Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Todos los animales de trabajo fue aprobado por la Oficina de Cuidado de Animales de Laboratorio de la Universidad Estatal de San Diego y lleva a cabo bajo las normas veterinarias aceptados. Los ratones hembra, edad 8 - 16 semanas, se utilizaron para el desarrollo de este método. 1. Preparación y la inyección intraperitoneal de β-estradiol <ol><li> Medir β-estradiol (0,5 mg / ratón) en un peso de papel mientras que use el equipo de protección personal (EPP) apropiado. PRECAUCIÓN: β-est...

Para promover el avance de la comprensión de las interacciones con el GBS tanto el anfitrión y otros microbios en el contexto del huésped, se requiere un modelo animal. Este trabajo describe los aspectos técnicos del establecimiento de la colonización vaginal por EGB en ratones. Este protocolo logra&gt; 90% colonización de ratones sin el uso de anestésicos para inocular bacterias o para recoger muestras de frotis, inmunes supresores para permitir la colonización, pre-lavado vaginal, o aditivos para espesar el in...

Streptococcus agalactiae, Streptococcus del grupo B (GBS), es una bacteria encapsulada, Gram-positiva que con frecuencia se aísla de los intestinos y el tracto genitourinario de adultos sanos. En la década de 1970, GBS surgió como el agente principal de mortalidad neonatal infecciosa, con más de 7.000 casos de la enfermedad neonatal por año 1. La aparición temprana de la enfermedad por EGB (EOD) se produce en las primeras horas o días de vida, surge como neumonía o dificultad respiratoria, y con frecuencia se desarrolla en la sepsis, mientras que la enfermedad de aparición tardía (LOD) sobreviene después de varios meses y se presenta con bacteriemia, que con frecuencia avanza a la meningitis 2. A partir de 2002, los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades recomiendan el cribado universal de la colonización vaginal por EGB en el final de la gestación y la profilaxis antibiótica intraparto (IAP) para las madres GBS-positivas 1. A pesar de la reducción de la enfermedad de aparición temprana a aproximadamente 1.000 casos en los Estados Unidos anualmente debido a IAP,GBS sigue siendo la principal causa de sepsis neonatal de aparición temprana, y la aparición de inicio tardío no se ve afectada 1. Ya sea en el útero, durante el parto, o incluso en los casos de aparición tardía, la exposición neonatal a GBS requiere la supervivencia, transversal a través de una serie de entornos y barreras de acogida, la evasión inmune y, en el caso de meningitis, cruce de la sangre altamente regulado 2 barrera del cerebro. Aguas arriba de estas interacciones virulentas en el recién nacido es la colonización inicial del tracto vaginal maternal. Materna GBS las tasas de colonización vaginal varían de 8-18% en los países desarrollados y en desarrollo, con una tasa promedio estimado del 12,7% 3,4. GBS colonización del tracto vaginal durante el embarazo puede ser constante, intermitente, o de naturaleza transitoria entre las mujeres individuales 5. Curiosamente, a la edad materna&gt; 36 años se asocia con la colonización persistente 6. Numerosos factores de riesgo biológicos y socio-económico para la colonización vaginal por EGBhan sido identificados. Los factores biológicos incluyen la colonización gastrointestinal GBS y la ausencia de Lactobacillus en el intestino. Sin embargo, el origen étnico, la obesidad, la higiene, y la actividad sexual también se han asociado con EGB 7 vaginal. Aunque conocidos por causar infecciones neonatales, GBS también causa una variedad de infecciones maternas ambos periparto y posparto. GBS carro se incrementa en mujeres que se presentan con vaginitis 8 y, en algunos casos, incluso puede ser la entidad de la enfermedad 9. Además, GBS ascensión del tracto reproductivo durante el embarazo puede resultar en una infección intra-amniótica o corioamnionitis 10. Por otra parte, en un máximo de 3,5% de los embarazos, GBS difunde a la vejiga urinaria para causar una infección del tracto urinario o la bacteriuria asintomática 11. bacteriuria por GBS durante el embarazo se asocia con un mayor riesgo de fiebre intraparto, corioamnionitis, parto prematuro y premature rotura de las membranas 12. En su conjunto, la presencia de GBS dentro del tracto vaginal está vinculada a las infecciones de múltiples tejidos del huésped, y la capacidad de eliminar GBS de este nicho es imprescindible tanto para la salud materna y neonatal. Hasta hace poco, la mayoría del trabajo de examinar las interacciones de GBS con el tracto cervicovaginal se limita a los modelos celulares in vitro 13-15. Estos experimentos in vitro han revelado factores bacterianos que son importantes para la adhesión, incluyendo proteínas de superficie Tal pili y rico en serina repite 17,18, así como los sistemas de regulación de dos componentes 15,19 y la respuesta transcripcional global del epitelio vaginal para GBS 19. Sin embargo, para dilucidar plenamente las interacciones huésped-microorganismo en el tracto vaginal, un modelo animal robusto es necesario. Los primeros trabajos demostraron que GBS se puede recuperar a partir del tracto vaginal de ratones inoculados 20,21 y ratas &lt;sup&gt; 22 en ambas condiciones embarazadas y no embarazadas. En 2005, a corto plazo la colonización vaginal por EGB se modeló en ratones para examinar la eficacia de una enzima del fago lítico realizar un tratamiento vaginal durante un período de 24 horas 23. Varios años más tarde, un modelo de ratón de GBS colonización vaginal de larga duración fue desarrollado para estudiar anfitrionas bacterianas y factores que regulan GBS persistencia. Este modelo ha identificado numerosos factores que contribuyen a la colonización por GBS, incluyendo apéndices superficiales 17,18 y sistemas de dos componentes de GBS 19,24. Este modelo ha contribuido a la identificación de los mecanismos de respuesta de acogida 19,25 y fue utilizado para probar varias estrategias terapéuticas, incluyendo péptidos inmunomoduladores 26 y 27 probióticos. Este protocolo da la orientación necesaria para inocular GBS en el tracto vaginal del ratón y posteriormente realizar un seguimiento de la colonización y recoger muestras para análisis posteriores.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="592">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sesame oil&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">&#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E8875-1G</td>
			<td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &#946;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">200 &#956;L gel loading pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:91px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1252-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td>
			<td style="width:91px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-801 A 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CHROMagar StrepB</td>
			<td style="width:91px;">DRG International</td>
			<td style="width:119px;">SB282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Todd Hewitt Broth</td>
			<td style="width:91px;">Hardy Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">7161C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 G, 1.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">26 G, 0.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.45 &#956;m PVDF syringe filters</td>
			<td style="width:91px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">6900-2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1X</td>
			<td style="width:91px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (Streptococcus del grupo B, GBS), es un Gram-positivo, colonizador asintomática del tracto gastrointestinal humano y el tracto vaginal de 10 a 30% de los adultos. En individuos inmunocomprometidos, incluyendo los recién nacidos, mujeres embarazadas y ancianos, GBS puede cambiar a un patógeno invasivo que causa la sepsis, artritis, neumonía y meningitis. Debido a que el GBS es un patógeno bacteriano líder de los recién nacidos, la profilaxis actual se compone de detección final de la gestación para la colonización vaginal por EGB y el tratamiento con antibióticos periparto posterior de las madres GBS-positivas. carga vaginal abundante GBS es un factor de riesgo tanto para la enfermedad neonatal y la colonización. Por desgracia, poco se sabe acerca del anfitrión y los factores bacterianos que favorecer o permitir la colonización por GBS vaginal. Este protocolo describe una técnica para establecer persistente colonización vaginal GBS utilizando un β-estradiol solo pre-tratamiento y toma de muestras diariamente para determinar loa bacterianare. Aún más detalles métodos para administrar terapias o reactivos de interés adicionales y para recoger el líquido de lavado vaginal y los tejidos del tracto reproductivo. Este modelo de ratón será favorecer la comprensión de la interacción GBS-host dentro del ambiente vaginal, lo que conducirá a posibles dianas terapéuticas para controlar la colonización vaginal de la madre durante el embarazo y para prevenir la transmisión al recién nacido vulnerable. También será de interés para aumentar nuestra comprensión de las interacciones generales bacteriana en host en el tracto vaginal femenino.

