fizyolojisini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır7.
Birçok bilim adamı, akupresür analjezi 8,9,10 üzerinde birkaç hayvan deneyi yapmıştır. Bununla birlikte, hayvan modellerinde akupresür operasyonları uygularken, genellikle insan akupresürünü taklit ederler. Akupresürün terapötik etkisi, uygulanan kuvvetin boyutu, sıklığı veyönü gibi faktörlerden etkilenir 11,12,13. Deney, işlemin kuvveti, sıklığı ve süresi gibi birleşik bir akupresür standardından yoksunsa, bu, deney sonuçlarında bir miktar sapmaya neden olabilir. Bu makale, CCD sıçanlarının özelliklerine dayanan bir dizi akupresür tedavi planını tanıtmakta ve hayvan modellerinde standartlaştırılmış akupresür operasyonlarının geliştirilmesini desteklemektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#34;L&#34; stainless steel rod (4 mm long and 0.4 mm in diameter)</td>
			<td>hand-made</td>
			<td>/</td>
			<td>For CCD models making</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALMEMO admeasuring apparatus</td>
			<td>ahlborn</td>
			<td>2450-1</td>
			<td>Mechanical Withdrawal Threshold test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant temperature slicer CM-1900</td>
			<td>Leica</td>
			<td>1491950C1US</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (iodine) 100 mL/bottle</td>
			<td>LIRCON/Shandong Lilkang</td>
			<td>/</td>
			<td>For disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile syringe 5 mL</td>
			<td>Shanghai Misha Wa Medical Industry</td>
			<td>/</td>
			<td>For injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electron microscope CX-31</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>BJ002318</td>
			<td>For specimen observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finger pressure recordings</td>
			<td>Suzhou Changxian Optoelectronic Technology</td>
			<td>CX1003w</td>
			<td>For Tuina manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam board (35 cm x 20 cm)</td>
			<td>hand-made</td>
			<td>/</td>
			<td>It is our homemade apparatus for fixing rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MERSILK W2512</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>/</td>
			<td>For tissue suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10004160</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>China National Chemical Reagent</td>
			<td>/</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3761</td>
			<td>For anesthesia of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plantar Test Apparatus (Hargreaves Method) for Mice and Rats</td>
			<td>IITC Life Science</td>
			<td>/</td>
			<td>Paw Withdrawal Latency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision electronic scale for experiment JY3002</td>
			<td>Shanghai Precision Scientific Instrument</td>
			<td>/</td>
			<td>Weighing of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat hair clipper</td>
			<td>Philips</td>
			<td>HP6341/00</td>
			<td>Shaving of rat fur</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restrainer for rats</td>
			<td>Tongji University (self-made)</td>
			<td>/</td>
			<td>It is a homemade apparatus made by Tongji University, which can effectively immobilize the rats and fully expose their hind limbs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek&#160;O.C.T. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>4583</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uratan</td>
			<td>China National Chemical Reagent</td>
			<td>/</td>
			<td>For anesthesia of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray detector XR-600</td>
			<td>Dongguan Kaso Electronic Technology</td>
			<td>/</td>
			<td>Examination of CCD models</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group</td>
			<td>100092</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analgesic effect of tuina on rat models with compression of the dorsal root ganglion pain

Nöropatik ağrı, lomber disk hernisi, spinal kanal darlığı ve intervertebral foramen stenozu gibi çeşitli etiyolojilere bağlı sinir hasarından kaynaklanan, toplumun %6.9-10'unu etkileyen yaygın bir durumdur. Geleneksel bir Çin manuel terapisi olan Tuina, nöropatik ağrının tedavisi için klinik uygulamada analjezik etkiler göstermiş olsa da, altta yatan nörobiyolojik mekanizmaları belirsizliğini korumaktadır. Hayvan modelleri, Tuina'nın temel ilkelerini aydınlatmak için gereklidir. Bu çalışmada, dorsal kök ganglionunun (DRG) kompresyonu olan sıçanlar için, intervertebral foramenlere paslanmaz çelik bir çubuk yerleştirilerek DRG kompresyonunun indüklenmesini, kontrollü bir ortamda belirli konum, yoğunluk ve frekans parametreleri ile Tuina manipülasyonu yapılmasını ve Tuina tedavisinin davranışsal ve histopatolojik sonuçlarının değerlendirilmesini içeren standart bir Tuina protokolü öneriyoruz. Bu makale ayrıca çalışmanın potansiyel klinik etkilerini ve sınırlamalarını tartışmakta ve Tuina ile ilgili gelecekteki araştırmalar için yönergeler önermektedir.

