DK065872 (AKP), Biyomedikal Araştırma Mükemmellik Smith Aile Vakfı Ödülü (AKP), F31 DA023760 tarafından desteklenir.

Özet Ve xylazine (10 mg; İki aylık ortalama yaş C57BL/6J fareler veya eşdeğer ya da üç aylık eski yaş ortalaması Sprague Dawley rat veya eşdeğeri ketamin (100 mg / kg ip fareler için sıçanlar için 60 mg / kg ip) ile anestezi / kg, türler ya da ip). Sedasyon refleks gösterdiği çekilme yumuşak bir ayak tutam kullanarak izlenir <a href="/index/details.stp?ID=236">. Walantus ve ark</a> (Jüpiter, 6, 2007) ve <a href="/index/details.stp?ID=404">Szot ve ark.</a> (Jüpiter, 9, 2007). Termoregülasyon thermostatregulated bir ısıtma yastığı (ALA Instruments Inc.) Aracılığıyla sağlanan ve bir rektal termometre ile takip edilebilir. Baş kürk traş ve kesi önce iyot ile temizlenmelidir. Cilt kesisi (sıçanlar, fareler için 1 cm uzunluğunda 2 cm uzunluğunda) ve tüm yumuşak doku kafatası yüzeyinden kaldırılması sonra, kılavuz kanül yerleştirilmesi bregma ilgili belirlenir. 6 mm delik kemirgen cerrahi için tasarlanmış bir pille çalışan delici (Güzel Bilim Araçlar, Inc.) Kafatası yoluyla delinmiş. Bakım matkap meningeal zarlarına ya da kan damarları aracılığıyla nüfuz etmez, böylece alınır. Kafatası posterior çekirdek accumbens, dorsal striatum veya prefrontal korteks önde gelen ikili 5 mm 21 gauge paslanmaz çelik kılavuz milleri ile yerleştirilir. Franklin ve Paxinos, 1997 başına stereotaksik koordinatları olarak kurulan (Stereotaksik Koordinatlar Fare Beyin, Academic Press) veya Paxinos ve Watson, 2006 (Academic Press Stereotaksik Koordinatlar, Rat Beyin). İmplantlar, diş çimento tarafından teminat altına alınmıştır. % 0.9 serum fizyolojik bolus Laktatlı Zil sesleri, su kaybını önlemek için cerrahi sonunda (sıçanlarda 5mls SC ve fareler üzerinde yapılan 1 ml SC sıvılar normal vücut ısısı kaynaştı sonra) verilir. Buprenorfin (0.1-0.5mg/kg SC), hayvan acı görünür bir şekilde ihtiyaç duyulan bazında, daha sonra, günde iki kez uygulanan ve. Post-operatif enfeksiyon oluşursa Yerel antibiyotik tedavisi (basitrasin merhem) ve sistemik antibiyotik tedavisi (penisilin 100.000 IU / kg), ilk 48 saat post-op için her 12 saatte bir IM yönetilmektedir. Ameliyatın ardından, hayvanlar tek tek yiyecek ve su ad libitum yerleştirilmiştir. En az bir hafta önce kurtarma mikrodiyaliz ve ötenazi için izin verilir. Cerrahi kurtarma ardından, hayvanlar, bir mikrodiyaliz kafes ve mikrodiyaliz sondalar, ameliyat sırasında kurulmuş kılavuz milleri takılı ve çimentolu aktarılır. Prob kılavuz mili ile, deri, kas ve meningeal doku atlayarak çünkü prob yerleştirilmesi ağrı veya rahatsızlık neden olmaz. Bu nedenle, prob yerleştirilmesi anestezi olmadan yapılır ve nörokimyasal veya davranışı üzerinde herhangi bir anestezi kaynaklı etkiler kaçınılır. Biz deney bağlı olarak başka bir 8-12 saat boyunca her 30 dakikada bir örnekleme probları 12 saat stabilize izin ve. Biz lokomotor fotoseller veya deneyci tarafından hareketinin manuel kayıt yoluyla hayvan davranışlarını izlemek. Microdialysate örnekleri Elektrokimyasal Algılama (HPLC-EC) nörokimyasal algılama ve analiz aracı ile Yüksek Performans Sıvı Kromatografisi içine enjekte edilir. Bazal nörokimyasal ve lokomotor davranışları üzerindeki etkileri için bekliyoruz. Deneyin sonunda hayvanın aşırı dozda sistemik ketamin (200 mg / kg ip) ve xylazine (20 mg / kg, ip) tarafından ötenazi. Daha sonra kalp,% 4 paraformaldehid tarafından takip% 0.9 serum fizyolojik ile perfüze. Beyinleri, dondurulmuş ve doğru prob yerleşimi doğrulamak için mikrodiyaliz prob yolu boyunca kesilir. Prosedür <ol><li> Stereotaksik alet ve gerekli tüm malzemeleri ayarlayın. Alan ve araçların temizlenmesi ve sterilize emin olun. </li><li> Elektrikli tıraş makinesi ile kürk traş ediyorum. Kulakları, gözleri arasında git, kürk alanı etkin bir şekilde temizlemek için farklı yönlere jilet hareket. Povidin / iyot traş alana uygulayın ama o gözleri korumak. </li><li> Hayvan, kulak kanalı içine yerleştirerek ve kulak çubukları yerleştirin sıkma stereotaksik