Este trabalho foi apoiado por ShanghaiCritical Clinical Specialties ConstructionProject(Grant Number: Shslczdzk04001); o programa de Vela da Comissão de Ciência e Tecnologia de Xangai (Grant Number:22YF1444300); Projetos dentro do orçamento da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (Número da bolsa: 2021LK091).

Este trabalho foi realizado no Laboratório de Dor do Instituto de Neurobiologia da Universidade de Fudan. Os experimentos foram aprovados e seguiram rigorosamente as diretrizes de proteção de animais de laboratório estabelecidas pela Associação Internacional para o Estudo da Dor (LASP) para todos os procedimentos cirúrgicos e manuseio dos animais. Foram utilizados ratos Sprague-Dawley (SD) grau limpo, constituídos por 32 machos entre 40-50 dias de idade, com peso médio de 220 ± 1,38 g. Estes ratos foram obtidos do Centro de Animais Experimentais da Academia de Ciências da Vida de Xangai, Academia Chinesa de Ciências. Os animais foram devidamente cuidados e alojados em uma sala dedicada com ventilação independente, temperatura regulada (22 ± 1 °C) e umidade (40%-50%). Os ratos tiveram acesso a ração e água adequadas em suas gaiolas. A sala de animais de laboratório seguiu um ciclo claro-escuro de 12 h para manter a regularidade dos ritmos circadianos dos ratos, e o pessoal designado substituiu regularmente o preenchimento. O raio-X foi realizado no Departamento de Radiologia do Hospital Yueyang de Medicina Tradicional Chinesa Integrada e Ocidental, afiliado à Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai.
1. Participantes do estudo e agrupamento
<ol><li>Atribuir 32 ratos em quatro grupos: virgens (controle), sham (operação simulada), CCD (compressão crônica do gânglio da raiz dorsal) e CCD + Tuina (8 ratos/grupo). Os ratos tiveram livre acesso a ração e água em biotérios. OBS: Ratos virgens não tiveram intervenção, enquanto o grupo sham foi submetido ao mesmo procedimento cirúrgico que os ratos do grupo CCD, porém sem deixar haste de aço inoxidável em forma de "L" no forame intervertebral L4 e L5. Os ratos do grupo DCC foram submetidos à cirurgia completa do modelo de compressão do gânglio da raiz dorsal crônica. Os ratos do grupo CCD + Tuina receberam terapia com tuina a partir do quarto dia após a cirurgia de DCC.</li>
</ol>2. Estabelecimento do modelo animal
<ol><li>Administrar isofluorano para anestesiar ratos. Uma vez que os ratos perdem a consciência (sem reflexo de movimento da cauda ou reflexo de flexão das pernas), raspe os pelos na área cirúrgica usando uma navalha. OBS: As drogas analgésicas foram aplicadas 15 minutos antes da cirurgia e os ratos foram injetados por via subcutânea com tramadol 20 mg/kg.</li>
	<li>Prenda o rato em uma placa de espuma (veja Tabela de Materiais) e use elásticos para prender seus membros e incisivos. Limpe a área preparada com uma preparação estéril de alternância de álcool e iodo por um mínimo de 3 ciclos.</li>
	<li>Insira a sonda em forma de "L" (consulte a Tabela de Materiais).<ol><li>Use uma tesoura para fazer uma incisão de 2-3 cm através da pele, fáscia superficial e fáscia profunda camada por camada. Primeiro, localize a espinha ilíaca anterossuperior, que corresponde à quinta coluna lombar. Em seguida, localize sequencialmente o terceiro e quarto processos espinhosos.</li>
		<li>Aperte o processo espinhoso com pinça dentada e levante-o para permitir que a tesoura fique perto do lado direito do processo espinhoso e corte o músculo preso ao lado direito do processo espinhoso.</li>
		<li>Em seguida, dissecar bruscamente o músculo aderido à superfície externa da placa vertebral até que haja resistência para o lado direito. A protrusão é a articulação zigapofisária. Da mesma forma, dissecar bruscamente o músculo e a fáscia na articulação zigapofisial. NOTA: O processo transversal apontando para a direção da cabeça do rato será tocado primeiro na parte inferior externa frontal da articulação zigapofisial. Abaixo do processo transverso está o forame intervertebral, que é preenchido por raízes nervosas e tecidos moles circundantes e geralmente não é fácil de encontrar.</li>
