Name: ovarian tissue culture to visualize phenomena in mouse ovary
Uploaded: 2018-06-19T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary at JoVE.com

Vi takker Dr. Naojiro Minami (Kyoto University) for å gi Oog1pro3.9 mus. Denne forskningen ble støttet av JSP (KAKENHI # JP15H06275) og Nitto Foundation.

Mus ble plassert i et miljømessig kontrollerte rom på 23 ±1 ° C med en 12 h lys/12 h mørke syklus. Dyr omsorg protokoller og eksperimenter ble utført i samsvar med retningslinjene for dyr eksperimentering på Aichi medisinske universitet og ble godkjent av den sittende dyr omsorg og bruk komiteen.
1. forberedelse av kultur Medium og retter
<ol><li>For å forberede grunnleggende kultur medium, legge fosterets bovin serum (FBS, 5% v/v), FSH (100 mIU/mL), LH (10 mU/mL), og penicillin-stre...

<ol>
	<li>Myers, M., Britt, K. L., Wreford, N. G., Ebling, F. J., Kerr, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+quantifying+follicular+numbers+within+the+mouse+ovary.">Methods for quantifying follicular numbers within the mouse ovary.</a> Reproduction. 127 (5), 569-580 (2004).</li><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle.">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li><li>Palma, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+biotechnology+of+follicle+development.">Biology and biotechnology of follicle development.</a> Sci World J. , (2012).</li><li>Knight, P. G., Glister, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+superfamily+members+and+ovarian+follicle+development.">TGF-beta superfamily members and ovarian follicle development.</a> Reproduction. 132 (2), 191-206 (2006).</li><li>Picton, H. M., Harris, S. E., Muruvi, W., Chambers, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vitro+growth+and+maturation+of+follicles.">The in vitro growth and maturation of follicles.</a> Reproduction. 136 (6), 703-715 (2008).</li><li>Spears, N., de Bruin, J. P., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+establishment+of+follicular+dominance+in+co-cultured+mouse+ovarian+follicles.">The establishment of follicular dominance in co-cultured mouse ovarian follicles.</a> J Reprod Fertil. 106 (1), 1-6 (1996).</li><li>Baker, S. J., Srsen, V., Lapping, R., Spears, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effect+of+follicle-follicle+interactions+and+declining+follicle-stimulating+hormone+on+murine+follicle+health+in+vitro.">Combined effect of follicle-follicle interactions and declining follicle-stimulating hormone on murine follicle health in vitro.</a> Biol Reprod. 65 (4), 1304-1310 (2001).</li><li>Komatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Effect+of+Leukemia+Inhibitory+Factor+on+Follicular+Growth+in+Cultured+Murine+Ovarian+Tissue.">Analysis of the Effect of Leukemia Inhibitory Factor on Follicular Growth in Cultured Murine Ovarian Tissue.</a> Biol Reprod. 93 (1), 18 (2015).</li><li>Komatsu, K., Masubuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+concentration-dependent+effect+of+progesterone+on+follicle+growth+in+the+mouse+ovary.">The concentration-dependent effect of progesterone on follicle growth in the mouse ovary.</a> J Reprod Dev. 63 (3), 271-277 (2017).</li><li>Murase, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+dynamics:+visualization+and+analysis+of+follicle+growth+and+maturation+using+murine+ovarian+tissue+culture.">Follicle dynamics: visualization and analysis of follicle growth and maturation using murine ovarian tissue culture.</a> J Assist Reprod Genet. , 1-5 (2017).</li><li>Ishida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+promoter+of+the+oocyte-specific+gene,+Oog1,+functions+in+both+male+and+female+meiotic+germ+cells+in+transgenic+mice.">The promoter of the oocyte-specific gene, Oog1, functions in both male and female meiotic germ cells in transgenic mice.</a> PLoS One. 8 (7), 68686 (2013).</li><li>Minami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesin+is+a+novel+mouse+protein+expressed+in+oocytes+and+early+cleavage-stage+embryos.">Oogenesin is a novel mouse protein expressed in oocytes and early cleavage-stage embryos.</a> Biol Reprod. 69 (5), 1736-1742 (2003).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+factor-9+stimulates+progression+of+early+primary+but+not+primordial+rat+ovarian+follicle+development.">Growth and differentiation factor-9 stimulates progression of early primary but not primordial rat ovarian follicle development.</a> Biol Reprod. 67 (3), 1018-1024 (2002).</li><li>Nilsson, E. E., Kezele, P., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia+inhibitory+factor+(LIF)+promotes+the+primordial+to+primary+follicle+transition+in+rat+ovaries.">Leukemia inhibitory factor (LIF) promotes the primordial to primary follicle transition in rat ovaries.</a> Mol Cell Endocrinol. 188 (1-2), 65-73 (2002).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-4+acts+as+an+ovarian+follicle+survival+factor+and+promotes+primordial+follicle+development.">Bone morphogenetic protein-4 acts as an ovarian follicle survival factor and promotes primordial follicle development.</a> Biol Reprod. 69 (4), 1265-1272 (2003).</li><li>Nilsson, E. E., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kit+ligand+and+basic+fibroblast+growth+factor+interactions+in+the+induction+of+ovarian+primordial+to+primary+follicle+transition.">Kit ligand and basic fibroblast growth factor interactions in the induction of ovarian primordial to primary follicle transition.</a> Mol Cell Endocrinol. 214 (1-2), 19-25 (2004).</li><li>Abe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditional+reporter+mouse+lines+at+ROSA26+locus+for+live+cell+imaging.">Establishment of conditional reporter mouse lines at ROSA26 locus for live cell imaging.</a> Genesis. 49 (7), 579-590 (2011).</li><li>Lan, Z. J., Xu, X., Cooney, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+oocyte-specific+expression+of+Cre+recombinase+activity+in+GDF-9-iCre,+Zp3cre,+and+Msx2Cre+transgenic+mice.">Differential oocyte-specific expression of Cre recombinase activity in GDF-9-iCre, Zp3cre, and Msx2Cre transgenic mice.</a> Biol Reprod. 71 (5), 1469-1474 (2004).</li><li>Payer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+stella-GFP+transgenic+mice:+a+novel+tool+to+study+germ+cell+development.">Generation of stella-GFP transgenic mice: a novel tool to study germ cell development.</a> Genesis. 44 (2), 75-83 (2006).</li><li>Ohinata, Y., Sano, M., Shigeta, M., Yamanaka, K., Saitou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive,+non-invasive+visualization+of+primordial+germ+cell+development+in+mice+by+the+Prdm1-mVenus+and+Dppa3-ECFP+double+transgenic+reporter.">A comprehensive, non-invasive visualization of primordial germ cell development in mice by the Prdm1-mVenus and Dppa3-ECFP double transgenic reporter.</a> Reproduction. 136 (4), 503-514 (2008).</li></ol>