Durante el desarrollo de este modelo, se hicieron varias observaciones acerca de los factores que afectan a la duración de la colonización vaginal por EGB. Para determinar cómo etapa estral en impactos de inoculación bacteriana GBS persistencia, los ratones se llevaron a cabo en el día de la inoculación a través de líquido de lavado vaginal. La Figura 1 ilustra las cuatro etapas del ciclo estral de ratón, como se determina por mojado de montaje en el líquido de...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

El objetivo de este protocolo es imitar grupo humano Streptococcus B (GBS) la colonización vaginal en un modelo murino. Este método se puede utilizar para investigar respuestas inmunes del huésped y factores bacterianos que contribuyen a la persistencia vaginal GBS, así como para poner a prueba estrategias terapéuticas.

Un modelo murino de Grupo B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Colonización vaginal

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Murine Model of CD40-activation of B cells

Modelo murino de CD40-activación de las células B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Investigación

Inmunología e Infección

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Inducción y evaluación de la recombinación de cambio de clase en las células murinas purificada B

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Imágenes de células vivas de Bacillus subtilis Y Streptococcus pneumoniae Automatizada utilizando Time-lapse microscopía

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocolos para la inoculación dentro de la vagina y toma de muestras en el modelo experimental de ratón de Candida Vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

La cuantificación de la colonización por hongos, esporogenesis y producción de micotoxinas mediante bioensayos del núcleo

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Caracterización De Las Respuestas Inflamatorias Durante La Colonización Intranasal Con Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Modelo no invasiva de neuropatogénico<em&gt; Escherichia coli</em&gt; La infección en Neonatología Rata

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Imagen no invasiva de la respuesta inmune innata en un modelo de larvas de pez cebra de<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infección

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Ruta de subaracnoideo intracraneal de la infección para investigar funciones de biopelículas del Streptococcus suis en Meningitis en un modelo murino de infección

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Cuantificación de Vibrio cholerae de colonización y de la diarrea en el modelo de pez cebra adulto

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...