JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نحن هنا نقدم بروتوكول لتجميع الرواية، وارتفاع تبلغ نسبة أبعادها biocomposites في ظل الظروف البيولوجية ووسائل الإعلام السائلة. وbiocomposites مقياس من نانومتر إلى ميكرومتر في القطر والطول، على التوالي. النانوية النحاس (CNPS) وكبريتات النحاس جنبا إلى جنب مع السيستين هي المكونات الرئيسية للالتوليف.

Abstract

والهدف من هذا البروتوكول هو وصف تركيب اثنين biocomposites جديدة مع هياكل ارتفاع نسبة الجانب. تتكون biocomposites من النحاس والسيستين، وإما النانوية النحاس (CNPS) أو كبريتات النحاس المساهمة عنصر معدني. ويتم تجميع في السائل تحت الظروف البيولوجية (37 ° C) وشكل المركبة الذاتي تجميعها بعد 24 ساعة. تشكلت مرة واحدة، هذه المركبات هي درجة عالية من الاستقرار في كل وسائل الإعلام السائلة وفي شكل المجففة. المركبة مقياس من النانوية لمجموعة الصغرى في الطول، ومن بضعة ميكرونات إلى 25 نانومتر في القطر. أظهر الانبعاثات مجال المجهر الإلكتروني مع التحليل الطيفي التشتت الطاقة الأشعة السينية (EDX) أن الكبريت كان حاضرا في هياكل خطية NP المشتقة، في حين أنه كان غائبا عن المواد CNP ابتداء، مما يؤكد سيستين كمصدر من الكبريت في nanocomposites النهائية . خلال توليف هذه النانوية والصغرى المركبة الخطية، مجموعة متنوعة من أطوال شارعيتم تشكيل uctures في السفينة التوليف. وقد تجلى صوتنة من الخليط السائل بعد التوليف للمساعدة في السيطرة على متوسط ​​حجم الهياكل التي كتبها تناقص متوسط ​​طول الوقت مع زيادة صوتنة. منذ البنى المتشكلة مستقرة للغاية، لا التكتل، وتتشكل في الطور السائل، ويمكن أيضا أن تستخدم الطرد المركزي للمساعدة في التركيز وعزل المركبات تشكيلها.

Introduction

Copper is a highly reactive metal that in the biological world is essential in some enzyme functions 1,2, but in higher concentrations is potently toxic including in the nanoparticulate form 3,4. Concern over copper toxicity has become more relevant as CNPs and other copper-based nanomaterials are utilized, due to the increased surface area/mass for nanostructures. Thus, even a small mass of copper, in nanoparticle form, could cause local toxicity due to its ability to penetrate the cell and be broken down into reactive forms. Some biological species can complex with and chelate metal ions, and even incorporate them into biological structures as has been described in marine mussels 5. In studying the potential toxic effects of nanomaterials 4, it was discovered that over time, and under biological conditions used for typical cell culturing (37 °C and 5% CO2), stable copper biocomposites could be formed with a high-aspect ratio (linear) structure.

By a process of elimination, the initial discovery of these linear biocomposites, which occurred in complete cell culture media, was simplified to a defined protocol of essential elements needed for the biocomposites to self-assemble. Self-assembly of two types of highly linear biocomposites was discovered to be possible with two starting metal components: 1) CNPs and 2) copper sulfate, with the common biological component being cystine. Although more complex, so called “urchin” and “nanoflower” type copper-containing structures with nanoscale and microscale features have been previously reported, these were produced under non-biological conditions, such as temperatures of 100 °C or greater 6-8. To our knowledge, synthesis of individual, linear copper-containing nanostructures that are scalable in liquid phase under biological conditions has not been previously described.

One of the starting materials utilized for synthesis of nanocomposites, namely CNPs, has been reported previously to be very toxic to cells 4. It has recently been reported that after the nanocomposites are formed, these structures are less toxic on a per mass basis than the starting NPs 9. Thus, the synthesis described here may be derived from a biological and biochemical reaction that has utility in stabilizing reactive copper species, both in the sense of transforming the NP form into larger structures and in producing composites less toxic to cells.

In contrast to many other nanomaterial forms which are known to aggregate or clump upon interaction with biological liquid media 10,11, once formed, the highly linear composites described here avoid aggregation, possibly due to a redistribution of charge which has been previously reported 9. As detailed in the current work, this avoidance of aggregation is convenient for the purposes of working with the structures once formed for at least 3 reasons: 1) composite structures once formed may be concentrated using centrifugation and then easily dispersed again using vortex mixing; 2) formed structures can be decreased in average size by sonication for different periods of time; and 3) the formed linear structures may provide an additional tool for avoiding the recently described “coffee ring effect” 12 and thus provide a dopant for creating more evenly distributed coatings of materials, especially those containing spherical particulates.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. التخطيط للتجارب

  1. تحديد حجم nanocomposites النحاس اللازمة لتخليق. على هذا الأساس، واختيار عدد من قوارير صغيرة الحجم (25 سم 2)، أو قوارير أكبر على النحو المبين أدناه في إعداد المواد.
  2. لهذا التوليف، استخدام 37 درجة مئوية مع حاضنة 5٪ CO 2 و 40٪ على الأقل الرطوبة. ضمان أن مثل حاضنة متاح، وأنه لن تكون منزعجة بشكل متكرر خلال الفترة من التوليف (حوالي 24 ساعة).
    تنبيه: افتتاح المتكررة وإغلاق الحاضنة بالتأكيد سوف يسبب التقلبات في درجات الحرارة مما قد يؤدي إلى تغير تركيب الهياكل بمركب متناهي في الصغر.

