Name: induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice and evaluation of the disease-dependent distribution of immune cells in various tissues
Uploaded: 2016-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues at JoVE

This work was supported by the Else Kr&#246;ner-Fresenius Foundation (EKFS) Research Training Group Translational Research Innovation - Pharma (TRIP) and by the "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-&#246;konomischer Exzellenz (LOEWE), Schwerpunkt: Anwendungsorientierte Arzneimittelforschung" of the State of Hesse.

倫理の声明：私たちの実験手順はRegierungspräsidiumダルムシュタット（ドイツ）の倫理委員会によって承認され、国内および欧州の規制に確認されています。すべての努力は、動物の苦痛を最小限にし、使用する動物の数を減少させました。 1. EAEモデル<ol><li> EAEモデルの誘導<ol><li> EAEの誘導のために10〜13週齢の雌129S4 / SvJae×C57BL / 6マウスを使用してください。 </li><li> 200...

ここで説明EAEモデルは、MSのモデルとして最も注目されており、日常的にMS 32のための治療戦略を試験する際に使用されます。マウスの疾患は、MSの多くの臨床的および組織学的特徴を示し、神経細胞の抗原に対する自己免疫の誘導によって引き起こされます。ミエリン抗原に対する感作は、血液脳関門機能不全に関連し、それによって、CNSへの免疫細胞浸潤されます。我々の知見は?...

多発性硬化症（MS）およびその対応する動物モデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）は、中枢神経系（CNS）における自己免疫神経炎症の変化を示します。早期活性MSおよびEAEの病変は、浸潤免疫細胞の存在によって特徴付けられます。 MSの病因は不明であるが、広く自己反応性T細胞によって媒介ミエリンの破壊を伴うと考えられています。これらの自己反応性T細胞は、循環からのB細胞、単球および好中球などの他の免疫細胞を誘引前炎症性サイトカインおよびケモカインを分泌します。単球はマクロファージに分化します。自己反応性T細胞によって分泌されるインターフェロンγ（IFNγ）は、前炎症性マクロファージにマクロファージを偏光します。前炎症性マクロファージ放出サイトカインおよびオリゴデンドロサイトのアポトーシスを促進する活性酸素種。オリゴデンドロサイトの死は脱髄につながります。さらに、B細胞は、pに分化します細胞をlasma、最終的にミエリンの劣化が生じ、ミエリン鞘に対する自己抗体をリリース。ミエリンの喪失は、軸索及びニューロンの劣化にし、それによってMS 1の主な特徴を表すCNSにおける病変部位の形成をもたらします。周囲に、T細胞とB細胞はリンパ節において活性化され、それらは、脾臓中で増殖し、中枢神経系への循環を通って移動します。単球および好中球は骨髄で増殖し、また、中枢神経系への循環を通って移動します。 血液中へのまたはCNSへの血流からの骨髄、脾臓およびリンパ節からの白血球の血管外漏出は、ケモカインおよびケモカイン受容体によって媒介される白血球と内皮細胞との間の分子間相互作用を含むいくつかの要因に依存する多段階プロセスです。種々の細胞型によるケモカインの産生、免疫reactio中に誘導することができますその後炎症2,3の部位への免疫細胞を補充腫瘍壊死因子α（TNFα）などのサイトカイン、IFNγおよびインターロイキン6（IL-6）、によってN。免疫細胞は、炎症部位への細胞型及び移動経路に応じて、それらの表面上のケモカイン受容体のサブセットを提示します。したがって、CXCR2、CCR1とCXCR1は、骨髄や血液4で成熟した好中球上に発現し、そのリガンド、CXCL2、CCL5またはCXCL6の結合され、それぞれ、好中球を活性化し、その後、細胞の遊走を内皮細胞への接着を促進し、組織5-9に。 CCL2とCCL20はそれぞれ、CCR2 11およびCCR6 12を発現し 、単球およびTh1 / Th17細胞10を 、引き付けます。 T細胞、単球およびマクロファージを含む、13の異なる細胞型によって発現CCR1及びCCR5、CCL3、CCL5及びCCL7に結合し、MS 14の間にアップレギュレートされます。 CXCR3は、T細胞上に発現され、CCL9、CCL10に結合され、かつCCL11 15。 MSの治療における一つの主要な戦略は、免疫細胞の枯渇またはCNSへの免疫細胞の浸潤の予防です。したがって、特定のケモカイン受容体の遮断は、EAEに検討されています。拮抗作用またはCCR1 16の遺伝子欠失、CCR2 17は 、CCR7 18またはCXCR2 19は、拮抗作用またはCCR1 20の遺伝子欠失のに対し、CCR5 20またはCXCR3 21は病変を減少させなかった、EAEの病理を低減します。したがって、白血球上の特定のケモカイン受容体の発現は、CNSへの後者の浸透のために重要であり、EAEのコースを指示します。 浸潤免疫細胞は、順に、炎症過程またはニューロン22の劣化を促進し、TNFα、IL-6およびIL-1βなどのサイトカインを放出するため、免疫細胞の枯渇が、MS患者に対する有効な治療戦略です。また、自動反応性Th1細胞は、順番に、TNFα、IL-1βおよびIL-23を解放するためにマクロファージを刺激しIFNγを放出します。 この原稿は、EAEの誘導、EAEマウスの種々の組織における免疫細胞の分布とサイトカインレベル（mRNA）の決意を示しています。細胞は、最終的にCNSにおける病変形成をもたらす炎症過程の時間依存性の概要を提供するために、疾患の経過中の異なる時点で単離しました。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="913">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">ABI Prism 7500 Sequence Detection System&#160;</td>
			<td style="width:305px;">Applied Biosystems, Austin, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:195px;">quantitative PCR system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Accutase</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>A6964</td>
			<td>cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD3-PE-CF594</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>562286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD4-V500</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560782</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD8-eFluor650</td>
			<td>eBioscience, Frankfurt, Germany</td>
			<td>95-0081-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD11b-eFluor605</td>
			<td>eBioscience, Frankfurt, Germany</td>
			<td>93-0112-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD11c-AlexaFluor700</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD19-APC-H7&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD45-Vioblue&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany</td>
			<td>130-092-910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CompBeads</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>552843</td>
			<td>compensation beads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometric absolute count standard&#160;</td>
			<td>Polyscience, Eppelheim, Germany</td>
			<td>BLI-580-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometer Setup and Tracking beads&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>642412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase I</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">EAE Kit</td>
			<td>Hooke Laboratories, Lawrence, USA</td>
			<td>EK2110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">F4/80-PE-Cy7&#160;</td>
			<td>BioLegend, Fell, Germany</td>
			<td>123114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">First Strand cDNA-Synthesis kit&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td>K1612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fc receptor-1 blocking buffer&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany</td>
			<td>130-092-575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometric absolute count standard</td>
			<td>Polyscience, Eppelheim, Germany</td>
			<td>580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FlowJo software v10&#160;</td>
			<td>Treestar, Ashland, USA</td>
			<td></td>
			<td>flow cytometry software</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">LSRII/Fortessa&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ly6G-APC-Cy7&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysing solution&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>349202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Maxima SYBR Green&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td>K0221</td>
			<td>fluorescent DNA binding dye&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNeasy Mini Kit&#160;</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td>RNA extraction kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice and evaluation of the disease-dependent distribution of immune cells in various tissues