I denne studien utviklet vi to nye metoder for å studere hårsekken utvikling i musen eggstokkene. Den første metoden innebærer kultur av skiver ovarian voksen mus vev etterfulgt av analyser av hårsekken utvikling, og andre innebærer bruk av time-lapse tenkelig å visualisere hårsekken utviklingen under gonadotropin-uavhengig scenen. Tidligere vi brukte stede eggstokk vev kultur metoden for å vurdere effekten av leukemi hemmende faktor og progesteron på hårsekken utvikling8,<su...

Kvinnelige musen eggstokkene inneholder flere tusen follikler1og periodiske eggløsning modnes ca ti oocytes på hver estrus syklus. Hårsekker er klassifisert i flere utviklingsstadier: primordial, primær, sekundær, Boas, og Graafian follicles, avhengig av form av granulosa mobilnettet laget rundt hver oocyte. De fleste primordial hårsekker er sovende, og noen av dem er aktivert og vokse til primære follikler på hver estrus syklus2. Etter videregående follikulær scenen, er hårsekken utvikling hovedsakelig regulert av gonadotropiner, follikulær stimulerende hormone (FSH) og luteiniserende hormon (LH). Imidlertid primordial og primære hårsekken utvikling er uavhengig av gonadotropin og regulatoriske mekanismer som styrer disse stadiene være dårlig inderstood3,4,5. Vekstfaktorer og hormoner, er primordial og primære hårsekken regulert av interaksjon mellom follikler6,7. Derfor vi utført analyser av hårsekken dynamikken i musen eggstokk vev og undersøkt tilknyttede regulatoriske mekanismer bruker ovarian vev kulturer8,9,10.
Her, introdusere vi to ovarian vev kultur modell metoder. Først brukes til å analysere hårsekken utvikling ved måling av follikulær områder, og andre brukes til å studere den regulatoriske mekanismen i løpet av tidlig hårsekken utvikling fra primordial sekundære hårsekken scenen med transgene mus. For hårsekken utvikling analyse brukes vi hovedsakelig eggstokkene 4 - uke gamle kvinnelige mus fordi de tillater enkel visualisering av hårsekkene. For å indusere periodisk eggløsning og modell i vivo hårsekken utvikling, reproduseres vi LH bølge og observerte eggløsning, hårsekken atresia og sekresjon av estradiol under vev kultur forhold. Bilder av kultivert eggstokkene ble fanget og utviklingsprosesser hårsekken ble analysert av sporing endringer i follikulær området. Men i lys feltet mikroskopi analyser var forskjellen mellom opprinnelige og tidlig primære follikler uklart. Derfor utviklet vi en metode for å oppdage små follikler, og skille mellom opprinnelige, primær, og sekundære hårsekken i kulturperler ovarian vev med Oogenesin1 (Oog1) pro3. 9 og R26-H2B-mCherry transgene mus eggstokkene dager 0 og 4 etter fødselen11. Oog1 uttrykk er i oocytes etter inn i meiose, og øker gradvis med hårsekken utvikling, slik at observasjon av overgangen fra primordial til primære follikler time-lapse bilder av kultivert eggstokk vev11 ,12. Selv om morfologiske metoder brukes til å studere faktorer som aktiverer sovende primordial follicles13,14,15,16, er fysiologisk follicle utvikling i eggstokkene vanskelig å observere, og effekten av ulike faktorer er fortsatt uncharacterized. De nåværende kultur metodene ble utviklet for å håndtere denne mangelen i sanntid analyser mål faktorer.
Studien, vi sporet follikulær utvikling med en time-lapse bildebehandling metode og preget prosessen med hårsekken utvikling. Vår nye metoder tilbyr et enestående verktøy for å undersøke fysiologi av eggstokkene.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1176px;" width="1175">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Follicle stimulating hormone from human pituitary</td>
			<td style="width:224px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">F4021</td>
			<td style="width:451px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lutenizing hormone from equine pituitary</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>L9773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-streptomycin solution</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td>168-23191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM a, GlutaMax, no nucleotides</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>32561037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-0-10-C</td>
			<td>35mm dish, No. 0 coverslip, 10mm glass diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millicell cell culture insert</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>PICM0RG50</td>
			<td>Diameter: 315 mm, pore size: 0.4 mm, material: hydrophilic PTTE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">3.5cm cell culture dishes</td>
			<td style="width:224px;">greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">50ml / centrifuge tube with triple seal cap</td>
			<td style="width:224px;">IWAKI</td>
			<td style="width:119px;">2345-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:383px;">Low-profile disposable blades 819</td>
			<td style="width:224px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">14035838925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM 710</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellVoyager, CV1000</td>
			<td>Yokogawa Electric Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Time-lapse imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BZ-X700</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Time-lapse imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ovarian tissue culture to visualize phenomena in mouse ovary