		<li>Primeiro, use uma sonda em forma de "L" para determinar a posição do forame intervertebral e, em seguida, use uma haste de aço inoxidável em forma de "L" (que precisa ser feita com um diâmetro de 0,4 mm e um comprimento de 4 mm) para inseri-la no forame intervertebral.</li>
		<li>Se o gânglio da raiz dorsal for comprimido com sucesso, o rato exibirá um movimento da cauda e reflexo de flexão da perna. Inserir a haste de aço inoxidável no quarto e quinto forame intervertebral lombar. Em seguida, sutura (3-0, ver Tabela de Materiais) do músculo, fáscia e pele camada por camada.</li>
	</ol></li>
	<li>Coloque o rato em uma caixa termostática até acordar. Após acordar, observe se a função do membro posterior direito do rato está normal. Se houver arrasto, significa que a operação lesionou os nervos motores, e o rato deve ser descartado. Se a função do membro posterior direito for normal, o rato pode ser usado e colocado em uma gaiola para alimentação.</li>
</ol>3. Terapia Tuina
<ol><li>Estabeleça um ambiente confortável: antes de iniciar a terapia com Tuina, aclimate o rato no filtro por 30 min para permitir sua adaptação (Figura 1). Este dispositivo pode expor totalmente a coxa do rato e imobilizá-la, facilitando as manobras de Tuina (ver Tabela de Materiais). NOTA: A temperatura na sala de tratamento deve ser mantida entre 22-26 °C, e a umidade deve estar entre 40%-50%.</li>
	<li>Padronização da Tuina: garantir que os terapeutas usem mangas de dedo sem fio que possam monitorar a pressão e a frequência da Tuina e fornecer dados de feedback em tempo real. Primeiro, pratique Tuina com os dados de feedback das mangas digitais, ajustando a força para 5 N e a frequência para 2 Hz. Em seguida, realizar as mesmas manobras nos ratos, mantendo força e frequência consistentes durante todo o procedimento (Figura 2). NOTA: Com base em nosso trabalho anterior, a força de pressão ideal calculada é de 5 N (consulte a seção Discussão para obter detalhes).</li>
	<li>Identificar o acuponto: selecionar o músculo gastrocnêmio do membro posterior direito como a área de Tuina do rato, na junção das duas cabeças do músculo gastrocnêmio, aproximadamente no local da LB5714.</li>
	<li>Realizar a Tuina: certifique-se de que o terapeuta fique voltado para a face posterior da coxa do rato e segure o membro posterior direito do rato com o membro superior direito. Posicione o polegar verticalmente sobre o acuponto BL57 e assegure-se de que o antebraço e os dedos exerçam força para realizar movimentos rotativos rítmicos de pequena amplitude enquanto aplicam uma pressão de 5 N (Figura 3).</li>
	<li>Durante o tratamento, certifique-se de que a força e a frequência do feedback de manipulação correspondam aos valores predefinidos. Iniciar a intervenção a partir do quarto dia de pós-operatório, com Tuina realizada uma vez ao dia por 15 min, continuamente por 18 dias.</li>
</ol>4. Teste comportamental para dor
OBS: Os testes comportamentais foram realizados antes da modelagem, após a modelagem, no dia 1 de intervenção, no dia 3 de intervenção, no dia 7 de intervenção, no dia 14 de intervenção, no dia 17 de intervenção e no dia 21 de intervenção.
<ol><li>Execute o Limiar de Resposta à Estimulação Mecânica (Paw Withdrawal Threshold, PWT) seguindo os passos abaixo (Figura 4).<ol><li>Utilizar o método de von Frey para testar o limiar de resposta da estimulação mecânica nos pés de ratos. Colocar os ratos em um compartimento de vidro temperado transparente medindo 20 cm × 10 cm × 20 cm, que foi colocado em um suporte de grade de arame metálico com aberturas de 10 mm × 10 mm a uma altura de 40 cm. Mantenha a temperatura ambiente em 23 ± 2 °C e o ambiente circundante silencioso.</li>