多発性硬化症は、認知および運動障害を生じる中枢神経系（CNS）において病変形成することを特徴とする炎症性自己免疫疾患であると推定されます。それはまた、CNS内の病変形成、運動障害を特徴とし、また、自己免疫疾患および炎症反応により駆動されるので、実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）は、MSの有用な動物モデルです。 EAEモデルの一つは、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（MOG）マウスにおける35-55に由 ​​来するペプチドを用いて誘導されます。 EAEマウスは、進行性疾患のコースを開発しています。このコースは3つのフェーズに分かれています。前臨床段階（日0から9）、疾患の発症（日10から11）と急性期（日12から14）。 MSおよびEAEは、CNSに浸潤する自己反応性T細胞によって誘導されます。これらのT細胞は、さらに、免疫細胞の動員をもたらすケモカインおよびサイトカインを分泌します。脊髄dのため、免疫細胞の分布3疾患の段階をuringすることを検討しました。 T細胞、B細胞および単球の活性化/増殖/蓄積が開始される疾患の時点を強調するために、リンパ節、脾臓および血液中の免疫細胞の分布についても評価しました。さらに三病段階におけるいくつかのサイトカイン（IL-1β、IL-6、IL-23、TNFα、IFNγ）のレベルは、疾患の炎症過程への洞察を得るために、測定されました。結論として、データは、EAEの病理中の免疫細胞の機能プロファイルの概要を説明します。

図1は、この記事で説明されているさまざまな方法の概略図を示します。1）マウスは、MOG 35-55抗原の注射を受け、10.7±0.3日28後の初期の臨床症状を起こします。 EAEマウスの代表的な疾患経過を図1に示されている。2）種々の組織（脾臓、リンパ節、腰部脊髄）および血液を前臨床段階（2日目、4日目の...

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Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

実験的自己免疫性下垂体炎の誘導のためのマウス下垂体免疫原の調製

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Seven Steps to Stellate Cells

細胞星状に7つのステップ

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

移入、抗原チャレンジにより実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）抵抗性マウス系統の応答がないことを克服する

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

BALB/cマウスにおける薬物誘発性自己免疫性肝炎の誘導による発症機序の研究

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

生体内で実験的自己免疫性脳脊髄炎時単位の内皮細胞およびグリアの障壁の障害の可視化

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

グルコース-6-リン酸イソメラーゼ(G6PI)誘発RAマウスにおけるiNKT細胞の導入免疫療法

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系におけるリンパ球浸潤のフロー細胞量分析

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Isolating Central Nervous System Tissues and Associated Meninges for the Downstream Analysis of Immune cells

免疫細胞の下流分析のための中枢神経系組織および関連する髄膜の単離

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier ...