استخدام الكيموستات في الميكروبية بيولوجيا الأنظمة

Summary

معدل نمو الخلايا هو عملية تنظيم والمحددات الأساسية لعلم وظائف الأعضاء الخلية. زراعة المستمر باستخدام الكيموستات يمكن السيطرة خارجي من معدل نمو الخلايا بالتقادم المغذيات تسهيل دراسة الشبكات الجزيئية التي تتحكم في نمو الخلايا وكيف تتطور هذه الشبكات لتحسين نمو الخلايا.

Abstract

خلايا تنظيم معدل نموها في استجابة لإشارات من العالم الخارجي. مع نمو الخلية والعمليات الخلوية المختلفة يجب أن تكون منسقة بما في ذلك تجميع الجزيئات، والتمثيل الغذائي، وفي نهاية المطاف، والالتزام دورة انقسام الخلية. وناظم كيميائي، وهي طريقة للسيطرة على تجريبيا معدل نمو الخلايا، ويوفر وسيلة قوية لدراسة منهجية كيفية تأثير معدل نمو العمليات الخلوية - بما في ذلك التعبير الجيني والتمثيل الغذائي - والشبكات التنظيمية التي تتحكم في معدل نمو الخلايا. عندما يحتفظ به لمئات من الأجيال الكيموستات يمكن استخدامها لدراسة تطور التكيف من الميكروبات في الظروف البيئية التي تحد من نمو الخلايا. وصفنا مبدأ ناظم كيميائي الثقافات، وإظهار عملها وتقديم أمثلة من التطبيقات المختلفة. بعد فترة من الاهمال بعد بدء العمل بها في منتصف القرن العشرين، تلاقي المنهجيات الجينوم على نطاق ومع تجدد فيterest في تنظيم نمو الخلايا والأساس الجزيئي للتطور التكيف هو تحفيز نهضة في استخدام الكيموستات في الأبحاث البيولوجية.

Introduction

وينظم نمو الخلايا من خلال شبكات معقدة من التفاعل عوامل وراثية وبيئية ^1،2. تنظيم سياقاتها من نمو الخلايا يتطلب نهجا على مستوى النظام لدراستها. ومع ذلك، يتم الطعن في دراسة دقيقة من نمو الخلايا ينظمها صعوبة السيطرة تجريبيا المعدل الذي تنمو الخلايا. علاوة على ذلك، حتى في أبسط التجارب الظروف خارج الخلية هي في كثير من الأحيان ديناميكية ومعقدة كخلايا تغيير بيئتهم بشكل مستمر لأنها تتكاثر. يتم توفير حل لهذه المشاكل من قبل ناظم كيميائي: وسيلة لزرع الخلايا التي يمكن السيطرة التجريبية من معدلات نمو الخلايا في بيئات محددة، ثابتة والسيطرة عليها.

طريقة زراعة المستمر باستخدام ناظم كيميائي وصفت بشكل مستقل من قبل مونود ³ و ⁴ نوفيك وزيلارد في عام 1950. كما تصور في الأصل، وتزرع الخلايا في حجم ثابت من وسائل الإعلام وهذا هو يخدعالمخفف tinually بإضافة وسائل الإعلام الجديدة وإزالة في وقت واحد من وسائل الإعلام القديمة والخلايا (الشكل 1). إلى جانب المعادلات التفاضلية العادية (الشكل 2) وصف معدل التغير في كثافة الخلية (س) وتركيز المغذيات منظم النمو (ق) في السفينة ناظم كيميائي. الأهم من ذلك، هذا النظام من المعادلات تتنبأ واحد (صفرية) مستقرة ثابتة للدولة (الشكل 3) مع ضمنا ملحوظا أنه في الحالة المستقرة، ومعدل نمو محدد من الخلايا (أي ثابت معدل النمو الأسي) يساوي معدل الذي يتم تخفيفه ثقافة (D). من خلال تغيير معدل التخفيف من الممكن لإقامة السكان المطرد للدولة من الخلايا في معدلات نمو مختلفة وتحت ظروف مختلفة من قيود المغذيات.