		<li>Meça o limiar de retirada mecânica com fibras eletrônicas de Von Frey (ver Tabela de Materiais). Estimule o centro do pé do rato até que ele se mova visivelmente, como levantar a perna ou evitá-la. A máquina registra o valor da pressão máxima (N) automaticamente.</li>
		<li>Aguarde 15 s ou mais antes de estimular o mesmo rato novamente. Mantenha cada estimulação abaixo de 5 s para evitar a sensibilização tátil nas patas do rato. Repetir o teste cinco vezes até que as três medidas consecutivas difiram em menos de 10 N.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar a Latência de Retirada da Pata (LPP) em resposta à estimulação térmica (Figura 5).<ol><li>Avaliar a LEP pelo método de Hargreaves15,16. Coloque os ratos em uma pequena câmara de vidro temperado transparente, medindo 20 cm x 10 cm x 20 cm, com tampa de vidro transparente com orifício de ventilação. Aqueça a área central da tampa de vidro a 45 °C usando uma placa de aquecimento até atingir uma temperatura estável.</li>
		<li>Durante a fase de teste comportamental, aclimatar os ratos ao laboratório comportamental por pelo menos 2 h por dia para minimizar o impacto dos fatores ambientais nos resultados do teste.</li>
		<li>Antes do teste formal, coloque os ratos no laboratório comportamental por 30 min para permitir que eles se adaptem ao ambiente e reduzam a interferência.</li>
		<li>Aqueça a placa de aquecimento a 45 °C e coloque os membros posteriores do rato na placa de aquecimento.</li>
		<li>A latência de retirada da pata (LPP) foi definida como o tempo desde o início do aquecimento até o aparecimento do reflexo de retirada da pata em resposta à estimulação térmica. Em cada teste, testar o mesmo membro pélvico três vezes seguidas, sendo o valor médio para obter a latência de resposta desse membro pélvico. Após os testes, devolva os ratos às suas gaiolas para alimentação.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Perfusão
<ol><li>Modo de preparo: preparar previamente uma solução salina a 0,9% e uma solução de paraformaldeído a 4%. Colocar a solução salina num forno regulado para uma temperatura constante de 37 °C e conservar a solução de paraformaldeído num frigorífico a 4 °C para utilização posterior.</li>
	<li>Realizar anestesia e estabelecer acesso.<ol><li>Comece injetando 25% de uretano (0,6 mL/100 g, ver Tabela de Materiais) na cavidade abdominal do rato para induzir anestesia profunda. Aguarde até que nenhum reflexo de dedo, córnea ou giro seja observado. Fixe o rato em uma placa de espuma.</li>
		<li>Corte o osso do peito com tesoura e abra a pele e a fáscia camada por camada. Corte o diafragma e corte as costelas de ambos os lados para expor totalmente o coração. Separe cuidadosamente o pericárdio. Separe os pulmões do coração.</li>
		<li>Use pinças para puxar e expor a aorta, puxando o coração em direção a si mesmo. Alinhar a agulha, o ventrículo esquerdo e a aorta em linha reta e no mesmo plano horizontal. Em seguida, insira a agulha do ventrículo esquerdo na aorta até que a agulha fique visível dentro da aorta.</li>
		<li>Use pinça para pinçar a aorta e a agulha dentro da aorta e, em seguida, abra o átrio esquerdo com tesoura. Neste momento, uma grande quantidade de sangue jorrará para fora do átrio esquerdo. Abra a válvula para a solução salina e conecte a injeção de soro fisiológico para perfundir solução salina a 37 °C, totalizando cerca de 150-200 mL.</li>
	</ol></li>
	<li>Após a perfusão salina, trocar para a solução de paraformaldeído a 4% e perfundir com solução de paraformaldeído a 4%, totalizando cerca de 400 mL a 4 °C. Ao iniciar a perfusão do paraformaldeído, segure os dentes da frente do rato com uma pinça e puxe-os para frente, segurando a cauda com uma mão e puxando-a para trás, o que é vantajoso para estender totalmente a coluna vertebral e aumentar o forame intervertebral para facilitar a amostragem do DRG.</li>
	<li>Durante a perfusão, o fígado, o mesentério e o omento maior do rato gradualmente ficam pálidos até que o fígado fique rígido. Em seguida, diminua a taxa de fluxo e ajuste-a para cerca de 2 gotas por segundo até que todo o paraformaldeído seja perfundido.</li>
</ol>6. Coleção do gânglio da raiz dorsal
NOTA: Após a perfusão, cortar rapidamente a seção lombar da coluna vertebral do rato. Localizar o forame intervertebral L5 e L4 conectando os pontos mais altos da crista ilíaca de ambos os lados ao processo espinhoso lombar de L5 usando este método de posicionamento e remover o gânglio da raiz dorsal do forame intervertebral. O método de coleta específico é o seguinte:
<ol><li>A partir da entrada do canal vertebral (canal espinhal torácico), insira a tesoura no canal espinhal e corte a lâmina de ambos os lados até que todas as lâminas possam ser completamente removidas, expondo todo o canal espinhal. NOTA: Tenha cuidado para não danificar a medula espinhal e as raízes nervosas fora do canal espinhal ao cortar as lâminas.</li>
	<li>Remova cuidadosamente a medula espinhal e o ligamento longitudinal posterior. Separe a dura-máter presa ao orifício interno do forame intervertebral.</li>
	<li>Use pinças oftálmicas para prender e puxar o gânglio da raiz dorsal, que tem a forma de uma pérola e ligeiramente amarelado. NOTA: Devido à fragilidade e pouca tenacidade do tecido nervoso, é necessário agarrar a força e a direção de tração ao puxar o gânglio da raiz dorsal e não usar força bruta.</li>
	<li>Ao arrancar o gânglio da raiz dorsal, certifique-se de limpar os tecidos moles circundantes, incluindo a dura-máter e a aracnoide, com antecedência para facilitar a tração suave do gânglio da raiz dorsal.</li>
	<li>Coloque o gânglio da raiz dorsal em papel absorvente, corte o axônio com uma lâmina e limpe os vasos sanguíneos na superfície do gânglio da raiz dorsal.</li>
	<li>Após o corte, pesar o gânglio da raiz dorsal e mergulhá-lo em uma solução de paraformaldeído a 4% com uma concentração de 4% e uma temperatura de 4 °C por tempo suficiente, geralmente cerca de 2-4 h, em seguida, transferir o gânglio da raiz dorsal para 10%, 20% e solução de sacarose PB a 30% (4 °C) preparada com antecedência para desidratação gradual.</li>
</ol>7. Criosecção
<ol><li>Iniciar colocando o gânglio da raiz dorsal em uma solução de PBS 0,01 M. Agite-os por 10 min e, em seguida, lave a solução de sacarose. Aparar cuidadosamente as fibras axonais de ambos os segmentos dos gânglios da raiz dorsal. Limpe a cabeça de congelamento da máquina de criossecção e adicione o composto de temperatura de corte ideal (OCT) a ela (consulte a Tabela de Materiais).</li>
	<li>Coloque a cabeça de congelamento na superfície de uma casca de metal contendo nitrogênio líquido, espere até que o tecido esteja congelado, remova-o e corte-o plano. Depois disso, coloque a cabeça de congelamento na base da fatiadora. A espessura dos cortes dos gânglios da raiz dorsal deve ser de 15 mm. Disponha as seções finas fatiadas em uma caixa de madeira em ordem e guarde-as em uma geladeira de -20 °C, longe da luz.</li>
</ol>8. Coloração por hematoxilina e eosina
<ol><li>Coloque as seções 2 min em xileno e desidrate-as em uma série de álcoois, incluindo 100%, 95%, 80% e 70%, por 2 min cada. Em seguida, colocar os cortes 2 min em água destilada, 1 min em hematoxilina, realizar 5 min de enxágue com água de torneira e realizar diferenciação em solução de álcool salino a 1% por 30 s, seguido de 30 s em carbonato de lítio saturado.</li>
	<li>Em seguida, coloque as fatias 2 min cada em água destilada e água da torneira, 5 min em solução de eosina (0,5%), 1 min de enxágue rápido em água destilada, duas rodadas de 2 min cada em álcool 95% e 100%, 30 s em xileno 100% com adição de bicarbonato de sódio, três rodadas de 3 min cada em xileno e, finalmente, selo com bálsamo neutro (ver Tabela de Materiais).</li>
</ol>

Protocolo Tuina Padronizado para Modelo de Compactação DRG de Rato

<ol>
	<li>Vos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=national+incidence,+prevalence,+and+years+lived+with+disability+for+328+diseases+and+injuries+for+195+countries,+1990-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> The Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).</li><li>Amin, R. M., Andrade, N. S., Neuman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumbar+Disc+Herniation.">Lumbar Disc Herniation.</a> Current Reviews in Musculoskeletal Medicine. 10 (4), 507-516 (2017).</li><li>Stochkendahl, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Clinical+Guidelines+for+non-surgical+treatment+of+patients+with+recent+onset+low+back+pain+or+lumbar+radiculopathy.">National Clinical Guidelines for non-surgical treatment of patients with recent onset low back pain or lumbar radiculopathy.</a> European Spine Journal. 27 (1), 60-75 (2018).</li><li>Bostelmann, R., Steiger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+&amp;#34;An+evidence-based+clinical+guideline+for+the+diagnosis+and+treatment+of+lumbar+disc+herniation+with+radiculopathy&amp;#34.">Comment on &amp;#34;An evidence-based clinical guideline for the diagnosis and treatment of lumbar disc herniation with radiculopathy&amp;#34.</a> The Spine Journal. 14 (9), 2273 (2014).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bone-setting+massage+combined+with+acupuncture+and+moxibustion+on+simple+lumbar+disc+herniation+and+its+effect+on+pain+and+sensory+disorder+of+lower+limbs.">Effect of bone-setting massage combined with acupuncture and moxibustion on simple lumbar disc herniation and its effect on pain and sensory disorder of lower limbs.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 38 (10), 244-247 (2020).</li><li>Lin, X. -. Y., Yang, J., Li, H. -. M., Hu, S. -. J., Xing, J. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+root+ganglion+compression+as+an+animal+model+of+sciatica+and+low+back+pain.">Dorsal root ganglion compression as an animal model of sciatica and low back pain.</a> Neuroscience Bulletin. 28 (5), 618-630 (2012).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+the+etiology+and+treatment+of+low+back+pain.">Animal models for studying the etiology and treatment of low back pain.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 36 (5), 1305-1312 (2018).</li><li>Zhao, X. -. y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Tuina+on+the+expression+of+TNF-&#945;,IL-6,TGF-&#946;1+and+CTGF+in+the+degenerative+tissue+of+rabbits&#8242;lumbar+intervertebral+disc.">Effect of Tuina on the expression of TNF-&#945;,IL-6,TGF-&#946;1 and CTGF in the degenerative tissue of rabbits&#8242;lumbar intervertebral disc.</a> Journal of Chengdu Medical College. 14 (6), 741-745 (2019).</li><li>Zhang, L., Li, Z. -. y., Yu, Z. -. y., Yue, X. -. y., Fu, R. -. y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABA+and+GABAAR+in+analgesic+loop+of+CCI+rats+by+pressing+manipulation+based+on+&amp;#34;Taking+Tenderness+as+Acupoints&amp;#34;+theory.">Effect of GABA and GABAAR in analgesic loop of CCI rats by pressing manipulation based on &amp;#34;Taking Tenderness as Acupoints&amp;#34; theory.</a> Journal of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. 28 (3), 50-53 (2014).</li><li>Long, B. -. c. a. l., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analgesic+effect+of+massage+on+rats+with+neuropathic+pain+and+its+mechanism.">Analgesic effect of massage on rats with neuropathic pain and its mechanism.</a> Guangxi Medical Journal. 44 (17), 2003-2009 (2022).</li><li>Al-Bedah, A., Ali, G., Aboushanab, T., Qureshi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tui+Na+(or+Tuina)+massage:+A+minireview+of+pertinent+literature,+1970-2017.">Tui Na (or Tuina) massage: A minireview of pertinent literature, 1970-2017.</a> Journal of Complementary and Alternative Medical Research. 3, 1-14 (2017).</li><li>Au, D. W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acupressure+on+anxiety:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Effects of acupressure on anxiety: a systematic review and meta-analysis.</a> Acupuncture in Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 33 (5), 353-359 (2015).</li><li>Hsiung, W. -. T., Chang, Y. -. C., Yeh, M. -. L., Chang, Y. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acupressure+improves+the+postoperative+comfort+of+gastric+cancer+patients:+A+randomised+controlled+trial.">Acupressure improves the postoperative comfort of gastric cancer patients: A randomised controlled trial.</a> Complementary Therapies in Medicine. 23 (3), 339-346 (2015).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+interconnection+between+acupoint+&amp;#34;Ch&#233;ngsh&#257;n+(BL57)&amp;#34;+and+sciatic+nerve+in+the+rat.">Neural interconnection between acupoint &amp;#34;Ch&#233;ngsh&#257;n (BL57)&amp;#34; and sciatic nerve in the rat.</a> World Journal of Acupuncture - Moxibustion. 31 (2), 129-135 (2021).</li><li>Banik, R. K., Kabadi, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+Hargreaves+method+for+assessing+threshold+temperatures+for+heat+nociception.">A modified Hargreaves method for assessing threshold temperatures for heat nociception.</a> Journal of neuroscience methods. 219 (1), 41-51 (2013).</li><li>Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Thermal+pain+sensation+in+rats+and+mice+using+the+hargreaves+test.">Assessment of Thermal pain sensation in rats and mice using the hargreaves test.</a> Bio-protocol. 7 (16), e2506 (2017).</li><li>Randall, L. O., Selitto, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measurement+of+analgesic+activity+on+inflamed+tissue.">A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue.</a> Archives Internationales De Pharmacodynamie Et De Therapie. 111 (4), 409-419 (1957).</li><li>Yan, J. -. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Science of Tuina. , (2003).</li><li>Himes, B. T., Tessler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+of+some+dorsal+root+ganglion+neurons+and+plasticity+of+others+following+sciatic+nerve+section+in+adult+and+neonatal+rats.">Death of some dorsal root ganglion neurons and plasticity of others following sciatic nerve section in adult and neonatal rats.</a> The Journal of Comparative Neurology. 284 (2), 215-230 (1989).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Nosso grupo de pesquisa tem realizado estudos relevantes sobre os parâmetros de manipulação de Tuina em estágio inicial. Primeiro, é importante definir a intensidade da força para a manipulação de Tuina. Na clínica Tuina, os profissionais ajustam a intensidade da força de acordo com sua experiência e os sentimentos subjetivos dos pacientes, alcançando o melhor efeito Tuina através da comunicação. No entanto, isso não é viável em experimentos com animais. Em experimentos com animais, um "limiar de respos...

Em situações clínicas, é comum observar dor patológica neurológica causada pela compressão da raiz nervosa devido a vários motivos. A forma mais típica dessa dor neuropática é a hérnia discal lombar (DHL), que muitas vezes é persistente, recorrente e de difícil cura. Aproximadamente 9% da população mundial é afetada pela LDH, levando a encargos sociais e econômicos significativos1. A incidência desse tipo de dor neuropática vem aumentando a cada ano, com tendência a pacientes mais jovens, devido às mudanças na produção humana e no estilo de vida2. Apesar do uso de analgésicos não esteroides, os sintomas dos pacientes não podem ser completamente aliviados. Como resultado, terapias alternativas, como Tuina, para o tratamento da dor causada pela LDH têm ganhado cada vez mais atenção.
A terapia com Tuina, uma forma de tratamento conservador da LDH, é amplamente recomendada em várias diretrizes de prática clínica em todo o mundo para prevenir e tratar a dor lombar 3,4. Pesquisas mostraram que Tuina pode reduzir significativamente fatores inflamatórios, como níveis séricos de IL-6 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) em pacientes com LDH, melhorando a dor e o comprometimento da função lombar5. No entanto, o mecanismo específico por trás dos efeitos de alívio da dor da terapia Tuina permanece obscuro.
Modelos animais são uma ferramenta valiosa para o estudo da dor neuropática causada pela LDH6. Eles permitem medidas comportamentais para avaliar a eficácia da terapia com Tuina e fornecem amostras da fisiologia patológica da LDH. Por exemplo, amostras dos gânglios da raiz dorsal na coxa podem ser colhidas para verificar alterações nas células ganglionares da raiz dorsal. A compressão crônica do modelo do gânglio da raiz dorsal (CCD) é comumente utilizada para avaliar a fisiologia patológica da LDH, pois causa danos à morfologia das células ganglionares da raiz dorsal que são consistentes com as alterações patológicas observadas em casos clínicos de compressão nervosa causada por hérnia dedisco7.
Muitos estudiosos têm realizado diversos experimentos em animais sobre analgesia por acupressão 8,9,10. No entanto, ao implementar operações de acupressão em modelos animais, eles muitas vezes imitam a acupressão humana. O efeito terapêutico da acupressão é afetado por fatores como tamanho, frequência e direção da força aplicada11,12,13. Se o experimento não tiver um padrão unificado de acupressão, como força, frequência e duração da operação, isso pode causar algum desvio nos resultados experimentais. Este artigo apresenta um conjunto de planos de tratamento com acupressão baseados nas características de ratos CCD e promove o desenvolvimento de operações padronizadas de acupressão em modelos animais.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>&#34;L&#34; stainless steel rod (4 mm long and 0.4 mm in diameter)</td>
			<td>hand-made</td>
			<td>/</td>
			<td>For CCD models making</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALMEMO admeasuring apparatus</td>
			<td>ahlborn</td>
			<td>2450-1</td>
			<td>Mechanical Withdrawal Threshold test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant temperature slicer CM-1900</td>
			<td>Leica</td>
			<td>1491950C1US</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (iodine) 100 mL/bottle</td>
			<td>LIRCON/Shandong Lilkang</td>
			<td>/</td>
			<td>For disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile syringe 5 mL</td>
			<td>Shanghai Misha Wa Medical Industry</td>
			<td>/</td>
			<td>For injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electron microscope CX-31</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>BJ002318</td>
			<td>For specimen observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finger pressure recordings</td>
			<td>Suzhou Changxian Optoelectronic Technology</td>
			<td>CX1003w</td>
			<td>For Tuina manipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foam board (35 cm x 20 cm)</td>
			<td>hand-made</td>
			<td>/</td>
			<td>It is our homemade apparatus for fixing rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MERSILK W2512</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>/</td>
			<td>For tissue suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent</td>
			<td>10004160</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>China National Chemical Reagent</td>
			<td>/</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3761</td>
			<td>For anesthesia of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plantar Test Apparatus (Hargreaves Method) for Mice and Rats</td>
			<td>IITC Life Science</td>
			<td>/</td>
			<td>Paw Withdrawal Latency</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision electronic scale for experiment JY3002</td>
			<td>Shanghai Precision Scientific Instrument</td>
			<td>/</td>
			<td>Weighing of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat hair clipper</td>
			<td>Philips</td>
			<td>HP6341/00</td>
			<td>Shaving of rat fur</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restrainer for rats</td>
			<td>Tongji University (self-made)</td>
			<td>/</td>
			<td>It is a homemade apparatus made by Tongji University, which can effectively immobilize the rats and fully expose their hind limbs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek&#160;O.C.T. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>4583</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uratan</td>
			<td>China National Chemical Reagent</td>
			<td>/</td>
			<td>For anesthesia of rat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray detector XR-600</td>
			<td>Dongguan Kaso Electronic Technology</td>
			<td>/</td>
			<td>Examination of CCD models</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene</td>
			<td>Shanghai Sinopharm Group</td>
			<td>100092</td>
			<td>For specimen production</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analgesic effect of tuina on rat models with compression of the dorsal root ganglion pain

A dor neuropática é uma condição prevalente que afeta de 6,9% a 10% da população e resulta de lesão nervosa devido a várias etiologias, como hérnia de disco lombar, estenose do canal vertebral e estenose do forame intervertebral. Embora Tuina, uma terapia manual tradicional chinesa, tenha mostrado efeitos analgésicos na prática clínica para o tratamento da dor neuropática, seus mecanismos neurobiológicos subjacentes permanecem obscuros. Modelos animais são essenciais para elucidar os princípios básicos de Tuina. Neste estudo, propomos um protocolo de Tuina padronizado para ratos com compressão do gânglio da raiz dorsal (DRG), que envolve induzir a compressão DRG através da inserção de uma haste de aço inoxidável no forame intervertebral, realizar a manipulação de Tuina com parâmetros específicos de localização, intensidade e frequência em um ambiente controlado, e avaliar os resultados comportamentais e histopatológicos do tratamento com Tuina. Este artigo também discute as potenciais implicações clínicas e limitações do estudo e sugere direções para futuras pesquisas sobre Tuina.

In clinical settings, it is common to observe neurological pathological pain caused by nerve root compression due to various reasons. The most typical form of this neuropathic pain is lumbar disc herniation (LDH), which is often persistent, recurrent, and difficult to cure. Approximately 9% of the global population is affected by LDH, leading to significant social and economic burdens1. The incidence of this type of neuropathic pain is increasing yearly, with a trend toward younger patients, due to changes in human production and lifestyle2. Despite the use of non-steroidal painkillers, patients&#39; symptoms cannot be completely alleviated. As a result, alternative therapies, such as Tuina, for treating pain caused by LDH have gained increasing attention.
Tuina therapy, a form of conservative treatment for LDH, is widely recommended in various clinical practice guidelines worldwide for preventing and treating lower back pain3,4. Research has shown that Tuina can significantly lower inflammatory factors such as serum IL-6 and tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) levels in LDH patients while improving patients&#39; pain and lumbar function impairment5. However, the specific mechanism behind Tuina therapy&#39;s pain-relieving effects remains unclear.
Animal models are a valuable tool for studying neuropathic pain caused by LDH6. They allow for behavioral measurements to evaluate the effectiveness of Tuina therapy and provide samples of the pathological physiology of LDH. For example, samples from the dorsal root ganglia in the thigh can be taken to verify changes in dorsal root ganglion cells. The chronic compression of the Dorsal Root Ganglion (CCD) model is commonly used to evaluate the pathological physiology of LDH, as it causes damage to the morphology of dorsal root ganglion cells that are consistent with the pathological changes seen in clinical cases of nerve compression caused by disc herniation7.
Many scholars have conducted several animal experiments on acupressure analgesia8,9,10. However, when implementing acupressure operations on animal models, they often imitate human acupressure. The therapeutic effect of acupressure is affected by factors such as the size, frequency, and the direction of the applied force11,12,13. If the experiment lacks a unified acupressure standard, such as the force, frequency, and duration of the operation, this may cause some deviation in the experimental results. This article introduces a set of acupressure treatment plans based on the characteristics of CCD rats, and promotes the development of standardized acupressure operations in animal models.

Autor em destaque: Efeito analgésico da Tuina em modelos de ratos com compressão da dor do gânglio da raiz dorsal  

Efeito Analgésico de Tuina em Modelos de Rato com Compressão da Dor do Gânglio da Raiz Dorsal

A terapia com Tuina pode ajudar a diminuir os limiares de estimulação mecânica e térmica de ratos causados pela modelagem de CCD Após 17 dias de terapia com Tuina, foi observada uma diferença significativa nos limiares de PWT entre os ratos CCD que receberam terapia com Tuina e o grupo CCD não tratado (P = 0,021, <0,05) (Figura 6 e Tabela 1).
Os ratos do grupo CCD que receberam terapia com Tuina apresentaram mel...

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Este artigo apresenta uma manipulação para o tratamento da compressão crônica do gânglio da raiz dorsal em ratos utilizando a terapia com Tuina, juntamente com um método para avaliar sua eficácia baseado no comportamento da dor e nos resultados histopatológicos.

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar ...

A analgesia com Tuina é amplamente utilizada na prática clínica. Nossa pesquisa se concentra no mecanismo de ação da analgesia de Tuina e investiga como Tuina alcança seu efeito analgésico. Alcançar a padronização em Tuina é atualmente o obstáculo mais significativo.A eficácia de Tuina é influenciada por vários fatores, como tratamento, tipo de área, intensidade e frequência. O protocolo atual é otimizado em dois aspectos com base na pesquisa anterior. Em primeiro lugar, a força e a frequência das operações de empurrar e segurar foram padronizadas e controladas por luvas de medição de força.Em segundo lugar, os resultados de exames de imagem e testes de comportamento animal foram integrados para avaliar os resultados da modelagem.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Analgesic Effect of Tuina on Rat Models with Compression of the Dorsal Root Ganglion Pain

967 visualizações.  Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional  Chinese Medicine. A analgesia com Tuina é amplamente utilizada na prática clínica. Nossa pesquisa se concentra no mecanismo de ação da analgesia de Tuina e investiga como Tuina alcança seu efeito analgésico. Alcançar a padronização em Tuina é atualmente o obstáculo mais significativo.A eficácia de Tuina é influenciada por vários fatores, como tratamento, tipo de área, intensidade e frequência. O protocolo atual é otimizado em dois aspectos com base na pesquisa anterior. Em primeiro lug...

Vídeo: Autor em destaque: Efeito analgésico da Tuina em modelos de ratos com compressão da dor do gânglio da raiz dorsal  

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar disc herniation, spinal canal stenosis, and intervertebral foramen stenosis. Although Tuina, a traditional Chinese manual therapy, has shown analgesic effects in clinical practice for the treatment of neuropathic pain, its underlying neurobiological mechanisms remain unclear. Animal models are essential for elucidating the basic principles of Tuina. In this study, we propose a standardized Tuina protocol for rats with compression of the dorsal root ganglion (DRG), which involves inducing DRG compression by inserting a stainless steel rod into the intervertebral foramen, performing Tuina manipulation with specific parameters of location, intensity, and frequency in a controlled environment, and assessing the behavioral and histopathological outcomes of Tuina treatment. This article also discusses the potential clinical implications and limitations of the study and suggests directions for future research on Tuina.

This article presents a manipulation for treating chronic compression of the dorsal root ganglion in rats using Tuina therapy, along with a method for evaluating its effectiveness based on pain behavior and histopathological results.