Pattedyr kvinner ovulate regelmessig en nesten konstant antall oocytes under hver estrus syklus. For å opprettholde slike regularitet og periodisitet, oppstår regulering på hypothalamus-hypofyse-gonadal akse nivå og utvikle follikler i eggstokken. Til tross for aktiv studier er hårsekken utvikling mekanismer ikke klart på grunn av flere trinnene involvert av sovende primordial hårsekken aktivering til ovulation, og fordi regulering som er forskjellig for hver follikulær scene. Undersøke mekanismer av hårsekken utvikling og dynamikken i hårsekkene gjennom estrus syklusen, utviklet vi en mus ovarian vev kultur modell som kan brukes til å observere hårsekken utvikling ved hjelp av et mikroskop. Systematisk hårsekken utvikling, periodisk eggløsning og hårsekken atresia kan alle gjengis i kulturperler eggstokk modellen og kultur betingelsene kan omformes eksperimentelt. Her viser vi nytten av denne metoden i studiet av regulatoriske mekanismer av hårsekken utvikling og andre ovarian fenomener.

Figur 1 viser protokollen for endringer i media i eggstokkene vev kultur. Etter dette programmet, 4-uke-gamle ICR mus eggstokkene kultivert og fotografert i 24-h intervaller med AC confocal mikroskopi (figur 2). Under kultur av eggstokk vev i 3 uker, mest Boas og sekundære follikler var degenerert av hårsekken atresia og noen var ovulated (figur 2D og tabell 2). An...

Watch this Scientific Journal Video about Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary at JoVE.com

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Ovarian vev kultur visualisere fenomener i musen eggstokk

Ovarian vev kulturer kan brukes som modeller av hårsekken utvikling, eggløsning og hårsekken atresia og angi regulatoriske mekanismer for dynamisk ovarian prosesser.

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Kultur og Co-Culture of Mouse Eggstokkene og ovariefollikler

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation og organotypiske Slice Culture of Mouse hippocampus Tissue

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Taps og Gain-of-funksjon tilnærming for å undersøke Tidlig Cell Fate Determinanter i Før implantasjon Mouse Embryoer

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammarfettpute-transplantasjonsteknikk for å visualisere fartøygenerering av vaskulære endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Metoder for Imaging intracellulær pH i hårsekken stamcelleforskningen slektslinje i Live Drosophila Ovarian vev

Changes in intracellular pH (pHi) play important roles in the regulation of many cellular functions, including metabolism, proliferation, and ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

En RANKL-baserte Osteoclast kultur analysen av musen benmarg å undersøke rollen som mTORC1 i Osteoclast-formasjonen

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopic Ovarian transplantasjon prosedyrer for å undersøke og helse-levetid påvirkning av eggstokkene Senescence i kvinnelige mus

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

En Hyperandrogenic mus modell å studere polycystisk ovariesyndrom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Vurdering av oksidativ skade i primær mus okulære overflateceller / stamceller som svar på ultrafiolett-C (UV-C) skade

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...