In clinical settings, it is common to observe neurological pathological pain caused by nerve root compression due to various reasons. The most typical form of this neuropathic pain is lumbar disc herniation (LDH), which is often persistent, recurrent, and difficult to cure. Approximately 9% of the global population is affected by LDH, leading to significant social and economic burdens1. The incidence of this type of neuropathic pain is increasing yearly, with a trend toward younger patients, due to changes in human production and lifestyle2. Despite the use of non-steroidal painkillers, patients&#39; symptoms cannot be completely alleviated. As a result, alternative therapies, such as Tuina, for treating pain caused by LDH have gained increasing attention.
Tuina therapy, a form of conservative treatment for LDH, is widely recommended in various clinical practice guidelines worldwide for preventing and treating lower back pain3,4. Research has shown that Tuina can significantly lower inflammatory factors such as serum IL-6 and tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) levels in LDH patients while improving patients&#39; pain and lumbar function impairment5. However, the specific mechanism behind Tuina therapy&#39;s pain-relieving effects remains unclear.
Animal models are a valuable tool for studying neuropathic pain caused by LDH6. They allow for behavioral measurements to evaluate the effectiveness of Tuina therapy and provide samples of the pathological physiology of LDH. For example, samples from the dorsal root ganglia in the thigh can be taken to verify changes in dorsal root ganglion cells. The chronic compression of the Dorsal Root Ganglion (CCD) model is commonly used to evaluate the pathological physiology of LDH, as it causes damage to the morphology of dorsal root ganglion cells that are consistent with the pathological changes seen in clinical cases of nerve compression caused by disc herniation7.
Many scholars have conducted several animal experiments on acupressure analgesia8,9,10. However, when implementing acupressure operations on animal models, they often imitate human acupressure. The therapeutic effect of acupressure is affected by factors such as the size, frequency, and the direction of the applied force11,12,13. If the experiment lacks a unified acupressure standard, such as the force, frequency, and duration of the operation, this may cause some deviation in the experimental results. This article introduces a set of acupressure treatment plans based on the characteristics of CCD rats, and promotes the development of standardized acupressure operations in animal models.

Yazar Spotlight: Tuina'nın Dorsal Kök Ganglion Ağrısının Sıkışması ile Sıçan Modelleri Üzerindeki Analjezik Etkisi  

Dorsal Kök Ganglion Ağrısının Sıkışması ile Tuina'nın Sıçan Modellerinde Analjezik Etkisi

Tuina analgesia is widely used in clinical practice. Our research focuses on the mechanism of action of Tuina analgesia, and investigate how Tuina achieve its analgesic effect. Achieving standardization in Tuina is currently the most significant obstacle.The effectiveness of Tuina is influenced by several factors such as treatment, area type, intensity, and frequency. The current protocol is optimized in two aspect based on the earlier research. Firstly, the force and frequency of pushing and holding operations were standardized and controlled by force-measuring gloves.Secondly, the results of imaging and animal behavior test were integrated to assess the results of modeling.

Tuina terapisi, CCD modellemesinin neden olduğu sıçanların mekanik ve termal stimülasyon eşiklerini azaltmaya yardımcı olabilir 17 günlük Tuina tedavisinden sonra, Tuina tedavisi alan CCD sıçanları ile tedavi edilmeyen CCD grubu arasında PWT eşiklerinde anlamlı bir fark gözlendi (P = 0.021, <0.05) (Şekil 6 ve Tablo 1).
Tuina tedavisi alan CCD grubundaki sıçanlar, tedavinin başlangıcından itibaren...

Watch this Scientific Journal Video about Analgesic Effect of Tuina on Rat Models with Compression of the Dorsal Root Ganglion Pain at JoVE.com

Bu makale, Tuina tedavisi kullanılarak sıçanlarda dorsal kök ganglionunun kronik kompresyonunu tedavi etmek için bir manipülasyonun yanı sıra, ağrı davranışına ve histopatolojik sonuçlara dayalı etkinliğini değerlendirmek için bir yöntem sunmaktadır.

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar ...

Tuina analjezi klinik pratikte yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmamız Tuina analjezisinin etki mekanizmasına odaklanmakta ve Tuina'nın analjezik etkisini nasıl elde ettiğini araştırmaktadır. Tuina'da standardizasyonun sağlanması şu anda en önemli engeldir.Tuina'nın etkinliği, tedavi, alan tipi, yoğunluk ve sıklık gibi çeşitli faktörlerden etkilenir. Mevcut protokol, önceki araştırmalara dayanarak iki açıdan optimize edilmiştir. İlk olarak, itme ve tutma işlemlerinin kuvveti ve sıklığı standartlaştırıldı ve kuvvet ölçen eldivenlerle kontrol edildi.İkinci olarak, modelleme sonuçlarını değerlendirmek için görüntüleme ve hayvan davranış testi sonuçları entegre edilmiştir.

analgesic-effect-tuina-on-rat-models-with-compression-dorsal-root

Research

JoVE Journal

Medicine

Analgesic Effect of Tuina on Rat Models with Compression of the Dorsal Root Ganglion Pain

922 Görüntüleme.  Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional  Chinese Medicine. Tuina analjezi klinik pratikte yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmamız Tuina analjezisinin etki mekanizmasına odaklanmakta ve Tuina'nın analjezik etkisini nasıl elde ettiğini araştırmaktadır. Tuina'da standardizasyonun sağlanması şu anda en önemli engeldir.Tuina'nın etkinliği, tedavi, alan tipi, yoğunluk ve sıklık gibi çeşitli faktörlerden etkilenir. Mevcut protokol, önceki araştırmalara dayanarak iki açıdan optimize edilmiştir. İlk olarak, itme ve ...