2. إعداد المواد

  1. إعداد جميع المواد الطازجة قبل بدء التجربة، وذلك بإضافة المواد الصلبة للمذيبات الحق قبل التوليف هو أن تبدأ. حفظ حلول المخزون من المواد السيستين والنحاس الانطلاق في السائل لزمن طويل بefore لا ينصح التجربة وربما يؤدي إلى نتائج متباينة. فتحت مرة واحدة من البائع، والحفاظ على المواد الأولية الجافة عن طريق لف الجزء العلوي من الحاويات مع parafilm.
    ملاحظة: يتم استخدام بروتوكول التالي كمثال لردود الفعل في 25 سم 2 خلية قارورة الثقافة باستخدام 7 ميكرولتر من السيستين، 6643 ميكرولتر من الماء المعقم، و 350 ميكرولتر من CNPS.
  2. إعداد 2 ملغ / مل حل النانوية النحاس وزنها عن طريق لا يقل عن 2 ملغ من CNPS. ارتداء قفازات المتاح خلال هذه الخطوة لمنع اتصال ممكن من CNPS مع الجلد. وضع النانوية في فارغة معقمة 16 مل قارورة زجاجية.
    1. إلى القارورة التي تحتوي على CNPS، إضافة الماء منزوع الأيونات معقمة في حجم مناسب لجعل 2 ملغ / مل حل ودوامة الحل لمدة 20 ثانية لتوفير تشتت الجسيمات النانوية قبل بدء التوليف (يوصى 1 مل على الأقل إجمالي حجم). لا تملأ أكثر من نصف الطريق قنينة بالماء وهذا سوف تمنع الاختلاط من قبل vortexing. CNPS فيلل يستقر بسرعة إلى قاع القارورة وسوف تظهر داكنة اللون (الرمادي إلى الأسود).
    2. يصوتن الحل CNP لمدة 17 دقيقة في RT لتوفير التشتت القصوى من CNPS قبل بداية التوليف. فحص دوري للتأكد من أن CNPS خلط المقرر أن صوتنة. بعد صوتنة ناجحة، CNPS تظل معلقة في حل لمدة 30 دقيقة على الأقل، وسوف يكون الحل داكنة اللون.
  3. تزن خارج كتلة كافية من السيستين لجعل الحل / مل 72.9 ملغ لتوليف. منذ سيستين ليست قابلة للذوبان في الماء مباشرة، ضع السيستين وزنه في سفينة وزنها التحجر.
    1. إلى وزنها عاء يحتوي سيستين، إضافة كمية كافية من عقيم، 1 M هيدروكسيد الصوديوم، بحيث سيستين يذوب تماما. على سبيل المثال، ويحل 7.29 ملغ من السيستين تماما في 100 ميكرولتر من 1 M هيدروكسيد الصوديوم، لجعل 72.9 ملغ / مل حل.
    2. للحفاظ على ظروف معقمة، تنفيذ هذه الخطوة في العقيمة الأنسجة تدفق الثقافة غطاء محرك السيارة.
      تنبيه: هيدروكسيد الصوديومفي 1 M التركيز هو الكاوية، وحتى ارتداء القفازات القابل للتصرف خلال هذه الخطوة لمنع الاتصال من المركز هيدروكسيد الصوديوم مع الجلد
  4. العمل في نسيج الثقافة العقيمة غطاء محرك السيارة، إضافة 7 ميكرولتر من سيستين مع 6643 ميكرولتر من الماء المعقم لتركيب قارورة معقمة أولا، واسمحوا احتضان لمدة 30 دقيقة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية مع غطاء القارورة تنفيس (فضفاضة) لتوفير فعالة الاختلاط. Resuspend و2 ملغ / مل حل CNP قبل vortexing لمدة 30 ثانية، منذ CNPS واستقروا بعد خطوة صوتنة.
    1. إضافة حلا كافيا CNP إلى قارورة التوليف (باستخدام تقنية معقمة) للحفاظ على نسب المكون التالي: الجمع بين 1 أجزاء سيستين، 50 أجزاء CNPS، و 949 أجزاء من الماء المعقم في 25 سم 2 خلية قارورة الثقافة لبدء عملية التجميع. على سبيل المثال، لحجم التوليف 7 مل، والجمع بين 7 ميكرولتر من محلول المخزون السيستين، و 350 ميكرولتر من CNPS، و6643 ميكرولتر من الماء المعقم. استبدال الغطاء على القارورة وتشديد بحيث يكون SECURه.
    2. بعد الجمع بين جميع المكونات لتركيب، مزيج برفق في قارورة من قبل يحوم 4-5 مرات. ضع قارورة في الحاضنة CO 2 وتنفيس القارورة من خلال تخفيف الغطاء بحيث يكون هناك تبادل الغازات داخل وخارج القارورة خلال التوليف.
  5. السماح التوليف لتشغيل في الحاضنة لمدة ما يقرب من 24 ساعة. خلال التوليف، يمكن للمرء أن يلاحظ، مع المجهر والعين، وتشكيل المركبة الخطية للغاية.
    ملاحظة: عملية تشكيل الهياكل قد يحدث فجأة، بمعنى أن الهياكل من الصعب في البداية للكشف، ثم ظهور العائدات بسرعة إلى الكثافة المتزايدة. ولذلك قد يحدث قبل تشكيل 24 ساعة. ويمكن أيضا ملاحظة هذه العملية عن طريق العين مرة واحدة تصبح هياكل أكبر ويزيد من كثافتها. بينما جيل من الهياكل يمكن ملاحظتها على مر الزمن تحت المجهر والعين في نقطة زمنية لاحقة، انقطاع مستمر للشروط التوليف ودرجة الحرارة سوف يؤدي إلى الفقراءالنتائج التوليف.
  6. إنهاء توليف biocomposites التي كتبها السد بإحكام القارورة تجميع وتخزين وعاء في الثلاجة (4 ° C). الهياكل، مرة واحدة ولدت، وتظل مستقرة في هذا النموذج لمدة سنة على الأقل. تسمية قارورة مع الظروف التوليف، بما في ذلك مكونات المستخدمة، تاريخ التوليف، وفترة حضانة من التوليف قبل الإنهاء.

