We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Todo o trabalho animal foi aprovada pelo Escritório de Laboratório Animal Care na Universidade Estadual de San Diego, e executada sob normas veterinárias aceites. ratinhos fêmeas, com idade de 8 - 16 semanas, foram utilizados para o desenvolvimento deste método. 1. Preparação e injecção intraperitoneal de β-estradiol <ol><li> Meça β-estradiol (0,5 mg / rato) em pesar papel enquanto usava equipamento de proteção individual (EPI). CUIDADO: β-estradiol pode ser absorvida através da pele e das mucosas. </li><li> Transferir β-estradiol para um tubo cónico de 15 mL e agitar com vortex até todos os nódulos são removidos e o β-estradiol é um pó fino. Elaborar óleo de gergelim (100 ul / mouse) para uma seringa de 10 ml. óleo de sésamo Seringa-filtro para dentro do tubo cónico de 15 ml que contém a β-estradiol utilizando um filtro de 0,45 mícrons. Vortex do tubo cónico de 15 ml até ao β-estradiol é uma suspensão homogénea do óleo de sésamo. </li><li> Elaborar os beta-estradiol suspensão para uma nova seringa de 10 ml. Com um 18 G, 1-in. agulha, alíquota de 100 ul da suspensão para seringas de tuberculina de 1 ml. Prepare uma seringa para cada rato. Coloque uma nova, estéril 26 G, ½-in. agulha em cada seringa de tuberculina. </li><li> Administrar 0,5 mg do β-estradiol, suspendido em 100 ul de óleo de sésamo (5 mg / ml) a cada rato 24 horas antes da inoculação bacteriana. Injectar cada rato no interior da cavidade peritoneal, nos quadrantes abdominais inferiores, apenas para a direita ou para a esquerda da linha média, como previamente descrito 28. NOTA: Sem limpeza ou recorte do local de injecção é necessário. </li></ol> 2. Vaginal inoculação com GBS <ol><li> Um dia antes da inoculação, crescer uma cultura líquida durante a noite de 5 ml de uma estirpe de GBS de interesse, tais como A909 (serótipo Ia), em caldo Todd Hewitt (THB) a 37 ° C. </li><li> Subcultura a cultura durante a noite de GBS a um volume de 1:10 em THB fresco e incuba-se a 37 ° C. fazer crescer abactérias a fase semi-log (DO600 = 0,4-0,5). NOTA: Isto irá normalmente levam 2-3 horas, dependendo da estirpe de GBS. </li><li> Transferir a subcultura de uma solução estéril de 15 ml e pelotas de bactérias do tubo cónico a 3000 × g durante 5 min. Aspirar o sobrenadante. Ressuspender o sedimento bacteriano em 200 ul de solução salina tamponada com fosfato estéril (PBS). </li><li> Usando o sedimento ressuspenso, trazer 3 - 5 ml de PBS (1 ml por 10 murganhos) para exactamente OD 600 = 0,4 em um novo tubo de cultura de 5 mL. Esta será uma concentração de ~ 1 x 10 8 unidades formadoras de colónias (CFU) / ml. Transferir para um novo tubo cónico de 15 mL e re-sedimentar as bactérias a 3000 × g durante 5 min. Aspirar o sobrenadante. </li><li> Ressuspender o pellet em PBS em 1/10 do volume original. Por exemplo, se 3 ml de OD 600 = 0,4 foi sedimentado, em seguida ressuspender-lo em 300 ul de PBS. NOTA: Este é o final da suspensão bacteriana (~ 1 x 10 9 CFU / ml) usadas para inoculação dos animais. </li><li> Reserva 50 ul desta suspensão por diluição em série e plaqueamento em agar THB para determinar o inoculo exacta. </li><li> Inocular cada murganho com 10 uL da suspensão bacteriana final, de modo que 1 x 10 7 UFC é administrado