القلب اختبار الاجهاد الناجم عن الدوبوتامين ومراقبتها من قبل القسطرة القلبية في الفئران

Summary

نحن تصف بروتوكول لإجراء اختبار إجهاد القلب الناجمة عن الدوبوتامين ومراقبتها من قبل قسطرة القلب في الفئران العادية. كما نعرض تطبيقه على كشف أمراض القلب تحت الإكلينيكي في الفئران حمية عالية الدهون الناجمة عن السمنة.

Abstract

الدوبوتامين هو ناهض الأدرينالية β مع تقارب أعلى لمستقبلات أعرب في قلب (β ₁₎ من لمستقبلات أعرب في الشرايين (β _2). عندما تدار بشكل منتظم، لأنه يزيد الطلب القلب. وهكذا، تكشف القناع عن إيقاع غير طبيعي الدوبوتامين أو المناطق الدماغية المحتملة لخطر احتشاء.

لا يمكن أن يؤديها رصد وظيفة القلب أثناء اختبار التحمل القلب أو من قبل أي من ecocardiography قسطرة القلب. هذا الأخير هو أسلوب أكثر دقة الغازية ولكن وغنية بالمعلومات التي السابق.

القلب اختبار الإجهاد الناجم عن الدوبوتامين ومراقبتها من قبل قسطرة القلب إنجاز كما هو موضح هنا يسمح، في تجربة واحدة، وقياس المعلمات الدورة الدموية التالية: معدل ضربات القلب (HR)، والضغط الانقباضي والضغط الانبساطي، والضغط الانبساطي النهائي، الضغط الإيجابي القصوى التنمية (DP / dtmax) واضغط السلبية القصوىلدى عودتهم التنمية (DP / DT _{دقيقة)،} في ظروف خط الأساس وتحت جرعات متزايدة من الدوبوتامين.

كما هو متوقع، في الفئران العادية احظنا الدوبوتامين بالجرعة زيادة في _{الحد الأقصى} HR DP / DT، _ويوجد DP / DT. وعلاوة على ذلك، على أعلى جرعة اختبار (12 نانوغرام / غرام / دقيقة) في انهيار المعاوضة القلبية الفئران حمية عالية الدهون الناجمة عن السمنة وغير المقنعة.

Protocol

وتمت الموافقة من قبل لجنة بروتوكول أخلاقيات لطب السريري Facultad دي Desarrollo ديل Alemana-جامعة.

I. إعداد تسريب الدوبوتامين

1. حل 10 ملغ من الدوبوتامين في 20 مل من الماء المقطرة العقيمة، من أجل الحصول على محلول من 500 ميكروغرام / مل الدوبوتامين. قسامة وتخزينها في -20 درجة مئوية. ويمكن استخدام هذا الحل على الأقل لمدة 3 أشهر.
2. ذوبان الجليد في قسامة من محلول المخزون الدوبوتامين في درجة حرارة الغرفة.
3. تمييع الحل الدوبوتامين الأسهم في معقمة كلوريد الصوديوم 0.9٪، من أجل الحصول على حل الدوبوتامين العمل التي تركز يحسب باستخدام الصيغة: الدوبوتامين (ميكروغرام / مل) = وزن الجسم X 0.2.
4. ملء حقنة 1 مل 29Gx1 / 2 "مع الدوبوتامين حل العمل.
5. أدخل الإبرة من الحقنة في أنبوب PE 20-10 سم.
6. ضبط حقنة في مضخة التسريب بعد تعليمات الشركة المصنعة.
7. إعداد ضخ منحدر في خطوةإلى الخطوة تنسيق مع بزيادة قدرها 10 ميكرولتر / دقيقة لكل خطوة، لمدة 6 خطوات.