aparat üzerine monte edin. İlk montaj bir kulakta kulak kanalına bar ve yeri ve diğer kulak çubuğu slayt tutun. Kafası artık yan yana hareket ettirilebilir zaman doğru yerde biliyoruz. Stereotaksik ön montaj ile ağız Güvenli ve kafası bir cetvel ile aynı seviyede olduğundan emin olun. Dikey konumda stereotaksik araç platformu ile ilgili bir cetvel yerleştirin ve hayvan kafa derisi cetvel ve orta arasında 90 ° açı). Bu yeteneği sunar stereotaksik aracı ile bunu doğrulamaktadır. </li><li> Lambda sadece hayvanın gözleri arasında uzanan bir steril neşter ile kafa derisi üzerinde bir ön / arka kesi olun. Sterilize hemostat cilt çimdik ve kesi açık tutmak için kullanın. Birkaç steril pamuklu çubuk kullanarak, açıkta kalan kafatası yüzeyi kurulayın. <li> Bu konumu üzerinden kılavuz kanül sağ bregma, kafatası ve pozisyon bulmak, montaj üzerine kılavuz kanül koyun. Anterior / posterior ve lateral koordinatlarda yazınız. Bregma, stereotaksik atlas yardımı ile prob yerleştirilmesi için gerekli olan doğru koordinatları bulabilirsiniz. Bregma gelen ekleyerek veya çıkarılarak doğru koordinatları kılavuz kanül yerleştirin. Sonra bu ventral koordinat kayıt kafatası dokunmadan, kadar kılavuz kanül getirin. Kafatası bu yerde steril bir kalem ile bir kalem işareti olun, bu size sondaj olacak. </li><li> Kılavuz kanül çıkarın ve matkap sterilize edin. Kafatası genişliği üzerinden elde edene kadar dikkatlice kalem işareti de bir delik açın. Kılavuz kanül ile yanlarda dokunmadan delik açık olup olmadığını görmek için kontrol edin. Kanül düz bir yol temizlemek kadar delme ve kontrol edin. Delik yapıldıktan sonra, yavaşça kanül engelsiz ekleme sağlamak amacıyla meninksler yumruk steril bir iğne kullanın. </li><li> Kanül delik ve arka iki taraf için lateral kanül delik, iki iki anterior: Sonra, bir yandan matkap kullanarak, kafatası vidalar için altı delik. Altı vida sterilize ve sıkıca demirlemiş kadar kafatası üzerine koyun. </li><li> Etanol ve serum fizyolojik, montaj kılavuzu kanül temizleyin ve uygun ventral koordine etmek için yavaş yavaş daha düşük. Taraf dokunmadan değildir ve mükemmel bir şekilde dikey olduğunu emin olun. </li><li> Medial ve posterior kafatası vida arkasında çapa vida yerleştirin ve cımbız ile bir yerde tutun. Ince bir parti sıvı diş çimento karıştırın ve kılavuz kanül, vidalar, kafatası ve steril bir spatula ile geri kalanını kapsayacak. Başka bir parti, daha kalın bu kez, tamamen alan ve onu korumak için yeterli kanül ve çapa vida kapağı olun. </li><li> Çimento kalın olur ve katılaşır önce çimento kapağını pürüzsüz ve daha sonra cildi tahriş etmez emin olmak için spatula ile çimento fincan çimento fincan cilt ayrı ve kalıp. </li><li> Diş çimento, hayvan cihazdan çıkarmadan önce tamamen kurumasını bekleyin. Hemostat çıkarın. Basitrasin çimento kap etrafında her şekilde uygulayın. </li><li> Sonra hayvan stereotaksik cihaz kapalı, 1 ml serum fizyolojik SC (subkutan) tarafından takip penisilin IM (kas-içi) 0.25 ml enjekte edilir. </li><li> Hayvan kendi kafesine yerleştirin ve onu kurtarmak için onun odasına dönmeden önce bilinçli hale gelinceye kadar izlemek. </li><li> Onlar, cerrahi ve günlük post-op gün anestezi kurtarmak kadar enfeksiyon ve ağrı / sıkıntı değerlendirilmesi belirtileri, deney sonuna kadar, hayvanlar Monitör. Bu hafta sonları ve tatil günleri içerir. Düşük spontan hareket, taşıma üzerine sıkıntı seslendirme, hunched duruş, ishal, şişkinlik ve headmount alan ve beslenme eksikliği / içme akıntı, ağrı ve sıkıntı tüm işaretler vardır. Buprenorfin (0.1-0.5mg/kg SC) hayvan acı görünmesi durumunda, ihtiyaç duyulan bir bazında, daha sonra günde iki kez uygulandı. Post-operatif enfeksiyon oluşursa Yerel antibiyotik tedavisi (basitrasin merhem) ve sistemik antibiyotik tedavisi (penisilin 100.000 IU / kg), ilk 48 saat post-op için her 12 saatte bir IM yönetilmektedir. Bu belirtilerden herhangi biri buprenorfin yönetimi, ek sıvı ve ameliyattan 12 saat içinde antibiyotik tedavisi sonrasında devam ederse, hayvan ötenazi. </li></ol>