كانت السيطرة التجريبية من معدل النمو باستخدام الكيموستات حاسمة لتطوير فهم كيف يمكن للتغييرات فسيولوجية الخليةمع معدلات النمو ^5،6. ومع ذلك، أصبح هذا دعامة السابق الأساليب الميكروبيولوجية غامضة بشكل متزايد خلال انفجار في البحوث البيولوجيا الجزيئية في أواخر القرن العشرين. اليوم، تجدد الاهتمام في السيطرة النمو في كل من الميكروبات والكائنات الحية متعددة الخلايا وظهور أساليب الجينوم على نطاق وللتحليل على مستوى النظم جددت الدافع لاستخدام الكيموستات. هنا، نحن تصف ثلاثة التطبيقات التي تستفيد من مراقبة دقيقة لمعدلات نمو الخلية والبيئة الخارجية التي من الممكن فريد باستخدام الكيموستات. أولا، نحن تصف استخدام الكيموستات إلى التحقيق في كيفية وفرة الآلاف من الجزيئات الحيوية - وينظم coordinately مع معدل النمو - مثل النصوص ونواتج الأيض. الثاني، نحن تصف كيف يمكن استخدام الكيموستات للحصول على تقديرات دقيقة للاختلافات معدل النمو بين الأنماط الجينية المختلفة في بيئات محدودة المغذيات باستخدام التجارب المنافسة. الثالث، ونحن تصف كيفية الكيموستات يمكنأن تستخدم لدراسة التطور على التكيف من خلايا تنمو في بيئات فقيرة بالمغذيات ثابتة. هذه الأمثلة أمثلة الطرق التي الكيموستات يتم تمكين التحقيقات على مستوى نظم تنظيم نمو الخلايا، الجين عن طريق تفاعلات البيئة والتطور على التكيف.

Protocol

لا يمكن أن تتحقق مبدأ زراعة المستمر باستخدام ناظم كيميائي في مجموعة متنوعة من التطبيقات. في جميع الكيموستات فمن الضروري أن يكون 1) وسائل للحفاظ على عقم جميع المكونات، 2) ثقافة مختلطة جيدا، 3) التهوية المناسبة للسفينة الثقافة و 4) وسيلة يمكن الاعتماد عليها من وسائل الإعلام بالإضافة إلى إزالة والثقافة. هنا، نحن تصف استخدام مفاعل حيوي Sixfors (Infors المؤتمر الوطني العراقي) باعتبارها ناظم كيميائي باستخدام الأساليب التي يمكن تكييفها بسهولة للالاجهزة البديلة.

1. تجميع السفن ناظم كيميائي

1. بدوره على Sixfors باستخدام مفتاح رئيسي.
2. شطف جيدا السفينة ناظم كيميائي، والتجمع، والنمام، وأنابيب المرفقة مع منزوع الأيونات (DI) المياه. تحقق من كل أنابيب والخواتم O-واستبدال أي تهالك أبحث قطعة.
3. تأكد من قاعدة دعم محرك رمح تواجه صعودا في إناء من الزجاج والتي قطعت الجزء العلوي من حملة رمح في السكن على الجمعية النمام. تعيين stirreيجلس التجمع ص في الإناء الزجاجي ضمان السفلي من حملة رمح في دعم حملة رمح. استخدام المشبك لتأمين التجمع النمام إلى وعاء زجاجي.
4. ملء وعاء مع حوالي 300 مل من الماء DI.
5. تنزع الأغطية من الأوكسجين المذاب (DO ₂₎ التحقيق والتحقق من مستوى بالكهرباء عن طريق فك غلاف القاع، والتأكد من أن الغلاف السفلي شغل في منتصف الطريق مع الحل بالكهرباء. Rescrew الغلاف السفلي وتضاف الى ميناء على متن السفينة ناظم كيميائي. المسمار حتى ضيق الإصبع.
6. نلقي التحقيق الحموضة وإزالته من العازلة التخزين (3 M بوكل). إزالة الغطاء مسبار درجة الحموضة ونعلق على المخمر 1. باستخدام شاشة التحكم Sixfors، انتقل إلى القائمة المعلمة المخمر وحدد "معايرة درجة الحموضة". وضع مسبار درجة الحموضة في مستوى درجة الحموضة 7 العازلة وقراءة السجل كما عالية القراءة. كرر مع درجة الحموضة 4 العازلة والقراءة كما سجل أدنى قراءة. فصل مسبار درجة الحموضة من المخمر، ويغسل بالماء DI وإدراج الباحث التحقيقس الميناء على متن السفينة ناظم كيميائي. المسمار حتى ضيق الإصبع.
7. وضع السفينة ناظم كيميائي في رف. ملاحظة على متن السفينة التي المخمر (1-6) كان على علاقة الرقم الهيدروجيني إلى التحقيق ومعايرة. وضع غطاء مسبار درجة الحموضة على تحقيق درجة الحموضة. باستخدام رقائق تغطية بإحكام الجزء العلوي من التحقيق قيام _2.
8. احباط أضعاف خلال نهايات الأنابيب التي تعلق على سفينة ناظم كيميائي.
9. كرر الخطوات من 1،2-1،8 لجميع السفن.
10. تعقيم الأوعية بواسطة التعقيم لهم لمدة 15 دقيقة على دورة السائل.