II. إعداد استشعار الضغط

1. للحد من الانجراف إشارة، يغرق استشعار الضغط في الماء المعقم في C ° 37 على الأقل 15 دقيقة. لا نقع القسطرة أكثر من 0.5 سم العميق، من أجل منع ذلك الضغط الهيدروليكي يؤثر على استشعار الضغط.
2. معايرة إلكترونيا استشعار الضغط في 25 و زئبق 100. يتم تحويل المدخلات الكهربائية (فولت) إلى إشارة الضغط (مم زئبق).
3. تعيين معدل أخذ العينات من 2 ك / ث واستخدام مرشح تمرير منخفض مع قطع في 100 هرتز. تعيين إشارة الضغط إلى الصفر مم زئبق.
4. بمناسبة القسطرة 15 مم من الحافة. وقدر بعيدة للوصول إلى قلب من وجهة مقدمة من تخطيط صدى القلب، الكشف عن وجود قسطرة في ventricule اليسار.

III. إعداد فأرة للقسطرة

1. C57BL الوزن / 6 الفئران الذكور، 30-32 أسبوع من العمر.
2. حقن الغشاء البريتونى 60 ميكروغرام / كغ الكيتامين و 4 ميكروغرام / كغ زيلازين ^1. ملاحظة: يمكن استخدام التخدير أخرى، على سبيل المثال: 350 حتي 450 ميكروغرام / كغ AVERTIN، 50 ميكروغرام / كغ أو 1.5 بنتوباربيتال - ^2-3 isoflurane 2٪.
3. حلاقة الرقبة مع الحلاقة الكهربائية.
4. ضع الماوس تخدير في موقف ضعيف على لوحة التسخين متساوي الحرارة حرارة. تأمين أطرافه مع شريط ورقي.
5. أداء قليل اصبع القدم لتأكيد التخدير الكامل.
6. إدراج بلطف مجس المستقيم لمراقبة درجة حرارة الجسم. باستخدام مسبار vaselinized يوصى.
7. إذا درجة حرارة الجسم يختلف من 37 ° C ± 0.5 ° C، وضبط ذلك عن طريق لوحة التدفئة.
8. وضع خطم الماوس بالقرب من امدادات الاوكسجين.
9. ضع الماوس منطقة الرقبة تحت stereomicroscope.

IV. الحصول على البيانات

1. في 7 البرمجيات LabChartPro، حدد قناة واحدة للتسجيل الضغط وقناة واحدة للمعدل ضربات القلب (HR)التسجيل. لهذا الأخير، حدد الخيار "القياسات الدورية" وقياس معدل الإعداد و.
2. للقناة الضغط تعيين نطاق النطاق: 0 حتي 150 مم زئبق.
3. لتعيين HR قناة نطاق جدول: 200 حتي 600 نبضة في الدقيقة.
4. اضغط على مفتاح بدء لبدء التسجيل.
5. إدراج تعليقات تشير إلى العمليات الجراحية، على سبيل المثال: إدارة التخدير، والبدء من التسريب الدوبوتامين، وتركيز الدوبوتامين، والتنفس التغييرات.

