جمع وقياس وسطاء الافرازات الكيميائية الحيوية في الجرح الجروح الجراحية

Summary

توفر هذه المقالة وصفا مفصلا والبصرية منهجية لجمع وقياس البيوكيميائية وسطاء التهابات وnociceptive في موقع الجرح الجراحية بعد الولادة القيصرية. وقد استخدم هذا الإنسان الأحيائي لتحديد العلاقات المتبادلة بين الجرح وتركيزات مصل خلوى والدواء بوساطة السيتوكينات التغيرات في الجرح، وكيموكينات neuropetides.

Abstract

وصفنا منهجية التي نحن قادرون على جمع وقياس البيوكيميائية وسطاء التهابات وnociceptive في موقع الجرح الجراحي. جمع مواقع محددة علامات البيوكيميائية المهم أن نفهم العلاقة بين مستويات المصل في الجرح والجراحية، وتحديد أي صلة بين الإفراج الوسيط، والألم، واستخدام مسكن والنتائج الأخرى ذات الاهتمام، وتقييم تأثير الدواء النظامية والطرفية على الجروح الكيمياء الحيوية. وقد تم تطبيق هذه المنهجية للنساء صحية تمر الولادة القيصرية الاختيارية مع التخدير الشوكي. لقد قمنا بقياس الافرازات الجرح وسطاء المصل في فترات زمنية نفس درجات الألم المريض والمسكنات الاستهلاك لمدة تصل إلى 48 التسليم بعد القيصرية ساعة. باستخدام هذه المنهجية قد تمكنا من كشف وسطاء البيوكيميائية المختلفة بما في ذلك عامل نمو العصب (NGF)، E2 البروستاجلاندين (PG-E2) مادة P، IL 1β، IL-2، IL-4، IL-6، IL-7، IL-8،IL-10، IL-12، IL-13، IL-17، TNFα، INFγ، G-CSF، GM-CSF، MCP-1 و MIP 1β. وقد وجدت الدراسات التي تطبق هذا الإنسان الأحيائي الجروح أي ارتباط بين الجرح وتركيزات مصل أو خلوى الشخصي وقتهم الافراج عن (J ألم 2008؛. 9 (7) :650-7) ¹ ثقنا أيضا فائدة هذه التقنية في التعرف عليها. المخدرات بوساطة التغييرات في محتوى خلوى الجرح (Anesth Analg 2010؛ 111:1452-9) ²

Introduction

بعد شق جراحي، من سكان والهجرة الإفراج عن السيتوكينات الالتهابية الخلايا الموالية للوالمضادة للالتهابات، prostanoids، نيوروببتيد و chemokines التي تعتبر مهمة لبدء والحفاظ على الألم. ^3،4 القدرة على جمع مواقع محددة علامات البيوكيميائية أمر بالغ الأهمية لتحديد العلاقة بين مستويات المصل في الجرح والجراحية، وفهم العلاقة المعقدة بين الوسيط والإفراج الألم الجراحي، وتكون قادرة على تقييم تأثير كل من النظامية والطرفية الدواء على الجرح الكيمياء الحيوية الجراحية. وقد ركزت الدراسات على قياسات منهجية للوساطة في الكيمياء الحيوية ولم تنظر في مواقع محددة الإصدار. ^5،6 القياسات المصل من السيتوكينات و chemokines قد لا يكون تعبيرا عن الأحداث المحلية الجروح البيوكيميائية وتشير فقط إلى استجابة عالمية النظامية للإصابة الجراحية. توفر هذه المقالة وصفا مفصلا وفريدة من نوعها البصرية من هذه المنهجية التي كانت التنوبش المشار إليه في عام 2008 في مجلة الألم .. ¹ والهدف من هذه المقالة إن الرب هو تقديم وصفا فريدا وتعزيز بصريا من الأساليب.

Protocol

1. دراسة البروتوكول

• الحصول على موافقة مجلس مراجعة المؤسسية والموافقة المسبقة عن مكتوب.
• تحديد السكان المناسبة لإجراء العمليات الجراحية الدراسة. فقط وقد تم تطبيق هذه المنهجية لجروح الولادة القيصرية ولكن معظم الجروح الجراحية ستكون مناسبة.
• النظر في إدراج واستبعاد المعايير للمشاركة في الدراسة. يمكن لمصابي والإجراءات التي ترتفع فيها معدلات الإصابة الجرح الجراحي لا يكون مناسبا.
• توحيد التخدير وإدارة ما بعد الجراحة لجميع المرضى لتجنب الإرباك المحتملة.

2. Nociceptive والتهاب كوكتيل الوسيط بيوكيميائية

• إدراج PainBuster ON-Q-Q ON مع SilverSoaker (I-التدفق، ليك فورست، كاليفورنيا) في طبقة تحت الجلد فقط قبل إغلاق الجرح (يمكن اعتبار طبقات الأنسجة الأخرى). ألم PainBuster ON-Q نظام الإغاثة يسلم باستمرار المالحة العادي بمعدل 2 مل / ساعة. يمكن أن يكون الناقل مشطINED مع أو مقارنة الأدوية ذات الأهمية مثل مخدر موضعي وغير الستيرويدية المضادة الالتهاب.
• إدراج معيار ثلاثي محبس في هذا النظام للسماح تطلع الافرازات الجرح في نقاط زمنية محددة. والتسريب المستمر يمنع القسطرة من التخثر ويحسن من موثوقية النظام لإنتاج عينات الافرازات. إذا تطلع الافرازات من الصعب (ما يقرب من 5٪ من الحالات)، والنظر في دفع برفق فوق الجرح، وتغيير الموقف هذا الموضوع (على سبيل المثال، ويجلس المريض لأعلى أو الكذب عليهم الشقة)، وذلك باستخدام 0،5-1 مل تدفق المياه المالحة العادية أو سحب القسطرة 1-2 سم.
• في نقاط زمنية محدد في البروتوكول (على سبيل المثال، 1، 4، 6، 24، و 48 ساعة بعد الولادة القيصرية)، ونضح سحب 1 مل من الافرازات الجرح. نقل الافرازات في كوب البولي اثيلين تحتوي على 30 ميكرولتر من بروتين مثبط. وقد استخدمنا كاملة المانع بروتين (روش العلوم البيولوجية، بالو ألتو، كاليفورنيا) لأغراضنا.
• وفي الوقت نفسه فترات يحددها بروتوكول الدراسة، وجمع 10 مل من الدم. وقد استخدمنا أنبوب جمع الدم التي تحتوي على الليثيوم هيبارين؛ في مؤسستنا هذه عبارة عن أنبوب من الزجاج الأخضر وتصدرت. إضافة 300 ميكرولتر من إضافية المانع بروتين في عينات الدم.
• في غضون 1 ساعة من جمع، وطرح عينات على الجليد وأجهزة الطرد المركزي في 3،000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة.
• إزالة الطافي مصل وجرح ومكان في أنبوب microcentrifuge القياسية وتخزينها في -20 درجة C.

3. فحص تحليل

• مرة واحدة يتم جمع كل الافرازات ودراسة عينات المصل وتخزينها، وذوبان الجليد تحليل العينات في نفس الوقت.
• لقد قمنا بقياس السيتوكينات و chemokines باستخدام المقايسة المناعية متعددة. ومقايسة المناعية متعددة تسمح لنا تقنية مقايسة analytes العديد من عينات صغيرة الحجم (50 ميكرولتر). ومتعددة تعطي نتائج قابلة للمقارنة مع تلك التي تم الحصول عليها مع ELISA. لقد استخدمنا 17-نوع plex الحيوي PlexTM النظام (BioRad، هيركules، CA) لتحليلنا. هذا الاختبار قادر على قياس عامل نخر الورم α (TNFα)، مضاد للفيروسات α (INFα)، انترلوكين 1β (IL-1β)، انترلوكين 2 (IL-2)، انترلوكين 4 (IL-4)، انترلوكين 5 (IL-5 )، انترلوكين 6 (IL-6)، انترلوكين 7 (IL-7)، انترلوكين 8 (IL-8)، انترلوكين (IL-10)، انترلوكين 12 (IL-12)، انترلوكين 13 (IL-13)، انترلوكين 17 (IL-17)، محببة عامل تحفيز مستعمرة (G-CSF)، محببة، بلعم مستعمرة عامل تحفيز (GM-CSF)، والبروتين الوحيدات جاذب كيميائي 1 (MCP-1) والبلاعم البروتين التهابات 1 (MIP-1β). وقد تم قياس عامل نمو الأعصاب مع الأجسام المضادة DY256 NGF عن طريق إضافته إلى لوحة 17-نوع plex مع عدة أمين توصيل الحيوية الصفيف.
• لضمان جودة جيدة التحليل، ينبغي بذل كل قياس في مكررة. يتم إنشاء منحنيات القياسية لكل الحليلة باستخدام analytes المرجعية التي توفرها الشركة المصنعة (في تركيزات 0.20، 0.78، 3.13، 12.5، 50، 200، 800، 3200 جزء من الغرام / مل زائدمعيار صفر لملحي). يتم تضمين منحنيات القياسية في كل المدى ويتم حساب تركيزات عينة مع برنامج إدارة بيو الصفيف.
• تم قياس P مادة البروستاجلاندين وE2 باستخدام حساسية عالية أطقم ELISA. وقد استخدمنا الفحص والنماذج، وشركة (آن أربور، ميشيغان) لهذا التحليل. تحليل أداء في تكرار وفقا لمواصفات الشركة المصنعة.

النتائج

باستخدام هذه المنهجية قد تمكنا من كشف جميع الوسطاء الكيميائية الحيوية المذكورة أعلاه باستثناء IL-5 في الافرازات الجرح والبلازما. لم يتم اكتشاف بعض السيتوكينات إضافية ^1،2 في البلازما (IL-4، IL-17، TNFα، INFγ ، GM-CSF). ⁽¹⁾ كانت الدورة السيتوكينات وقت قياس و chemokines في دراس...

Discussion

وقد وجد هذه المنهجية المذكورة أعلاه لتكون حساسة بما يكفي للكشف عن الكيمياء الحيوية وسطاء التهابات والافرازات nociceptive في الجرح. أخذ العينات في نقاط زمنية مختلفة سمحت لنا أيضا لمراقبة التغيرات في هذه الوساطة مع مرور الوقت. ^1،2 نحن لسنا على علم بأي الإنسان الأخرى مق...