2. إعداد وسائل الإعلام

1. إنشاء مجموعة الحد من تركيزات للمادة مغذية التي تنمو الثقافات دفعة في تركيزات المغذيات المختلفة. المغذيات هو الحد في النطاق حيث كثافة الخلية النهائية هي وظيفة خطية من تركيز المغذيات الأولية (الشكل 4). تحديد تركيز المغذيات بشكل جيد ضمن نطاق محدود. أمثلة على تكوين وسائل الإعلام القياسية للدراسات مع Saccharomyceتتوفر ق الخباز في ^7-11.
2. الأوتوكلاف لالدامجانة زجاجة كبيرة الفارغة التي توج مع المكونات المطاطية التي تحتوي على مدخل الهواء ومخرج وسائل الإعلام بعد التأكد أولا أن نهاية الأنابيب وسائل الإعلام تتناول في احباط.
3. في وعاء منفصل إعداد 10 L من وسائل الإعلام.
4. نعلق مرشح كوب 500 مل إلى 100 مل زجاجة سائل الإعلام. إزالة عامل التصفية القطن مع ملقط معقم في الإيثانول ونعلق على الفور إلى ميناء الترشيح على الدامجانة زجاجة كبيرة وسائل الإعلام.
5. إرفاق الدامجانة زجاجة كبيرة وسائل الإعلام إلى مصدر فراغ وتصفية تعقيم وسائل الإعلام عن طريق إضافته إلى كأس فلتر.
6. عندما الترشيح من وسائل الإعلام كاملة، تغلق ميناء الترشيح مع الشبك المعدني.

3. هل معايرة ₂ المسابر وإعداد ناظم كيميائي

1. بعد أن تم تعقيمها الأوعية ناظم كيميائي وسمح لتهدئة مكان السفينة في سترة في الحرارة المقابلة. ربط التحقيق في درجة الحرارة، ودرجة الحموضة التحقيق، والقيام ₂ التحقيق. السماح للسفينة الجلوس مع السلطة لمدة لا تقل عن 6 ساعة للسماح للقيام ₂ تحقيقات لاستقطاب.
2. وضع نهاية كل أنبوب النفايات السائلة في وعاء جمع منفصلة. توصيل التيار الهواء عبر فلتر تعقيمها وبدوره على تدفق الهواء. الماء في كل سفينة ينبغي أن تتدفق من أنابيب مياه الصرف، مما يدل على أن جميع الأختام تتشكل بشكل صحيح.
3. ضبط ارتفاع أنبوب مياه الصرف وفقا لحجم العمل المطلوب (مثلا 300 مل). نستخدم مسطرة التي تم وضع علامة مع مواضع أنبوب معايرة لأحجام عمل مختلفة.
4. ربط الدامجانة زجاجة كبيرة وسائل الإعلام إلى وعاء ناظم كيميائي. استخدام الإيثانول من اجل الحفاظ على أنبوب ينتهي معقمة قدر الإمكان. الموضوع أنابيب مضخة من خلال مضخة والمشبك مفتوحة. اضغط يدويا حتى يبدأ ضخ وسائل الإعلام في التدفق إلى السفينة ناظم كيميائي. الإفراج عن أنابيب من المضخة، يجب أن تتدفق بحرية وسائل الإعلام في السفينة ناظم كيميائي. عندما تصل وسائل الإعلام أنبوب النفايات السائلة، أعد أنابيب لضخ والمشبك.
5. بدء روnning البرنامج الأساسية مع مجموعة المكره إلى 400 دورة في الدقيقة ودرجة الحرارة التي حددت في 30 درجة مئوية.
6. من أجل القيام معايرة ₂ تحقيقات، وإيقاف العرض الجوي والتحول إلى غاز النيتروجين. الانتظار ساعة واحدة على الأقل وتسجيل قيمة الإجراء بأنه "منخفض للقراءة". التبديل إلى العرض الجوي (أي التي تحتوي على تركيز الأكسجين المحيطة)، وانتظر ساعة إضافية واحدة على الأقل، وقياس السجل ك "قراءة عالية".
7. بدء تسجيل البيانات باستخدام برنامج ايريس.