V. قسطرة القلب ^4،5

1. إجراء شق صغير على الجانب الأيمن بالقرب من الفك. مع مقص فصل الأنسجة الضامة العضلات الجلد.
2. إجراء تشريح طولية (1.5 - 2 سم) على الجانب الأيمن من القصبة الهوائية. فصل النسيج الضام، والدهون والعضلات مع ملقط المنحني، من أجل فضح الشريان السباتي الأيمن بالقرب من القصبة الهوائية.
3. تضع المتوسع في الجانب الحيواني الحق في فضح الشريان السباتي. نابضالضغط المتولدة عن القلب يسهل تحديد الشريان. حبل الوريد، وهو الأحمر الداكن، هو على حق.
4. فصل الشريان من الأنسجة المجاورة مع ملقط المنحني. العصب المبهم، الذي يشبه الخيط الأبيض، وتقع على طول الشريان.
5. قطع قطعة من الخيط 20 سم 6/0 الحرير و "مزدوج" عليه.
6. تمرير "المزدوج" الموضوع تحت الشريان من اليسار إلى اليمين. قطع الخيط، من أجل الحصول على الغايات منفصلة.
7. تمرير الموضوع الثالث (10 سم) تحت الشريان.
8. ربط عقدة ضيقة في الموضوع وضعه بالقرب من الرأس، وفضفاضة واحدة في الموضوع أكثر البعيدة.
9. ربط عقدة فضفاضة في الموضوع الأوسط، وإصلاح الطرف الأيمن من الخيط الأوسط إلى سادة التدفئة مع شريط ورقي.
10. إبقاء الشريان السباتي عن طريق إسقاط رطبة العقيمة كلوريد الصوديوم 0.9٪. تجفيف قبالة الزائدة من السوائل مع براعم القطن.
11. تمتد أسفل الموضوع مع المشبك مرقئ.
12. إصلاح موقف مقص مرقئ بواسطة Pببطء على الجلد من البطن، وتمتد على الموضوع العليا، وذلك لتسد تدفق الدم. تحقق من أنه تمت إزالة النسيج الضام حول الشريان. يجب أن تكون كاملة من الشريان الدم والمحرومين من النبض. منع المواضيع من إنتاج قوة عزم الدوران على الشريان.
13. جعل المقطع العرضي نيك بالقرب من أسفل الشريان مع مقص الدقيقة Vannas. ان تراق قطرة دم.
14. إدراج قسطرة في الشريان السباتي. تأكد من إدخال استشعار الضغط بأكمله. تحقق من عدم وجود فقدان الدم.
15. ضبط بلطف عقدة الموضوع الأوسط، من أجل الاستمرار على القسطرة في مكانها. لا ضغط أكثر من اللازم، واستشعار الضغط هش للغاية.
16. الافراج عن مقص مرقئ من البطن الحيوان.
17. عقد القسطرة مع اليد ودفع الموضوع الأوسط، وذلك لتجنب فقدان الدم. ملاحظة: يجب أن تكون الشريان الكامل من الدم.
18. بدء تسجيل إشارات الضغط.
19. عندما القسطرة هو في الداخل، فيإشارة الضغط الشرياني يتقلب 60-70 ل100-120 مم زئبق. ويظهر على شكل إشارة الضغط في ملاحظة الشكل 1.A.: إذا كنت مهتما في، في هذه المرحلة الزمنية يمكنك تسجيل الضغط الشرياني إذا إشارة ثابت لمدة لا تقل عن 5 دقائق. تم الحصول على قيم HR من الطول الموجي الضغط النظر فاصل زمني من 30 ثانية من إشارة قياسية. من الممكن أيضا استخدام وسيلة لقياس تخطيط القلب مباشرة لHR، وفقا لأهداف التحقيق.
20. دفع برفق حتى القسطرة لمراقبة تغير في شكل إشارة الضغط (الشكل 1.B). مرة القسطرة داخل البطين الأيسر، إشارة الضغط يتقلب من 0 إلى 100-120 مم زئبق. إذا كان من الصعب الانزلاق القسطرة، قرصة الصدر مع اثنين من أصابع الحيوان.
21. السيطرة على معدل التنفس بشكل مستمر، درجة حرارة الجسم، ومستوى التخدير وإشارة الضغط. ينبغي لجميع من لهم تبقى مستقرة.

VI. ضخ الدوبوتامين

1. لكيفية تركيب الكانيولا في الوريد الوداجي تأكد من قشر عودة الأنسجة الدهنية في جميع أنحاء الوريد، وذلك لمنع ثقب فيها. العملية الجراحية لانسداد الوريد مشابه لما تعرض لإجراء الشريان السباتي.
2. إدخال أنبوب PE-10 في الوريد. تأكد من أن تدفق الدم لا يتم حظر نقل الغواص الى الوراء حقنة.
3. ضخ الدوبوتامين يبدأ مع 10 ميكرولتر / دقيقة والانتهاء مع 60 ميكرولتر / دقيقة. في كل خطوة، في الحفاظ على المعدل التسريب لمدة 2 دقيقة ^6.
4. بعد الجرعة الدوبوتامين الماضي، الموت ببطء مع الحيوان جرعة زائدة من التخدير.