<ol>
	<li>Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdialysis+of+dopamine+interpreted+with+quantitative+model+incorporating+probe+implantation+trauma.">Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma.</a> J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).</li><li>Chen, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tissue+trauma+on+the+characteristics+of+microdialysis+zero-net-flux+method+sampling+neurotransmitters.">Effects of tissue trauma on the characteristics of microdialysis zero-net-flux method sampling neurotransmitters.</a> Journal of Theor. Biology. 238, 863-881 (2006).</li><li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N., Creese, I., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+eating+with+weight+loss+selectively+decreases+extracellular+dopamine+in+the+nucleus+accumbens+and+alters+dopamine+response+to+amphetamine,+morphine+and+food+intake.">Restricted eating with weight loss selectively decreases extracellular dopamine in the nucleus accumbens and alters dopamine response to amphetamine, morphine and food intake.</a> The Journal of Neuroscience. 15, 6640-6650 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

In vivo mikrodiyaliz yaşayan bir hayvanın farklı beyin sitelerinde birden fazla nörotransmitter ve metabolitleri ölçmek için tercih edilen bir araçtır. Ancak, sadece ekstraselüler nörokimyasalların seviyeleri izler ve gerçek zamanlı olarak nörotransmitter ekzositoz izlemek için zaman çözünürlüğü sunmuyor. &quot;Net akı&quot; olarak adlandırılan tekniği bir sürümü sayesinde, belirli bir yerinde gerçek bir nörotransmitter konsantrasyonu, plazma zarı taşıyıcıları da ile geri alım, nörotransmitter oranı ...

survivable stereotaxic surgery in rodents 

MSS farklı sistemik sorunlar (farmakolojik veya fizyolojik) etkilerinin belirlenmesi için uyanık hayvanların beyin nörotransmitterlerin ekstrasellüler bazal düzeylerini ölçmek için yeteneği sağlar. Örneğin, bir doğrudan hayvanın orta beyin dopamin projeksiyonları d-amfetamin veya doğal yiyecek gibi uyaranlara gibi dopamin serbest ilaçlara cevap nasıl ölçebilirsiniz. Bu video mikrodiyaliz prob eklemek ve implant ve ekstrasellüler düzeylerini ölçmek için elektrokimyasal algılama (HPLC-EC) ile birleştiğinde yüksek performanslı sıvı kromatografi nasıl kullanılacağını nasıl, sıçan beyin belirli siteleri hedef kılavuz kanüller implant nasıl gösterir oksitleyici nörotransmitterlerin ve metabolitleri. Mikrodiyaliz prob aracılığıyla ilaçlar Yerel hassas giriş alana özgü rafine bir iş için bir eylem bileşik s mekanizması sağlar. Bu teknik, mükemmel anatomik ve kimyasal çözümü vardır ama sadece mikrodiyaliz örnekleri gibi mütevazı bir zaman çözünürlük genellikle saptanabilir nörotransmitter düzeylerini sağlamak için her 20-30 dakikada bir işlenir. Tamamlayıcı ex vivo araçları (yani, dilim ve hücre kültürü elektrofizyoloji), gerçek zamanlı nörotransmisyon izleme ile yardımcı olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents at JoVE.com

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

The ability to measure extracellular basal levels of neurotransmitters in the brain of awake animals allows for the determination of effects of different ...

survivable-stereotaxic-surgery-in-rodents

Research

JoVE Journal

Biology

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents 

68.1K Görüntüleme.  Tufts University. Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Video: Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an extremely useful method, because it allows the study of the live intact brain. With appropriate preparations, this technique allows the observation of the same cortical area chronically, from minutes to months. In this video, we show a preparation for chronic in vivo imaging of the brain using two-photon microscopy. This technique was initially pioneered by Dr. Karel Svoboda, who is now a Howard Hughes Medical Institute Investigator at Janelia Farm. Preparations like the one shown here can be used for imaging of neocortical structure (e.g., dendritic and axonal dynamics),  to record neuronal activity using calcium-sensitive dyes, to image cortical blood flow dynamics, or for intrinsic optical imaging studies. Deep imaging of the neocortex is possible with optimal cranial window surgeries. Operating under the most sterile conditions possible to avoid infections, together with using extreme care to do not damage the dura mater during the surgery, will result in successful and long-lasting glass-covered cranial windows.


This video and protocol demonstrate how to implant a glass-covered cranial window in rodents. These preparations can be used for chronic in vivo two-photon imaging of the neocortex over time scales of months. It may also be used for other types of imaging, including optical intrinsic signal imaging.

Kronik Beyin Görüntüleme Kraniyotomi Cerrahi Prosedür

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an ...

Biyoloji

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In addition, the use of non-human primates has recently afforded the opportunity to naturally model complex psychiatric disorders such as alcohol abuse7. Here we describe a technique for blocking the brain in the coronal plane of the vervet monkey (Chlorocebus aethiops sabeus) in the intact skull in stereotaxic space. The method described here provides a standard plane of section between blocks and subjects and minimizes partial sections between blocks. Sectioning a block of tissue in the coronal plane also facilitates the delineation of an area of interest. This method provides manageable sized blocks since a single hemisphere of the vervet monkey yields more than 1200 sections when slicing at 50&mu;m. Furthermore by blocking the brain into 1cm blocks, it facilitates penetration of sucrose for cyroprotection and allows the block to be sliced on a standard cryostat.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of the normal processing of the brain. The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

Sigara insan Stereotaksik Uzay Primate Beyin Diseksiyon

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized. Primary cells are preferred in studies of cell cycle control, apoptosis, and DNA repair, as cancer cells carry mutations in genes involved in these processes. Primary cells cannot be cultured indefinitely due to the onset of replicative senescence or aneuploidization. Hence, new cultures need to be established regularly. The procedure for isolation of rodent embryonic fibroblasts is well established, but isolating adult fibroblast cultures often presents a challenge. Adult rodent fibroblasts isolated from mouse models of human disease may be a preferred control when comparing them to fibroblasts from human patients. Furthermore, adult fibroblasts are the only available material when working with wild rodents where pregnant females cannot be easily obtained. Here we provide a protocol for isolation and culture of adult fibroblasts from rodent skin and lungs. We used this procedure successfully to isolate fibroblasts from over twenty rodent species from laboratory mice and rats to wild rodents such as beaver, porcupine, and squirrel.

This article describes a protocol for isolation and maintenance of primary fibroblast cultures from skin and lung tissue of wild rodents.

Kemirgenler itibaren İlköğretim Yetişkin Fibroblast Kültürleri kurulması

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform surgery on a rodent. Students, post-doctoral scholars, and others interested in performing surgery on rodents as part of a research protocol may not have had formal surgical training as part of their required coursework. Surgery itself is a technical skill, and one that will improve with practice. The principles of aseptic technique, however, often remain unexplained or untaught. For most new surgeons, this vital information is presented in piecemeal fashion or learned on the job, neither of which is ideal. It may also make learning how to perform a particular surgery difficult, as the new surgeon is learning both a surgical technique and the principles of asepsis at the same time. This article summarizes and makes recommendations for basic surgical skills and techniques necessary for successful rodent surgery. This article is designed to supplement hands-on training by the user's institution.

Before attempting surgery, a new surgeon should have training in basic surgical techniques and concepts. This article will present basic surgical considerations with an emphasis on rodents.

Yeni Cerrah Kemirgen Cerrahisi İlkeleri

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform ...

Intracavernosal Pressure Recording to Evaluate Erectile Function in Rodents

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. Rodents are employed by many studies to research the physiology/pathology of erectile function. Erectile function in rodents can be evaluated by measuring the intracavernosal pressure (ICP). In practice, ICP can be monitored following electrical stimulation of the cavernous nerves (CNs). The arterial pressure of the carotid artery (the mean arterial pressure) is used as the reference for ICP. Using ICP recording protocols, many key parameters of erectile function can be measured from the ICP response curve. The ICP measurement provides more information than the apomorphine-induced penile erection test, and is cheaper than telemetric monitoring of the corpus spongiosum penis, making this method the most popular one to evaluate erectile function. However, compared to the easily-performed APO-induced erectile function test, successful ICP recordings require attention to detail, practice, and adherence to the operation method. In this work, an introduction to ICP recording in rats is provided to complement the procedure efficiently.

Intracavernosal pressure recording (ICP) is an important method to evaluate the erectile function of experimental animals. Here, a detailed protocol is demonstrated for the recording procedure of ICP by catheterizing the crura penis and then electrically stimulating the cavernous nerves in rats.

İntrakavernozal basınç kayıt Rodents erektil işlev değerlendirmek için

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. ...

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and disease. EIM is obtained by applying a low-intensity, directionally focused, electrical current to a muscle of interest across a range of frequencies (i.e., from 1 kHz to 10 MHz) and recording the resulting voltages. From these, several standard impedance components, including the reactance, resistance, and phase, are obtained. When performing ex vivo measurements on excised muscle, the inherent passive electrical properties of the tissue, namely the conductivity and relative permittivity, can also be calculated. EIM has been used extensively in animals and humans to diagnose and track muscle alterations in a variety of diseases, in relation to simple disuse atrophy, or as a measure of therapeutic intervention. Clinically, EIM offers the potential to track disease progression over time and to assess the impact of therapeutic interventions, thus offering the opportunity to shorten the clinical trial duration and reduce sample size requirements. Because it can be performed noninvasively or minimally invasively in living animal models as well as humans, EIM offers the potential to serve as a novel translational tool enabling both preclinical and clinical development. This article provides step-by-step instructions on how to perform in vivo and ex vivo EIM measurements in mice and rats, including approaches to adapt the techniques to specific conditions, such as for use in pups or obese animals.