a cada murganho. <ol><li> Para inocular, conter o mouse manualmente, assegurando a pele solta na nuca do pescoço entre o polegar do condutor eo dedo indicador e, em seguida, imobilizando a cauda, como descrito anteriormente 28. </li><li> Elaborar 10 ul do GBS preparados no passo 2.6 em um gel de 200 ul ponta de carga pipeta. Insira a ponta 5 a 10 mm no lúmen vaginal e dispensar a 10 ml de inóculo. NOTA: O gel pontas de carregamento são preferidos em relação dicas de 200 ul padrão para minimizar o risco de trauma ou lesão de órgãos, particularmente em ratos mais jovens ou mais pequenas. </li><li> Imediatamente após a inoculação, solte a nuca do pescoço e elevar a extremidade traseira do mouse, levantando o rato pela cauda e walking as patas dianteiras sobre uma superfície dura para ~ 1 min. </li><li> inspecionar visualmente a abertura vaginal para qualquer refluxo de inóculo. Se o refluxo é observada, uma ponta de pipeta, pode ser usado para manipular ou ampliar a abertura vaginal, facilitando a absorção de o refluxo para dentro do lúmen. Além disso, o refluxo pode ser aspirado através de uma pipeta e re-inoculado. NOTA: Se a administração de agentes tópicos, organismos probióticos, ou proteínas de interesse, um volume de até 20 ul num tampão fisiológico pode ser dado no tracto vaginal. </li></ol></li></ol> 3. raspagem da Lumen Vaginal para quantificar GBS Carga <ol><li> Preparar um tubo de micro-centrifugação de 1,5 ml por rato através da adição de 100 ul de PBS. Pouco antes de esfregar, pré-molhar o algodão embebido em PBS. </li><li> Restringir o rato, tal como descrito no passo 2.7.1 e inserir a haste de 10 mm para o lúmen vaginal. Rodar suavemente o cotonete de 4 vezes no sentido horário e 4 vezes sentido anti-horário, aplicando uma leve pressão para a parede vaginal.</li><li> Transferir o cotonete para o tubo de microcentrífuga de 1,5 ml com 100 ul de PBS. Antes do plaqueamento, vortex do tubo de microcentrífuga durante 15 sec ~ para libertar as bactérias do chumaço. Serialmente diluídas em PBS a cada amostra e a placa 20 ul de diluições de 1:10 até 1: 10000 em placas de agar de meio de diferenciais preparada de acordo com as instruções do fabricante. Incubar as placas a 37 ° C durante 24 h. colónias GBS irá aparecer tanto rosa brilhante ou malva em cores. Outros flora endógena será inibida, ou aparecerão como colónias azuis, brancas ou cinzentas. </li></ol> 4. Coleta de fluido vaginal Lavage <ol><li> Contenha o rato como descrito no passo 2.7.1. Utilizando uma ponta de pipeta de carregamento de gel de 200 ul, pipeta 20 ul de PBS para o lúmen vaginal. Suavemente pipeta toda a o volume e para baixo 4 vezes dentro do lúmen, e, em seguida, retirar o volume inteiro na mesma ponta de pipeta. NOTA: Se o fluido de lavagem é grosso com mucosas, uma dica padrão pipeta de 200 mLpode ser utilizada para recolher o fluido de lavagem final. </li><li> Se salvar lavado para análise de citocinas ou CFU quantificação, dispensam em um tubo de microcentrífuga de 0,7 ml. Se a determinação do estádio do estro, dispensar, pelo menos, 5 mL de fluido de lavagem para uma lâmina de vidro e observar as células sob uma ampliação de 100X de um microscópio de luz. NOTA: Para obter exemplos de fases estral, veja a Figura 1. </li></ol> 5. dissecção dos tecidos e homogeneização <ol><li> Para cada rato, preparar três de 2 ml tubos com tampa de rosca (uma para cada tecido: vagina, colo e útero). Encher cada tubo com amplas (0,4-0,5 g) de 1,0 mm os grânulos de zircónia para cobrir o fundo de forma cónica do tubo. </li><li> Autoclave os tubos preparados antes da recolha de tecidos durante 30 min a 121 ° C, especialmente se quantificar a carga bacteriana. Adicionar 500 ul de PBS estéril a cada tubo. Pesar cada tubo após a autoclavagem e recorde para futura referência para calcular o peso do tecido recuperado. </li><li&gt; Sacrifício do mouse usando métodos institucionais aprovados, como o CO 2 asfixia e luxação cervical. Spray para baixo do abdômen ventral com etanol 70%. Com uma tesoura esterilizada, abrir a cavidade abdominopelvic, levantar a pele para trás e músculos abdominais, e deslocar o intestino para que o trato reprodutivo está exposta. </li><li> Esterilizar a tesoura com etanol 70%, limpe se necessário, e cortar ambos os cornos uterinos meados de comprimento entre o corpo do útero e ovários. Usando tesouras e pinças, gordura visceral separada, membranas e da bexiga urinária longe do trato reprodutivo, que se deslocam no sentido caudal. </li><li> Esterilizar tesoura conforme descrito no passo 5.4. Em corte transversal ao da vagina o mais próximo possível da vulva possível separar o tracto reprodutivo do corpo. Levantar e remover o aparelho reprodutor intacto e colocá-lo em uma placa de Petri estéril. </li><li> Usando uma lâmina de barbear nova, separar o útero do colo do útero em um corte transversal. Esterilizar a lâmina de barbear com 70%EtOH, e em seguida, separar o colo da vagina em um corte transversal. NOTA: Não haverá uma quantidade mínima de tecido uterino ainda ligado ao colo do útero. Haverá uma quantidade mínima de tecido vaginal ainda ligado ao colo do útero. </li><li> Utilizando fórceps estéreis, transferir cada um dos tecidos em seus respectivos tubos de 2 ml de PBS contendo grânulos e homogeneização. Limpar a pinça com etanol 70% entre manusear cada tecido. </li><li> Pesar cada tubo 2 ml com tampa de rosca e subtrair o peso original do tubo para determinar o peso do tecido. pesos de tecido, tipicamente variam entre 20-100 mg. Firmemente selar os tubos de tampa de rosca e homogeneizar os tecidos durante 1 minuto à velocidade máxima num homogeneizador de tecidos. </li><li> Para quantificar a carga bacteriana, dilui-se em série 25 ul de homogeneizado de tecido e diluições 1:10 de placa por meio de 1: 10000 em placas de agar com meio diferenciais. Incubam-se as placas tal como descrito no passo 3.3. Para armazenar amostras para quantificação de citocinas, congelar homogeneizados de tecidos na -20 ° C. </li></ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Para promover o avanço da compreensão das interacções de GBS com a ambos o hospedeiro e outros micróbios no contexto do hospedeiro, é necessário um modelo animal. Este trabalho descreve os aspectos técnicos da criação de GBS colonização vaginal em ratos. Este protocolo realiza&gt; 90% de colonização de murganhos sem a utilização de anestésicos para inocular bactérias ou para recolher amostras de esfregaço, imuno-supressores para permitir a colonização, pré-lavagem vaginal, ou aditivos para engrossa...