VII. تحليل البيانات

1. لتحليل البيانات، واختيار مقطع من البيانات المسجلة من اهتمامك. تأكد من النظر في الفترة الزمنية حيث ضغط إشارة مستقرة.
2. حدد رمز الإعداد في الدم حدة الضغط. إشارة إلى نوع محدد من إشارة الضغط.
3. تلقائيا يعرض LabChartPro 7 البرمجيات يعني الحد الأقصىوالقيم الدنيا للHR، الضغط الانقباضي (P _{كحد أقصى)،} والضغط الانبساطي (P _{دقيقة)،} نهاية الانبساطي ضغط (EDP)، القصوى التنمية الضغط الإيجابي (DP / dtmax) والقصوى التنمية الضغط السلبي (DP / DT _دقيقة). وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تصور المعلمات القلب على أثر الضغط.

النتائج

يتم تعريف إشارة الضغط الشرياني عن طريق الضغط الانقباضي والانبساطي. عندما استشعار الضغط داخل البطين الأيسر والضغط على (LVP) يتميز الموجي بواسطة قطرة إلى الصفر من الضغط الانبساطي وظهور الانكماش الأذين الأيسر البطين قبل الانكماش (الشكل 1). في حالة خط الأساس، كان ...

Discussion

القلب اختبار الإجهاد الناجم عن الدوبوتامين ومراقبتها من قبل قسطرة القلب هو شاقة. ومع ذلك، بعد بروتوكول هنا وصف ومع وقت قصير من التدريب، فمن الممكن لتقييم الدورة الدموية ستة المعلمات في تجربة واحدة أن ما يقرب من ساعة واحدة الماضي.

...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
			الكواشف
PE-50/10	وارنر الصكوك	64-0752
خيط الحرير 6/0 HR17	تاجوم	SN0713K
Xylacin 20 ملغ / مل	ابوراتوريو Centrovet
الكيتامين 100 ملغ / مل	السحب فارما
كلوريد الصوديوم 0.9٪	مختبر ساندرسون SA
الدوبوتامين هيدروكلوريد	سيغما الدريخ	D0676
حقنة الأنسولين U-100 29G X ½ "	تيرومو الطبية المحدودة
ملقط تشريح مايكرو شكل 11.5 سم 7	لوتونMEDIZINTECHNIK	09-0959
غريف الملقط الأمراض القلبية الوعائية 0.7mm 7cm	لوتون MEDIZINTECHNIK	62-0263
المشابك ديفنباخ شارع الكلورين البلدغ 38 مم	لوتون MEDIZINTECHNIK	60-010
Vannas مقص 8 سم فتحي شارع	لوتون MEDIZINTECHNIK	63-1400
			معدات
SPR-671-القسطرة الضغط MIKRO تلميح	ميلر الصكوك	840-6719
PCU-2000 وحدة السيطرة على ضغط	ميلر الصكوك	880-0129
PowerLab 4/30	ADinstruments بي تي واي المحدودة	ML866
LabChartPro 7	ADinstruments بي تي واي المحدودة	MLU260 / 7
Legato200 تسريب مضخة	KdScientific	KD-KDS210P
TCAT-2LV تحكم درجة الحرارة متساوي الحرارة والتدفئة لوحة	PhysiTemp الصكوك شركة
إمدادات الأوكسجين الطبي	Indura
التحقيق المستقيم	ADinstruments بي تي واي المحدودة	MLT1404
مجهر ثلاثي العينيات، والإضاءة المحورية	LW العلمية	Z2B-TRI-ETNE، ILP-1502-LTS1، ILP-1502-DGGF