Video: Yazar Spotlight: Tuina'nın Dorsal Kök Ganglion Ağrısının Sıkışması ile Sıçan Modelleri Üzerindeki Analjezik Etkisi  

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar disc herniation, spinal canal stenosis, and intervertebral foramen stenosis. Although Tuina, a traditional Chinese manual therapy, has shown analgesic effects in clinical practice for the treatment of neuropathic pain, its underlying neurobiological mechanisms remain unclear. Animal models are essential for elucidating the basic principles of Tuina. In this study, we propose a standardized Tuina protocol for rats with compression of the dorsal root ganglion (DRG), which involves inducing DRG compression by inserting a stainless steel rod into the intervertebral foramen, performing Tuina manipulation with specific parameters of location, intensity, and frequency in a controlled environment, and assessing the behavioral and histopathological outcomes of Tuina treatment. This article also discusses the potential clinical implications and limitations of the study and suggests directions for future research on Tuina.

This article presents a manipulation for treating chronic compression of the dorsal root ganglion in rats using Tuina therapy, along with a method for evaluating its effectiveness based on pain behavior and histopathological results.

Tıp

Establishment of Murine Chronic Root Ganglion Compression Model

To establish the animal model, start by securing an anesthetized rat on a foam board, fastening its limbs and incisors using rubber bands. Wipe the prepared area with a 75%alcohol swab. Next, use scissors to make a two to three centimeter incision through the skin, superficial fascia, and deep fascia layer by layer.Locate the anterior superior iliac spine, followed by the third and fourth spinous processes. Clamp the spinous process with toothed forceps and lift it to allow the scissors to be close to the right side of the spinous process. Cut the muscle attached to the right side of the spinous process.Then bluntly dissect the muscle attached to the outer surface of the vertebral plate until resistance is felt. Similarly, bluntly dissect the muscle and fascia on the zygapophysial joint. Use an L-shaped probe to locate the intervertebral foramen.Next, insert an L-shaped stainless steel rod into the fourth and fifth lumbar intervertebral foramen. Proceed to suture the muscle, fascia, and skin layer by layer using 3-0 sutures. Place the rat in a thermostatic box until it wakes up and observe the function of the rat's right hind limb to ensure normalcy.

Murin Kronik Kök Ganglion Kompresyon Modelinin Kurulması

Tuina Therapy Administration to Murine Root Ganglion Compression Model

To standardize the tuina therapy, first, practice tuina using the finger sleeves feedback data, adjusting force to 5 newtons and frequency to 2 hertz. Next, perform tuina on immobilized rats, maintaining consistent force and frequency. Identify the acupoint by selecting the gastrocnemius muscle of the right hind limb at the junction of its two heads, approximately at BL 57.Perform the tuina by positioning the thumb vertically on the BL 57 acupoint and moving in rhythmic, small-range rotary motions exerting 5 newtons of pressure. After 17 days of tuina therapy, a significant difference was observed in paw withdrawal thresholds between the CCD rats receiving tuina therapy and the untreated CCD group. The rats in the CCD group receiving tuina therapy showed improvement in pain threshold from the beginning of treatment.Thermal pain thresholds differed significantly between the CCD group and the tuina group from day 14.

Murin Kök Ganglion Kompresyon Modeline Tuina Terapi Uygulaması

Murine Pain Behavioral Testing to Study the Effect of Tuina Therapy

To conduct the Von Fray test, begin by placing the rats in a transparent tempered glass compartment on a metal wire grid stand at a height of 40 centimeters. Next, measure the mechanical withdrawal threshold with Von Frey electronic fibers. Stimulate the rat's foot until it reacts noticeably, such as by lifting the leg or avoiding it.To assess the paw withdrawal latency, or PWL using the Hargreaves method, focus the spotlight on the center of the rat's foot and press the start button. Monitor the rat for behaviors such as foot retraction or paw licking, and press the start button again to record the time. Perform the test on the same hind limb three consecutive times.After 17 days of Tuina therapy, a significant difference was observed in paw withdrawal thresholds between the CCD rats receiving Tuina therapy and the untreated CCD group. The rats in the CCD group receiving Tuina therapy showed improvement in pain threshold from the beginning of treatment. Thermal pain thresholds differed significantly between the CCD group and the Tuina group from day 14.