4. تلقيح

1. استخدام الايثانول 70٪ لتعقيم الجزء العلوي من سفينة الثقافة.
2. إزالة المسمار على رأس السفينة وماصة 1 مل من ثقافة بين عشية وضحاها في الإناء ناظم كيميائي. إعادة إحكام المسمار.
3. تشير إلى وقت التلقيح في ايريس.
4. انتظر ما يقرب من 24 ساعة للثقافات لتصل إلى مرحلة ثابتة في وقت مبكر. مع نمو الثقافة، والأوكسجين المذاب ودرجة الحموضة الانخفاض. في حالة وسائل الإعلام الحد من الجلوكوز، والأكسجين الذائب العودة إلى ~ 100٪ في فا ثابتةحد ذاتها. لقيود المغذيات الأخرى ستبقى الأوكسجين المذاب <100٪ في مرحلة ثابتة.

5. بدء مضخات وتحقيق الدولة ثابت

1. يتم احتساب معدل التخفيف بقسمة معدل التدفق (تدفق وسائل الاعلام وكم في الإناء لكل ساعة) من حجم الثقافة. على سبيل المثال، وذلك باستخدام حجم 300 مل معدل التخفيف من 0.1 يعني أن 30 مل من وسائل الإعلام يضاف إلى ثقافة كل ساعة. لأن النظام هو تحت ضغط إيجابي تتم إزالة نفس الحجم من السفينة ضمان أن الثقافة هي المخفف بشكل مستمر. وهناك مجموعة من معدلات التخفيف (D) يمكن استخدامها التي لا يتجاوز معدل النمو الأقصى (μ _ماكس) من الخلايا، أعلاه والتي سيتم غسلها الخلايا من ناظم كيميائي.
2. اختيار إعدادات مضخة، التي تحدد عدد الثواني المضخة وخارجها، لإنشاء معدل التدفق المطلوب. المضخة توفر وسائل الإعلام بمعدل 0.11 مل ~ / ثانية.
3. تعريف البرنامج باستخدام الباحث Sixforserface التي تحدد توقيت مضخة، ودرجة الحرارة وسرعة impellor. بدء تشغيل البرنامج.
4. إفراغ أوعية جمع السائل وتسجيل الوقت.
5. بعد ساعتين على الأقل، واستخدام اسطوانة تخرج لقياس مدى سائل الإعلام قد أزيلت من السفينة. وهذا يساوي وحدة التخزين التي تم إضافتها إلى السفينة ناظم كيميائي. حساب معدل التخفيف (D = V _{النفايات السائلة} / V _{الثقافة} / الساعة). ضبط إعدادات مضخة إذا كان معدل التخفيف حساب لا يطابق معدل التخفيف المطلوب.
6. في حالة مستقرة، لا يغير كثافة الخلية في ناظم كيميائي مع مرور الوقت. وهذا يمكن أن تقاس دون احداث بلبلة في الثقافة عن طريق أخذ عينات من تدفق. نحدد من الناحية التشغيلية تحقيق حالة مستقرة كما متطابقة قياسات كثافة الخلايا التي تكون مفصولة تضاعف السكان واحد على الأقل. سوف تصل إلى حالة مستقرة يستغرق ما يقرب من ثمانية أجيال الثقافة بعد الشروع في الثقافة التخفيف. في حالة مستقرة، والخلايا تنمو باطراد (اولاه. معدل نمو ثابتة على مر الزمن) في ظروف محدودة المغذيات. الوقت تضاعف عدد السكان (الجيل الوقت) هو قانون الجنسية (2) / د.
7. مواصلة لقياس كميات النفايات السائلة بشكل دوري لمدة التجربة لضمان أن معدل التخفيف المستمر والمحافظة عليها.

