Name: induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice and evaluation of the disease-dependent distribution of immune cells in various tissues
Uploaded: 2016-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues at JoVE

This work was supported by the Else Kr&#246;ner-Fresenius Foundation (EKFS) Research Training Group Translational Research Innovation - Pharma (TRIP) and by the "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-&#246;konomischer Exzellenz (LOEWE), Schwerpunkt: Anwendungsorientierte Arzneimittelforschung" of the State of Hesse.

ЭТИКА ЗАЯВЛЕНИЕ: Наши экспериментальные процедуры одобрены Комитетом по этике Regierungspräsidium Дармштадт (Германия) по и подтвердить к национальным и европейским нормам. Все усилия были сделаны, чтобы минимизировать страдания животных и уменьшить количество используемых животных. <p class="...

Модель EAE , описанный здесь получил наибольшее внимание как модель MS и обычно используется при тестировании терапевтических стратегий для MS 32. Заболевание мыши обладает многими клинические и гистологические характеристики МС и обусловлена ​​индукцией аутоиммунитета к нейрона...

Рассеянный склероз (РС) и соответствующая модель животного, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ), показывают, аутоиммунные изменения нейровоспаления в центральной нервной системе (ЦНС). Ранние активные поражения MS и EAE характеризуются наличием проникших иммунных клеток. Этиология МС остается неизвестным, но широко считается вовлечь разрушение миелина, опосредованного аутореактивных Т-клеток. Эти аутореактивные Т-клетки секретируют провоспалительные цитокины и хемокины, которые привлекают другие иммунные клетки, такие как В-клетки, моноциты и нейтрофилы из кровообращения. Моноциты дифференцируются в макрофаги. Интерферон гамма (IFN &amp; gamma;), секретируемые аутореактивного Т-клетки поляризует макрофаги в текущем провоспалительных макрофагов. Провоспалительных макрофаги высвобождения цитокинов и активных форм кислорода, которые способствуют апоптозу в олигодендроциты. Смерть олигодендроцитов приводит к демиелинизации. Кроме того, В-клетки дифференцировались в рКлетки Lāsma и высвобождения аутоантитела против миелиновой оболочки, в конечном счете, приводит к ухудшению миелина. Потеря миелина приводит к деградации аксонов и нейронов и тем самым к образованию участков поражения в ЦНС , которые представляют собой основную характеристику МС 1. На периферии, Т-клетки и В-клетки активируются в лимфатических узлах, они пролиферируют в селезенке и мигрируют через циркуляцию в центральную нервную систему. Моноциты и нейтрофилы пролиферировать в костном мозге, а также мигрируют через циркуляцию в центральную нервную систему. Лейкоцитов из костного мозга, селезенки и лимфатических узлов в кровь или из кровотока в ЦНС является многоэтапный процесс, который зависит от нескольких факторов, в том числе молекулярных взаимодействий между лейкоцитами и эндотелием, опосредованных хемокинов и рецепторов хемокинов. Производство хемокинов различными типами клеток могут быть вызваны во время иммунной reactioN цитокинами , такими как фактор некроза опухоли альфа (ФНО), IFN &amp; gamma ; и интерлейкина-6 (ИЛ-6), который впоследствии вербует иммунные клетки к месту воспаления 2,3. Иммунные клетки представляют подмножество рецепторов хемокинов на их поверхности, в зависимости от типа клеток и пути миграции в воспаленном участке. Таким образом, CXCR2, CCR1 и CXCR1 экспрессируются на зрелых нейтрофилов в костном мозге и крови 4, и связывание его лигандов, CXCL2, CCL5 или CXCL6, соответственно, активирует нейтрофилы и способствует их адгезии к эндотелию и в дальнейшем, миграцию клеток в ткани 5-9. CCL2 и CCL20 привлекают моноциты и клетки Th1 / Th17 10, которые выражают CCR2 11 и CCR6 12, соответственно. CCR1 и CCR5, выраженное различными типами клеток, включая Т - клетки, моноциты и макрофаги 13, связывают CCL3, CCL5 и CCL7 и усиливает свою активность во время МС 14. CXCR3 экспрессируется на Т-клетках и связывает CCL9, CCL10 иCCL11 15. Одной из основных стратегия лечения рассеянного склероза является истощение иммунных клеток или предотвращение инфильтрации клеток иммунной в ЦНС. Таким образом, блокада специфических рецепторов хемокинов было исследовано в EAE. Антагонизм или генетическое удаление CCR1 16, CCR2 17, CCR7 18 или CXCR2 19 уменьшает EAE патологии, в то время как антагонизм или генетического удаления CCR1 20, 20 CCR5 или CXCR3 21 не снижали патологии. Следовательно, экспрессия специфических рецепторов хемокинов на лейкоцитах является решающим для проникновения последнего в ЦНС и диктует ход EAE. Истощение иммунных клеток является эффективной стратегией для лечения пациентов с рассеянным склерозом, так как внедренные иммунные клетки высвобождают цитокины, такие как TNF &amp; alpha ; , IL-6 и IL-1 , который, в свою очередь, способствуют воспалительного процесса или деградацию нейронов 22. Кроме того, ав-реактивные Th1-клетки, релиз IFN &amp; gamma; в свою очередь, стимулирует макрофаги к выпуску TNF-alpha, IL-1 &amp; beta; и IL-23. Эта рукопись описывает индукцию ЭАЭ, определения распределения иммунных клеток и уровни цитокинов (мРНК) в различных тканях у мышей EAE. Клетки были выделены в различные моменты времени в течение болезни, чтобы обеспечить обзор воспалительных процессов, которые в конце концов приводят к образованию поражений в ЦНС зависит от времени.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="913">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">ABI Prism 7500 Sequence Detection System&#160;</td>
			<td style="width:305px;">Applied Biosystems, Austin, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:195px;">quantitative PCR system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Accutase</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>A6964</td>
			<td>cell detachment solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD3-PE-CF594</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>562286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD4-V500</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560782</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD8-eFluor650</td>
			<td>eBioscience, Frankfurt, Germany</td>
			<td>95-0081-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD11b-eFluor605</td>
			<td>eBioscience, Frankfurt, Germany</td>
			<td>93-0112-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD11c-AlexaFluor700</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD19-APC-H7&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD45-Vioblue&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany</td>
			<td>130-092-910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CompBeads</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>552843</td>
			<td>compensation beads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometric absolute count standard&#160;</td>
			<td>Polyscience, Eppelheim, Germany</td>
			<td>BLI-580-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometer Setup and Tracking beads&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>642412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNase I</td>
			<td>Sigma Aldrich Munich, Germany</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:295px;">EAE Kit</td>
			<td>Hooke Laboratories, Lawrence, USA</td>
			<td>EK2110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">F4/80-PE-Cy7&#160;</td>
			<td>BioLegend, Fell, Germany</td>
			<td>123114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">First Strand cDNA-Synthesis kit&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td>K1612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fc receptor-1 blocking buffer&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany</td>
			<td>130-092-575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometric absolute count standard</td>
			<td>Polyscience, Eppelheim, Germany</td>
			<td>580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FlowJo software v10&#160;</td>
			<td>Treestar, Ashland, USA</td>
			<td></td>
			<td>flow cytometry software</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">LSRII/Fortessa&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ly6G-APC-Cy7&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>560600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysing solution&#160;</td>
			<td>BD, Heidelberg, Germany</td>
			<td>349202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Maxima SYBR Green&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td>K0221</td>
			<td>fluorescent DNA binding dye&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNeasy Mini Kit&#160;</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td>RNA extraction kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice and evaluation of the disease-dependent distribution of immune cells in various tissues