Streptococcus agalactiae, Streptococcus do grupo B (GBS), é uma bactéria encapsulada, Gram-positiva, que é frequentemente isolada a partir do intestino e do trato genito-urinário de adultos saudáveis. Na década de 1970, GBS emergiu como o principal agente da mortalidade neonatal infecciosa, com mais de 7.000 casos de doença neonatal por ano 1. De início precoce da doença GBS (EOD) ocorre nas primeiras horas ou dias de vida, surge como pneumonia ou insuficiência respiratória, e muitas vezes se desenvolve em sepse, enquanto a doença de início tardio (LOD) segue-se depois de vários meses e se apresenta com bacteremia, que frequentemente avança para a meningite 2. A partir de 2002, os Centros de Controle e Prevenção de Doenças recomenda a triagem universal para GBS colonização vaginal na gestação tardia e profilaxia antibiótica intraparto (IAP) para mães GBS-positivos 1. Apesar da redução da doença de início precoce de aproximadamente 1.000 casos nos Estados Unidos, anualmente devido a IAP,GBS continua a ser a principal causa de sepse neonatal de início precoce e ocorrência de início tardio permanece inalterado 1. Se no útero, durante o parto, ou até mesmo em casos de início tardio, a exposição neonatal a GBS requer sobrevivência, transversal através de um número de ambientes de host e barreiras, a evasão imune, e, no caso de meningite, travessia do Sangue altamente regulado barreira do cérebro 2. A montante destas interacções virulentas no recém-nascido é a colonização inicial do tracto vaginal materna. Materna GBS taxas de colonização vaginal variam de 8-18% em países desenvolvidos e em desenvolvimento, com uma taxa média estimada de 12,7% 3,4. GBS colonização do tracto vaginal durante a gravidez pode ser constante, intermitente, ou de natureza transitória entre as mulheres individuais 5. Curiosamente, a idade materna&gt; 36 anos está associada à colonização persistente 6. Inúmeros fatores de risco biológicos e sócio-econômicas para GBS colonização vaginaltem sido identificado. Os factores biológicos incluem a colonização gastrointestinal GBS e ausência de Lactobacillus no intestino. No entanto, a etnia, a obesidade, higiene e atividade sexual também têm sido associados com GBS vaginal 7. Embora conhecido por causar infecções neonatais, GBS também causa uma variedade de infecções maternas ambos periparto e pós-parto. GBS é aumentada em mulheres que apresentam vaginite 8 e, em alguns casos, pode mesmo ser a entidade de doença 9. Além disso, o GBS de ascensão do trato reprodutivo durante a gravidez podem resultar em infecção intra-amniótica ou corioamniotite 10. Além disso, em até 3,5% de gravidezes, GBS difunde para a bexiga urinária para causar uma infecção do tracto urinário ou bacteriúria assintomática 11. bacteriúria GBS durante a gravidez está associado a um aumento do risco de febre intraparto, corioamnionite, parto prematuro, e premature ruptura de membranas 12. Tomados em conjunto, a presença de GBS dentro do trato vaginal está associado a infecções de vários tecidos do hospedeiro, e a capacidade de eliminar GBS deste nicho é imperativo para a saúde materna e neonatal. Até recentemente, a maioria do trabalho examinar interacções de GBS com o tracto genital do foi limitada a modelos celulares in vitro 13-15. Estas experiências in vitro revelaram factores bacterianos que são importantes para a adesão, incluindo as proteínas de superfície, tais pili e uma rica em serina repetições 17,18, bem como sistemas reguladores de dois componentes 15,19 e a resposta de transcrição global do epitélio vaginal para GBS 19. No entanto, para elucidar totalmente as interacções hospedeiro-micróbio no tracto vaginal, um modelo animal robusta é necessário. Os primeiros trabalhos demonstraram que o GBS podem ser recuperados a partir do tracto vaginal de ratinhos inoculados ratos e 20,21 &lt;sup&gt; 22 em ambas as condições grávidas e não grávidas. Em 2005, a curto prazo GBS colonização vaginal foi modelada em murganhos para examinar a eficácia de uma enzima lítica de fagos para tratar GBS vaginal durante um período de 24 h 23. Vários anos mais tarde, um GBS mouse modelo de colonização vaginal longo prazo foi desenvolvido para estudar hospedeiras e bacterianas fatores que regem GBS persistência. Este modelo identificou vários fatores que contribuem para GBS colonização, incluindo apêndices superficiais 17,18 e GBS sistemas de dois componentes 19,24. Este modelo contribui para a identificação de mecanismos de resposta do hospedeiro 19,25 e foi usado para testar várias estratégias terapêuticas, incluindo péptidos imunomoduladores 26 e 27 probióticos. Este protocolo dá a orientação necessária para inocular GBS para o trato vaginal mouse e para controlar posteriormente colonização e coletar amostras para análises posteriores.