6. تطبيق 1: دراسة الخلايا تنمو بمعدلات مختلفة في ظروف الحالة المستقرة

1. في حالة مستقرة في ناظم كيميائي، فإن معدل نمو السكان من الخلايا يساوي معدل التخفيف. عن طريق تغيير منهجية معدل التخفيف فمن الممكن أن تنمو الخلايا بمعدلات مختلفة. وهذا يتيح الدراسة المنهجية للمعلمات الفسيولوجية التي تختلف مع معدل النمو بما في ذلك حجم الخلية، ومرحلة دورة الخلية ومقاومة الإجهاد. بالإضافة إلى ذلك، ملامح ثابتة للدولة مرنا العالمية والبروتين ومستوى الأيض يمكن أن يعاير في الخلايا تنمو بمعدلات مختلفة. هناك طريقتان للحصول على عينات:
2. يمكن أن تكون عينات صغيرة أوب سلبيتترتب عليه من خلال وضع نهاية أنبوب مياه الصرف إلى 1.5 مل أو 15 مل أنبوب. ويمكن الحصول على عينة من 1-5 مل في بضع دقائق (اعتمادا على معدل التدفق). ويمكن قياس العديد من المعلمات الفسيولوجية من هذه العينات.
3. التعبير الجيني، أو الأيض التحليلات تتطلب عينات أكبر التي يجب الحصول عليها في أسرع وقت ممكن. وضع نهاية أنبوب النفايات السائلة في أنبوب مخروطي 15 مل. الافراج عن المسمار عقد نهاية المعدني للأنبوب النفايات السائلة ودفع إلى أسفل بلطف. سوف A ~ 10 عينة مل ملء بسرعة الأنبوب الخاص. نضع في اعتبارنا أن وحدة التخزين في السفينة ناظم كيميائي قد تغير. إذا تم اتخاذ العديد من عينات متتالية قد يكون من الضروري للحد من تدفق للحفاظ على معدل ثابت التخفيف.

7. تطبيق 2: قياس دقيق من الاختلافات في معدلات النمو بين الطرز الوراثية في البيئات التي تسيطر عليها عن طريق فحوصات المسابقة على أساس التدفق الخلوي

1. الكيموستات يمكن استخدامها لتحديد بدقة تأثير تركيز المغذياتعلى الفروق في معدلات النمو (أي لياقة بدنية) بين خلفيات وراثية مختلفة. بواسطة سلالات زراعة المشترك المسمى مع البروتينات الفلورية مختلفة يتم تحديد معدل التغير في الوفرة النسبية خلال النمو المتسارع. أداء هذا الاختبار في معدلات تخفيف مختلفة (D) يسمح دراسة آثار تركيز المغذيات (ق) على الاختلافات اللياقة البدنية.
2. إنشاء ثقافات حالة مستقرة من سلالتين في الأوعية ناظم كيميائي منفصلة مع معدلات التخفيف متطابقة وحجم 300 مل.
3. سلبية عينة 1 مل من كل سفينة. تدور باستمرار خلايا، resuspend في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ووضعت في 4 درجات مئوية. هذه العينات تحتوي على عينات الخلايا متجانسة، والتي هي الضوابط لتحليل التدفق الخلوي لاحقة.
4. وضع أنبوب النفايات السائلة من سفينة واحدة في اسطوانة تخرج تعقيمها. الافراج عن المسمار عقد نهاية المعدني للأنبوب مياه الصرف، ودفع برفق إلى أسفل لطرد الخلايا من ناظم كيميائي. عندمايصل حجم 150 مل، والعودة نهاية المعدني للأنبوب مياه الصرف إلى موقعها الأصلي (300 مل). أكرر مع السفينة الثانية، وذلك باستخدام اسطوانة تخرج مختلفة.
5. استخدام الايثانول 70٪ للحفاظ على العقم أثناء إزالة المسمار على الجزء العلوي من السفينة ناظم كيميائي. وضع القمع في افتتاح وتصب 150 مل من ثقافة أخرى في الإناء ناظم كيميائي. إعادة إحكام المسمار. أكرر مع السفينة الثانية، وذلك باستخدام قمع الثانية. يحتوي كل سفينة ناظم كيميائي الآن خليط من سلالات اثنين.
6. الحصول على عينة 1 مل من كل سفينة باستخدام العينات سلبية كل 2-6 ساعة. تدور باستمرار خلايا، resuspend في برنامج تلفزيوني وتخزينها في 4 درجات مئوية. مواصلة اتخاذ عينات لتسجيل 2-3 أيام بعناية الوقت الذي اتخذ كل عينة.
7. في نهاية التجربة، يصوتن وتمييع عينات إلى ~ 2 × 10 ⁶ خلية / مل. باستخدام التدفق الخلوي، وقياس نسبة سلالتين في كل عينة. لأن كلا من سلالات تنمو باطراد، والفرق هو معدل النمو النسبييحددها الانحدار الخطي من قانون الجنسية (strain1/strain2) مع الزمن (يقاس في الأجيال). المنحدر من الانحدار هو الفرق النسبي في معدل النمو (أي ميزة اللياقة البدنية) من سلالة واحدة بالنسبة للأخرى.
8. كما يمكن للثقافة مختلطة يستغرق بعض الوقت للوصول الى حالة استقرار جديدة، ونقاط الوقت المبكر قد تناسب بشكل ضعيف إلى الانحدار. هو افضل حل هذه المشكلة عن طريق السماح 2-3 أجيال تنقضي قبل بدء أخذ العينات أو إزالة النقاط المبكرة التي هي القيم المتطرفة واضحة. على العكس، مرة واحدة وسلالة واحدة outcompeted وغيرها من البيانات لم تعد مفيدة وينبغي استبعاد هذه النقاط.

