Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Alt dyr arbejde blev godkendt af Kontoret for Lab Animal Care på San Diego State University og udføres under anerkendte veterinære standarder. Hunmus, 8 år - 16 uger blev anvendt til udvikling af denne fremgangsmåde. 1. Fremstilling og intraperitoneal injektion af β-estradiol <ol><li> Mål ud β-østradiol (0,5 mg / mus) på afveje papir, mens iført egnede personlige værnemidler (PPE). ADVARSEL: β-estradiol kan optages gennem huden og slimhindeoverflader. </li><li> Overfør β-estradi...

For at fremme fremføringen af ​​forståelsen af ​​GBS interaktioner med både værten og andre mikrober i forbindelse med værten, er en dyremodel påkrævet. Dette arbejde beskriver de tekniske aspekter af indførelse af GBS vaginal kolonisering hos mus. Denne protokol opnår&gt; 90% kolonisering af mus uden anvendelse af anæstetika til inokulering bakterier eller at indsamle prøver podning, immun-suppressants at muliggøre kolonisering, vaginal forvask, eller tilsætningsstoffer til at fortykke inokulum. De...

Streptococcus agalactiae, gruppe B-Streptococcus (GBS), er en indkapslet, gram-positiv bakterie, som ofte isoleret fra tarmen og urogenitale kanal af raske voksne. I 1970&#39;erne, GBS opstået som den førende agent for smitsomme neonatal dødelighed, med over 7.000 tilfælde af neonatal sygdom årligt 1. Tidlig debut GBS sygdom (EOD) forekommer i de første timer eller dage af livet, opstår som lungebetændelse eller åndedrætsbesvær, og ofte udvikler sig til sepsis, mens sent debuterende sygdom (LOD) ensues efter flere måneder og præsenterer med bakteriæmi, som ofte forskud til meningitis 2. Som af 2002, Centers for Disease Control og Forebyggelse anbefaler universel screening for GBS vaginal kolonisering i slutningen drægtighed og intrapartum antibiotisk profylakse (IAP) til GBS-positive mødre 1. På trods af den reduktion af tidlig debut sygdom til ca. 1.000 sager i USA årligt på grund af IAP,GBS er fortsat den hyppigste årsag til tidlig debut neonatal sepsis, og sent debuterende forekomst forbliver upåvirket 1. Hvad enten i livmoderen, under fødslen, eller endda i sent forekommende tilfælde, neonatal eksponering for GBS kræver overlevelse, tværgående gennem en række værtsmiljøer og barrierer, immun unddragelse, og, i tilfælde af meningitis, passage af stærkt reguleret blod- hjernebarrieren 2. Opstrøms for disse virulente interaktioner inden den nyfødte er den indledende kolonisering af moderens vagina. Maternal GBS vaginal kolonisering varierer fra 8-18% i de udviklede lande og udviklingslande, med en anslået gennemsnit på 12,7% 3,4. GBS koloniseringen af vagina under graviditeten kan være konstant, intermitterende, eller forbigående mellem de enkelte kvinder 5. Interessant, er en maternal alder&gt; 36 år i forbindelse med vedvarende kolonisering 6. Talrige biologiske og socio-økonomiske risikofaktorer for GBS vaginal koloniseringer blevet identificeret. Biologiske faktorer indbefatter gastrointestinale GBS kolonisering og fravær af Lactobacillus i tarmen. Imidlertid har ethnicity, fedme, hygiejne, og seksuel aktivitet også været forbundet med GBS vaginal vognen 7. Selvom berygtet for at forårsage neonatale infektioner, GBS forårsager også en række maternelle infektioner både peripartum og postpartum. GBS transport forøges i kvinder med vaginitis 8 og, i nogle tilfælde kan endda være sygdommen enhed 9. Derudover kan GBS opstigning af den reproduktive tarmkanalen under graviditet resultere i intra-fostervand infektion eller chorioamnionitis 10. Øvrigt i op til 3,5% af graviditeter, GBS formidler på urinblæren at forårsage en urinvejsinfektion eller asymptomatisk bakteriuri 11. GBS bacteriuri under graviditet er forbundet med en øget risiko for intrapartum feber, chorioamnionitis, for tidlig fødsel, og premature hindebristning 12. Tilsammen er tilstedeværelsen af ​​GBS i vagina knyttet til infektioner af multiple værtsvæv, og evnen til at eliminere GBS fra denne niche er bydende nødvendigt for både maternal og neonatal sundhed. Indtil for nylig var størstedelen af arbejdet undersøger GBS interaktioner med cervicovaginal tarmkanalen begrænset til in vitro celle modeller 13-15. Disse in vitro-forsøg har vist, bakterielle faktorer, der er vigtige for overholdelse, herunder overfladeproteiner sådan en pili og serin-rige gentagelser 17,18, samt to-komponent reguleringsordninger 15,19 og den globale transkriptionel respons vaginale epitel til GBS 19. Men for at kunne belyse host-mikrobe interaktioner i vagina, et solidt dyremodel er nødvendig. Tidlig arbejde viste, at GBS kan genvindes fra vagina af podede mus 20,21 og rotter &lt;sup&gt; 22 i både gravide og ikke-gravide betingelser. I 2005 blev kortvarig GBS vaginal kolonisering modelleret i mus for at undersøge effekten af en fag lytisk enzym til behandling af vaginal GBS over en 24 timers periode 23. Flere år senere blev en langsigtet GBS vaginal kolonisering musemodel udviklet til at studere vært og bakterielle faktorer, der styrer GBS vedholdenhed. Denne model har identificeret adskillige GBS faktorer, der bidrager til kolonisering, herunder overflade vedhæng 17,18 og GBS to-komponent systemer 19,24. Denne model har bidraget til at identificere værten reaktionsmekanismer 19,25 og blev brugt til at teste flere terapeutiske strategier, herunder immunmodulerende peptider 26 og probiotika 27. Denne protokol giver den nødvendige vejledning til at pode GBS i musen vagina og efterfølgende spore kolonisering og indsamle prøver til yderligere analyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="592">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sesame oil&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">&#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E8875-1G</td>
			<td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &#946;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">200 &#956;L gel loading pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:91px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1252-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td>
			<td style="width:91px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-801 A 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CHROMagar StrepB</td>
			<td style="width:91px;">DRG International</td>
			<td style="width:119px;">SB282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Todd Hewitt Broth</td>
			<td style="width:91px;">Hardy Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">7161C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 G, 1.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">26 G, 0.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.45 &#956;m PVDF syringe filters</td>
			<td style="width:91px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">6900-2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1X</td>
			<td style="width:91px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (gruppe B-Streptococcus, GBS), er en gram-positiv, asymptomatisk kolonisator af fordøjelsessystemet og vagina på 10 - 30% af voksne. I immunsvækkede individer, herunder nyfødte, gravide kvinder og ældre mennesker, kan GBS skifte til en invasiv patogen forårsager sepsis, gigt, lungebetændelse og meningitis. Fordi GBS er en førende bakterielt patogen af ​​nyfødte, er aktuel profylakse består af sene drægtighed screening for GBS vaginal kolonisering og efterfølgende peripartum antibiotisk behandling af GBS-positive mødre. Heavy GBS vaginal byrde er en risikofaktor for både neonatal sygdom og kolonisering. Desværre, lidt er kendt om værten og bakterielle faktorer, der fremmer eller tillader GBS vaginal kolonisering. Denne protokol beskriver en teknik til indførelse vedvarende GBS vaginal kolonisering anvendelse af en enkelt β-østradiol forbehandling og daglig prøvetagning til bestemmelse bakteriel load. It yderligere detaljer metoder til at administrere yderligere behandlinger eller reagenser af interesse og for at indsamle vaginal skyllevæske og reproduktive tarmkanalen væv. Denne musemodel vil fremme forståelsen af ​​GBS-vært interaktion inden for den vaginale miljø, hvilket vil føre til potentielle terapeutiske mål at kontrollere maternal vaginal kolonisering under graviditeten og for at forhindre transmission til sårbare nyfødte. Det vil også være af interesse at øge vores forståelse af generelle bakterielle-vært interaktioner i den kvindelige vagina.