<table><tbody><tr><td>Sesame oil&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3547-250ML</td><td></td></tr><tr><td>&amp;beta;-Estradiol&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E8875-1G</td><td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &amp;beta;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>200 &amp;mu;l gel loading pipette tips&amp;nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1252-0610</td><td></td></tr><tr><td>Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td><td>Puritan</td><td>25-801 A 50</td><td></td></tr><tr><td>CHROMagar StrepB</td><td>DRG International</td><td>SB282</td><td></td></tr><tr><td>Todd Hewitt Broth</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>7161C</td><td></td></tr><tr><td>18 G, 1.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305199</td><td></td></tr><tr><td>26 G, 0.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>10 ml syringes</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &amp;mu;m PVDF syringe filters</td><td>Whatman</td><td>6900-2504</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr></tbody></table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (Streptococcus do grupo B, o GBS), é uma bactéria Gram-positiva, colonizador assintomática do tracto gastrointestinal humano e tracto vaginal de 10 - 30% dos adultos. Em indivíduos imunocomprometidos, incluindo recém-nascidos, mulheres grávidas e idosos, GBS pode mudar para um patógeno invasiva causando septicemia, artrite, pneumonia e meningite. Porque GBS é um patógeno bacteriano líder de recém-nascidos, a profilaxia atual é composto por triagem de gestação tarde para GBS colonização vaginal e subsequente tratamento com antibióticos periparto das mães GBS-positivos. fardo pesado vaginal GBS é um fator de risco para a doença neonatal e colonização. Infelizmente, pouco se sabe sobre o anfitrião e os fatores bacterianos que promovem ou permitem GBS colonização vaginal. Este protocolo descreve uma técnica para o estabelecimento de colonização vaginal GBS persistente utilizando um β-estradiol único pré-tratamento e de colheitas diárias para determinar loa bacterianad. Acrescenta detalhes métodos para administrar terapias ou reagentes de interesse adicionais e recolher fluido de lavagem vaginal e nos tecidos do trato reprodutivo. Este modelo do rato irá aumentar a compreensão da interação GBS-host dentro do ambiente vaginal, o que levará a potenciais alvos terapêuticos para controlar a colonização vaginal materna durante a gravidez e para prevenir a transmissão ao recém-nascido vulnerável. Também será de interesse para aumentar a nossa compreensão de interações bacterianas-hospedeiro geral no trato vaginal feminino.

Durante o desenvolvimento deste modelo, várias observações foram feitas em relação aos fatores que afetam a duração do GBS colonização vaginal. Para determinar o estágio como estral em impactos inoculação GBS persistência bacteriana, os ratos foram encenadas no dia da inoculação através de lavado vaginal. A Figura 1 ilustra as quatro fases do ciclo estral de rato, como determinado pela húmida de montagem em fluido de lavagem vaginal, um método bem estab...

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A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

O objectivo deste protocolo é imitar grupo humano B Streptococcus (GBS) colonização vaginal num modelo murino. Este método pode ser utilizado para investigar as respostas imunes do hospedeiro e factores que contribuem para GBS bacterianas persistência vaginal, bem como para testar estratégias terapêuticas.

Um modelo murino de Grupo B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Colonização Vaginal

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

14.2K visualizações.  University of California San Diego School of Medicine.  O objectivo deste protocolo é imitar grupo humano B Streptococcus (GBS) colonização vaginal num modelo murino. Este método pode ser utilizado para investigar as respostas imunes do hospedeiro e factores que contribuem para GBS bacterianas persistência vaginal, bem como para testar estratégias terapêuticas. 

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Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of otherwise healthy women during their reproductive years18,32-34. Predisposing factors include antibiotic usage, uncontrolled diabetes and disturbance in reproductive hormone levels due to pregnancy, oral contraceptives or hormone replacement therapies33,34. Recurrent VVC (RVVC), defined as three or more episodes per year, affects a separate 5 to 8% of women with no predisposing factors33.
An experimental mouse model of VVC has been established and used to study the pathogenesis and mucosal host response to Candida3,4,11,16,17,19,21,25,37. This model has also been employed to test potential antifungal therapies in vivo13,24. The model requires that the animals be maintained in a state of pseudoestrus for optimal Candida colonization/infection6,14,23. Under such conditions, inoculated animals will have detectable vaginal fungal burden for weeks to months. Past studies show an extremely high parallel between the animal model and human infection relative to immunological and physiological properties3,16,21. Differences, however, include a lack of Candida as normal vaginal flora and a neutral vaginal pH in the mice.
Here, we demonstrate a series of key methods in the mouse vaginitis model that include vaginal inoculation, rapid collection of vaginal specimens, assessment of vaginal fungal burden, and tissue preparations for cellular extraction/isolation. This is followed by representative results for constituents of vaginal lavage fluid, fungal burden, and draining lymph node leukocyte yields. With the use of anesthetics, lavage samples can be collected at multiple time points on the same mice for longitudinal evaluation of infection/colonization. Furthermore, this model requires no immunosuppressive agents to initiate infection, allowing immunological studies under defined host conditions. Finally, the model and each technique introduced here could potentially give rise to use of the methodologies to examine other infectious diseases of the lower female genital tract (bacterial, parasitic, viral) and respective local or systemic host defenses.

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Key techniques to be used in the evaluation of Candida vaginitis in an experimental animal model are described. The methods will allow rapid collection of vaginal specimens and lymphocytes from draining lumbar lymph nodes. These techniques could give rise to mouse models of other diseases in the female lower genital tract.

Protocolos para inoculação vaginal e coleta de amostra no Modelo Experimental de Rato Candida Vaginite

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Imunologia e Infecção

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood vessels resulting in vascular leak, the development of purpuric rashes and eventual tissue necrosis. Studying the pathogenesis of this infection was previously limited by the human specificity of the bacteria, which makes in vivo models difficult. In this protocol, we describe a humanized model for this infection in which human skin, containing dermal microvessels, is grafted onto immunocompromised mice. These vessels anastomose with the mouse circulation while maintaining their human characteristics. Once introduced into this model, N. meningitidis adhere exclusively to the human vessels, resulting in extensive vascular damage, inflammation and in some cases the development of purpuric rash. This protocol describes the grafting, infection and evaluation steps of this model in the context of N. meningitidis infection. The technique may be applied to numerous human specific pathogens that infect the blood stream.

Neisseria meningitidis is a human specific pathogen that infects blood vessels. In this protocol human microvessels are introduced into a mouse by grafting human skin onto immunocompromised mice. Bacteria adhere extensively to the human vessels, leading to vascular damage and development of the purpuric rash typically observed in human cases.

Humanizado mouse modelo para estudar Infecções Bacterianas Segmentação microvasculatura

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

Um modelo de rato para induzida por patógeno inflamação crônica no local e sistêmica Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Modelo não-invasiva da neuropatogênicos<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infecção no Rato Neonatal

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

Infecção recorrente do trato urinário de Escherichia coli desencadeada por gardnerella vaginalis exposição bexiga em camundongos

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, termed chorioamnionitis. Chorioamnionitis exposes the developing fetus to a high risk of organ injuries, perinatal morbidity, and mortality, as well as life-long neurobehavioral impairments and other non-neurological developmental issues. The two most frequent subtypes of GBS isolates from maternal and fetal tissues are serotypes Ia (13%-23%) and III (25%-53%). Our lab has developed and characterized a rat model of GBS-induced chorioamnionitis to study subsequent impacts on the central nervous system of the developing fetus and to understand underlying mechanistic aspects. This article presents the design as well as uses of the preclinical rat model, which closely reproduces the hallmark of GBS-induced chorioamnionitis in humans. This article aims to help scientists reproduce the experimental design as well as to provide support through examples of troubleshooting. The present model may also contribute to potential discoveries through uncovering causes, mechanisms, and novel therapeutic avenues, which remain unsettled in many developmental impairments arising from chorioamnionitis. Furthermore, the use of this model may be extended to the studies of perinatal non-neurological common and severe morbidities affecting, for instance, the retina, bowel, lung, and kidney. The main interest of this research is in the field of GBS-induced fetal neurodevelopmental impairments such as cerebral palsy (CP), attention deficit hyperactivity disorder (ADHD), and autism spectrum disorder (ASD). The rationale supporting this model is presented in this article, followed by procedures and results.

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus GBS

The goal of this protocol is to describe a preclinical animal model of Group B Streptococcus (GBS)-induced chorioamnionitis. The study is designed to investigate mechanistic processes, potential causal links with developmental impairments, and finally to develop translational anti-inflammatory placento- and neuro-protective treatments.

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, ...

Chip microfluídico da vagina para estudar o microbioma vaginal

Modeling Healthy and Dysbiotic Vaginal Microenvironments in a Human Vagina-on-a-Chip

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy reproductive system may lead to life-threatening diseases, infertility, or adverse outcomes during pregnancy. One barrier in the field is that there has been a dearth of preclinical, experimental models that faithfully mimic the physiology and pathophysiology of the FRT. Current in vitro and animal models do not fully recapitulate the hormonal changes, microaerobic conditions, and interactions with the vaginal microbiome. The advent of Organ-on-a-Chip (Organ Chip) microfluidic culture technology that can mimic tissue-tissue interfaces, vascular perfusion, interstitial fluid flows, and the physical microenvironment of a major subunit of human organs can potentially serve as a solution to this problem. Recently, a human Vagina Chip that supports co-culture of human vaginal microbial consortia with primary human vaginal epithelium that is also interfaced with vaginal stroma and experiences dynamic fluid flow has been developed. This chip replicates the physiological responses of the human vagina to healthy and dysbiotic microbiomes. A detailed protocol for creating human Vagina Chips has been described in this article.

Autor em destaque: Revolucionando a pesquisa sobre interações do microbioma vaginal usando um chip vaginal

This article describes a protocol for creating a microfluidic vagina-on-a-chip (Vagina Chip) culture device that enables the study of human host interactions with a living vaginal microbiome under microaerophilic conditions. This chip can be used as a tool to investigate vaginal diseases as well as to develop and test potential therapeutic countermeasures.

Modelagem de microambientes vaginais saudáveis e disbióticos em uma vagina humana em um chip

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy ...

Um modelo murino de Grupo B

Resumo

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Capítulos neste vídeo

Protocolos para inoculação vaginal e coleta de amostra no Modelo Experimental de Rato Candida Vaginite

Caracterização de Respostas Inflamatórias Durante Colonização Intranasal com Streptococcus pneumoniae

Humanizado mouse modelo para estudar Infecções Bacterianas Segmentação microvasculatura

Um modelo de rato para induzida por patógeno inflamação crônica no local e sistêmica Sites

Modelo não-invasiva da neuropatogênicos

Infecção recorrente do trato urinário de Escherichia coli desencadeada por gardnerella vaginalis exposição bexiga em camundongos

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Modelagem de microambientes vaginais saudáveis e disbióticos em uma vagina humana em um chip

Modelagem de microambientes vaginais saudáveis e disbióticos em uma vagina humana em um chip

Modelagem de microambientes vaginais saudáveis e disbióticos em uma vagina humana em um chip