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

This article details how to perform in vivo (using surface and needle electrode arrays) and ex vivo (using a dielectric cell) electrical impedance myography on the rodent gastrocnemius muscle. It will demonstrate the technique in both mice and rats and detail the modifications available, (i.e., obese animals, pups).

Kemirgenlerde In Vivo ve Ex Vivo Elektriksel Empedans Miyografisi Gerçekleştirme

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and ...

Decellularizasyon Yoluyla İskelet Kası Yağ İnfiltrasyonunun Miktar Tayini

Decellularization-Based Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic disorders, and dystrophies. Clinically in human populations, fatty infiltration is assessed using noninvasive methods, including computed tomography (CT), magnetic resonance imaging (MRI), and ultrasound (US). Although some studies have used CT or MRI to quantify fatty infiltration in mouse muscle, costs and insufficient spatial resolution remain challenging. Other small animal methods utilize histology to visualize individual adipocytes; however, this methodology suffers from sampling bias in heterogeneous pathology. This protocol describes the methodology to qualitatively view and quantitatively measure fatty infiltration comprehensively throughout intact mouse muscle and at the level of individual adipocytes using decellularization. The protocol is not limited to specific muscles or specific species and can be extended to human biopsy. Additionally, gross qualitative and quantitative assessments can be made with standard laboratory equipment for little cost, making this procedure more accessible across research laboratories.

Yazar Spotlight: İskelet Kası Yağ İnfiltrasyonunun Decellularizasyona Dayalı Miktar Tayini  

The present study describes decellularization-based methodologies for visualizing and quantifying intramuscular adipose tissue (IMAT) deposition through intact muscle volume, as well as quantifying metrics of individual adipocytes that comprise IMAT.

İskelet Kası Yağ İnfiltrasyonunun Decellularizasyona Dayalı Miktar Tayini

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic ...

Mikropsuz Nasonia Yaban Arıları Yetiştirme

Optimizing the Rearing Procedure of Germ-Free Wasps

Aseptic rearing technology is a method of culturing insects under sterile or almost sterile conditions, which can effectively eliminate the influence of external microorganisms on insect microbiota and thus promote the rapid development of insect microbiota research. Nasonia (wasp genus) is a parasitic wasp insect that has many advantages, such as a short lifespan, high genetic variation, easy operation, etc., and is widely used as an insect model system. Unlike antibiotic treatment, which can only reduce the number of microorganisms in animals, aseptic rearing techniques can control both the composition and quantity of microorganisms in animals, further facilitating the study of host-microbe interactions. However, previous versions of Nasonia rearing medium (NRM) have some defects and problems, such as a complex and time-consuming preparation process, easy contamination by bacteria or fungi, and short storage time. Therefore, this study solves these problems by optimizing the tools used in the NRM preparation process, storage conditions, and component ratios. The optimized medium could allow storage at -20 &#176;C for at least 3 months and eliminate the possibility of NRM contamination during feeding sterile wasps. This further improves the survival rate and health level of aseptic Nasonia, which is important for using Nasonia as a model for microbial research.

Yazar Spotlight: Mikropsuz Yaban Arılarının Yetiştirme Prosedürünü Optimize Etme  

Nasonia wasp embryos were dissected from Lucillia sericata pupae after parasitization for 12-24 h and washed with alcohol and 10% sodium hypochlorite solution to obtain germ-free embryos. After rearing the germ-free embryos&#160;and supplying them with Nasonia rearing medium to grow and develop in vitro, germ-free Nasonia adults were obtained.

Mikropsuz eşekarısı yetiştirme prosedürünün optimize edilmesi

Aseptic rearing technology is a method of culturing insects under sterile or almost sterile conditions, which can effectively eliminate the influence of ...