Under udviklingen af ​​denne model blev flere observationer gjort med hensyn faktorer, der påvirker varigheden af ​​GBS vaginal kolonisering. At bestemme, hvordan østrale stadium inokulering virkninger GBS bakteriel persistens blev mus iscenesat på dagen for inokulering via vaginal skyllevæske. Figur 1 illustrerer de fire faser af muse østrale cyklus, som bestemt ved våd-mount vaginal udskylningsvæske, en veletableret metode 29. Mus blev inddelt...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Formålet med denne protokol er at efterligne menneskelige gruppe B Streptococcus (GBS) vaginal kolonisering i en musemodel. Denne fremgangsmåde kan anvendes til at undersøge værtsimmunresponser og bakterielle faktorer, der bidrager til GBS vaginal vedholdenhed, samt at teste terapeutiske strategier.

En murin model af gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protokoller til vaginal Podning og Prøvetagning i den eksperimentelle musemodel Candida Vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Kvantificering af svampekolonisering, sporedannelse, og produktionen af ​​mycotoksiner brugen af ​​kernel Bioassays

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering af inflammatoriske reaktioner under intranasal kolonisering med Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasive Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Ikke-invasiv billeddannelse af Innate immunrespons i en zebrafisk Larve Model af<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intrakranielle Subarachnoidal rute for infektion for at undersøge roller af Streptococcus suis biofilm i Meningitis i en musemodel infektion

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Kvantificering af Vibrio cholerae kolonisering og diarré i den voksne zebrafisk Model

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...