Рассеянный склероз, как предполагают, воспалительное аутоиммунное заболевание, которое характеризуется образованием поражения центральной нервной системы (ЦНС), что приводит к когнитивной и двигательных нарушений. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) является полезной животной моделью MS, так как он также характеризуется образованием поражением ЦНС, нарушение двигательной и также определяется аутоиммунных и воспалительных реакций. Одна из моделей EAE индуцируют с пептидом , полученным из миелин олигодендроцитов белка (MOG) 35-55 у мышей. Мыши EAE разработать прогрессивное течение заболевания. Этот курс делится на три фазы: доклинические фазы (день 0 - 9), начало заболевания (день 10 - 11) и острой фазы (день 12 - 14). МС и ЕАЕ индуцируются аутореактивных Т-клеток, которые проникают в ЦНС. Эти Т-клетки секретируют хемокины и цитокины, которые приводят к набору дополнительных иммунных клеток. Таким образом, распределение иммунных клеток в спинном мозге Dйти во время трех фаз заболевания была исследована. Для того, чтобы выделить момент времени болезни, при которой начинается активация / пролиферации / накопление Т-клеток, В-клеток и моноцитов, распределение иммунных клеток в лимфатических узлах, селезенке и крови также оценивали. Кроме того, уровни ряда цитокинов (IL-1 &amp; beta;, IL-6, IL-23, TNF-alpha, IFN &amp; gamma;) в трех фазах заболевания были определены, чтобы получить представление о воспалительных процессах заболевания. В заключение отметим, что данные обеспечивают обзор функционального профиля иммунных клеток в процессе EAE патологии.

На рисунке 1 приведен схематический обзор различных способов , описанных в этой статье. 1) Мыши получали инъекцию MOG 35-55 антигена и развить начальные клинические симптомы после 10,7 ± 0,3 дней 28. Представитель Конечно болезнь EAE мышей показано ?...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues at JoVE

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей и оценка болезни зависимого распределения иммунных клеток в различных тканях

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Подготовка Мышь гипофиза Иммуноген для индукции экспериментального аутоиммунного гипофизит

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Индукция экспериментального аутоиммунного гипофизит в SJL Мыши

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Seven Steps to Stellate Cells

Семь шагов к звездчатых клеток

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Преодоление невосприимчивости в экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) штаммов мыши по усыновлению и передачи Антигенная вызов

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Миелин олигодендроцитов гликопротеин (МОГ<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Индуцированные Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) в C57BL / 6 мышей

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Индукция лекарственно-индуцированного аутоиммунного гепатита у мышей BALB/c для изучения его патогенных механизмов

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

Визуализация обесценения эндотелия и глиальных барьеров нервно-сосудистого подразделения во время Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит в естественных условиях

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Приемная иммунотерапия клеток iNKT в глюкозе-6-фосфатной исофазе (G6PI)-индуцированной РА мышей

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Цитометрический анализ инфильтрации лимфоцитов в Центральной нервной системе во время экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Isolating Central Nervous System Tissues and Associated Meninges for the Downstream Analysis of Immune cells

Выделение тканей центральной нервной системы и связанных с ними мозговых оболочек для последующего анализа иммунных клеток

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier ...