Yüksek Boyutlu Tek Hücreli Kütle Sitometrisi ile Akut İskelet Kası Yaralanması Sırasında İn Vivo Miyojenik Progenitörlerin Tanımlanması ve Analizi

Araştırmamız, yaşlanma ve hastalıkta kök hücre işlev bozukluğunun altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmaktadır. Amacımız, etkili rejenerasyon elde etmek için kas kök ve progenitör hücrelerin kas mikro ortamındaki diğer hücrelerle nasıl etkileşime girdiğini anlamaktır. Ayrıca kısır bir hücre iletişiminin yaşlanma ve hastalıkta kas kök hücre fonksiyonunu etkileyip etkilemediğini de inceliyoruz.

Kök hücre nişi içinde hücre-hücre iletişimini araştırmanın önündeki en büyük engel, tek hücre çözünürlüğü sağlayan teknolojilerin eksikliği olmuştur. Tek hücreli kütle sitometrisi, karmaşık dokularda çoklu hücre tipleri ve moleküler fenotipler üzerinde eş zamanlı yüksek verimli kantitatif analize izin verir. Protokolümüz, hücre yüzeyi belirteçlerine ve miyojenik transkripsiyon faktörlerine karşı antikorlar kullanarak kas rejenerasyonu sırasında nadir kök hücrelerin ve döllerin saflaştırılmasını ve derin profillenmesini sağlar.

Bu hücreleri incelemek, kas kök hücresinin kaderinin nasıl kontrol edildiğini anlamamıza ve etkili rejenerasyon yaparak hücre durumu geçişlerini yönlendiren ağları ortaya çıkarmamıza yardımcı olur. Tek bir hücre seviyesinde aynı anda 50 hücre yüzeyi ve hücre içi proteinin ölçülmesi, kas dokusundaki hücresel fonksiyonu araştırmak için değerli bir yaklaşımdır. Bu teknik, benzersiz moleküler imzaları tanımlayabilir ve yaşlanma ve hastalıkta kas kök hücre disfonksiyonunun yeni mekanizmalarını ortaya çıkarabilir.

Bu protokol, hücre durumu geçişinin sağlık ve hastalıkta doku yenilenmesini nasıl etkilediğini araştırmaya izin verir. Burada sunduğumuz aktive edilmiş kök hücrelerin imzası, kök hücre sessizliği çalışmalarını mümkün kılar. Daha önce mümkün değildi.

Artık aktive edilmiş kök hücreleri, CD98 High, CD44 High, yalnızca hücre yüzey işaretleyicisine dayanarak saflaştırabilir ve ilk kez nasıl sessizliğe döndüklerini inceleyebiliriz.