8. تطبيق 3: تطور التجريبية

1. تطور التجريبية التي أجريت في الكيموستات يختار لالمسوخ التي زادت في اللياقة البدنية في بيئة محدودة المغذيات. يتم تنفيذ الاختيار عموما على مدى مئات الأجيال.
2. تأسيس ثقافة ناظم كيميائي ثابت للدولة باستخدام سلالةالنمط الجيني المعروفة (ويفضل أن يكون تسلسل الجينوم المعروف)، والمغذيات تعريف القيد.
3. للحفاظ على "سجل الحفريات" من السكان التكيف بشكل سلبي عينة ناظم كيميائي كل 2-3 أيام وتخزين العينة في 15٪ الجلسرين في -80 درجة مئوية.
4. رصد الخزان وسائل الإعلام وتجديد وسائل الإعلام الجديدة مع الضرورة.
5. الحفاظ على الثقافة المتنامية باطراد لعدة مئات من الأجيال.
6. بعد الانتهاء من لوحة اختيار عينة من الخلايا على لوحات أجار الصلبة. بعد أن نمت الخلايا في المستعمرات، واختيار عينة متحيزة من المستعمرات باستخدام المسواك وتطعيم الحيوانات المستنسخة في الآبار الفردية لوحة 96 جيدا تحتوي على 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام. تسمح عينات نسيلي أن تنمو بين عشية وضحاها، إضافة 100 ميكرولتر من 30٪ الجلسرين وتخزينها في -80 درجة مئوية.
7. تميز الحيوانات المستنسخة من خلال تسلسل الجينوم كله وأداء فحوصات المظهري بما في ذلك تقييم اللياقة البدنية، وذلك باستخدام المشتركة سلالة مرجعية fluorescently المسمى، كما هو موضح في التطبيق 2.

النتائج

والميزة الرئيسية لالكيموستات هو القدرة على التحكم في معدل نمو الخلايا تجريبيا من خلال تغيير معدل التخفيف. في الخميرة في مهدها، خميرة الخباز، مورفولوجية الخلية بالمعلومات من مرحلته في دورة انقسام الخلية. السكان مع ارتفاع معدلات النمو تحتوي على نسبة أعلى من تقسيم الخ...

Discussion

الكيموستات تمكين زراعة الميكروبات في ظروف الحالة المستقرة التي تسيطر عليها النمو. الخلايا تنمو بشكل مستمر بمعدل ثابت مما يؤدي إلى بيئة خارجية ثابتة. هذا هو على النقيض من الأساليب ثقافة دفعة في البيئة الخارجية التي تتغير باستمرار ويتم تحديد معدل نمو الخلايا من خلال ا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Infors-HT Sixfors Chemostat	Appropriate Technical Resources, Inc.
Glass Bottle 9.5 L	Fisher Scientific	02-887-1	For Media Vessel and Hosing
Pinchcock	Fisher Scientific	05-867	For Media Vessel and Hosing
Stopper, Size 12, Green Neoprene	Cole-Palmer	EW-62991-42	For Media Vessel and Hosing
Straight Connector	Cole-Palmer	EW-30703-02	For Media Vessel and Hosing
General purpose ties 4 in	Fisher Scientific	NC9557052	For Media Vessel and Hosing
Tubing, Silicone Rubber	Small Parts	B000FMWTDE	For Media Vessel and Hosing
Tubing, Silicone, 3/8 in OD	Fisher Scientific	02-587-1Q	For Media Vessel and Hosing
Tubing, Silicone, 7/32 in OD	Fisher Scientific	02-587-1E	For Media Vessel and Hosing
Tubing, Stainless Steel, 3/16 in OD	McMaster-Carr	6100K164	For Media Vessel and Hosing
Tubing, Stainless Steel, 3/8 in OD	McMaster-Carr	6100K161	For Media Vessel and Hosing
Hook Connectors	Fisher Scientific	14-66-18Q	For Media Vessel and Hosing
Ratchet Clamp	Cole-Palmer	EW-06403-11	For Media Vessel and Hosing
Luer, Female	Cole-Palmer	EW-45512-34	For Media Vessel and Hosing
Luer, Male	Cole-Palmer	EW-45513-04	For Media Vessel and Hosing
Millipore Aervent MTGR05010 62 mm Filter, 0.2 μm	Fisher Scientific	MTGR05010	For Media Vessel and Hosing
PTFE Acrodisc CR 13 mm filters, 0.2 μm	Fisher Scientific	NC9131037	For Media Vessel and Hosing
Direct-Reading Flowtube for Air	Cole-Palmer	EW-32047-77	For Nitrogen Gas Setup
Direct-Reading Flowtube for Nitrogen	Cole-Palmer	EW-32048-63	For Nitrogen Gas Setup
Gas Proportioner Multitube Frames	Cole-Palmer	EW-03218-50	For Nitrogen Gas Setup
Regulator, Two-Stage Analytical	Airgas	Y12-N145D580	For Nitrogen Gas Setup
Hose Adaptor, Stainless Steel	Airgas	Y99-26450	For Nitrogen Gas Setup
Hose Male Adaptor	Airgas	WES544	For Nitrogen Gas Setup
Norprene Tubing	US Plastics	57280	For Nitrogen Gas Setup
Tripod Base	Cole-Palmer	EW-03218-58	For Nitrogen Gas Setup
Valve Cartridges	Cole-Palmer	EW-03217-92	For Nitrogen Gas Setup
Carboy 10 L	Fisher Scientific	02-963-2A	For Media Preperation
Steritop Sterile Vacuum Bottle-Top Filters, 1,000 ml, PES membrane; for 45 mm neck size	Fisher Scientific	SCGP-T10-RE	For Media Preperation
Media Bottle 100 ml, 45 mm neck size	Fisher Scientific	FB-800-100	For Media Preperation
calcium chloride·2H2O	Fisher Scientific	C79-500	Media Reagents
sodium chloride	Fisher Scientific	BP358-1	Media Reagents
magnesium sulfate·7H2O	Sigma Aldrich	230391	Media Reagents
potassium phosphate monobasic	Fisher Scientific	AC424205000	Media Reagents
ammonium sulfate	Fisher Scientific	AC423400010	Media Reagents
potassium chloride	Sigma Aldrich	P9541	Media Reagents
boric acid	Sigma Aldrich	B6768	Media Reagents
copper sulfate·5H2O	Sigma Aldrich	209198	Media Reagents
potassium iodide	Sigma Aldrich	60400	Media Reagents
ferric chloride·6H2O	Fisher Scientific	I88-100	Media Reagents
manganese sulfate·H2O	Sigma Aldrich	230391	Media Reagents
sodium molybdate·2H2O	Sigma Aldrich	M7634	Media Reagents
zinc sulfate·7H2O	Fisher Scientific	Z68-500	Media Reagents
biotin	Fisher Scientific	BP232-1	Media Reagents
calcium pantothenate	Fisher Scientific	AC24330-1000	Media Reagents
folic acid	Sigma Aldrich	F7876	Media Reagents
inositol (aka myo-inositol)	Fisher Scientific	AC12226-1000	Media Reagents
niacin (aka nicotinic acid)	Sigma Aldrich	N4126	Media Reagents
p-aminobenzoic acid	Fisher Scientific	AC14621-2500	Media Reagents
pyridoxine HCl	Sigma Aldrich	P9755	Media Reagents
riboflavin	Sigma Aldrich	R4500-25G	Media Reagents
thiamine HCl	Fisher Scientific	BP892-100	Media Reagents
Leucine	Sigma Aldrich	L8000-100G	Media Reagents
Uracil	Sigma Aldrich	U0750	Media Reagents
Dextrose	Fisher Scientific	DF0155-08-5	Media Reagents