3. تجميع عن طريق كبريتات النحاس

  1. تنفيذ التوليف التجميع الذاتي عن طريق استبدال CNPS مع كبريتات النحاس والملح. باستخدام تقنية معقمة، ويحل على الأقل 2 ملغ من كبريتات النحاس بكميات كافية من الماء منزوع الأيونات عقيمة لجعل 2 ملغ / مل حل. بلورات كبريتات النحاس تذهب بسهولة إلى حل في هذا التركيز، ولكن دوامة القارورة إذا لزم الأمر، وتفتيش من قبل العين لضمان تذاب كل البلورات.
  2. بعد إعداد كبريتات النحاس وتنفيذ التوليف كما هو موضح سابقا، ولكن استبدال CNPS مع كبريتات النحاس.
    ملاحظة: تم العثور على nanocomposites الذاتي تجميعها باستخدام كبريتات النحاس كمادة أولية ليكون أكثر اتساقا في شكل نهائي من لهياكل توليفها من CNPS.
  3. إنهاء تركيب biocomposites كبريتات النحاس بالنسبة للمركبات CNP (الخطوة 2.6) وتخزينها على المدى الطويل في 4 ° C.

4. توصيف والتعامل مع Biocomposites بعد التوليف

  1. تميز biocomposites المستمدة من CNPS ومن كبريتات النحاس التي كتبها الضوء الأبيض المجهر 9 والإلكترون المجهري 9.
    1. لتوصيف والتفتيش على biocomposites بعد التوليف عن طريق المجهر الضوئي الأبيض، واستخدام مجهر مقلوب كما المركبة سوف تستقر في السطح السفلي من القارورة في غضون بضع دقائق من وضع قارورة شقة، ويمكن بعد ذلك جلبت الى التركيز. استخدام الإعداد حقل مشرق على المجهر لتحقيق أقصى قدر من التناقض بين biocomposites والمتوسطة السائل. المركبات المشتقة من CNPS وشرطيفي كبريتات سوف يظهر كل منهما واضحا للمبهمة في اللون، ولكن سوف المجاميع CNP غير المتفاعل تظهر مظلمة جدا في اللون.
      1. استخدام كاميرا رقمية متصلة المجهر لالتقاط الصور من المركبة. وسيراعى مجموعة من أطوال لهياكل الفردية.
    2. لتوصيف والتفتيش على biocomposites بعد التوليف وبعد تخزين عند 4 درجات مئوية، والسماح قوارير أن يأتي إلى RT لمدة 15 دقيقة على الأقل كما قوارير سوف تكثف في البداية على إزالة من الثلاجة، والتي سوف تحجب فعالية التركيز أثناء تأدية التصوير المجهري. بعد السماح موازنة لRT، ومسح الأسطح العلوية والسفلية من القارورة مع منشفة ورقية نظيفة لتحقيق أقصى قدر من جودة التصوير المجهري.
    3. عند العمل مع أو التصوير المركبة التي تم تخزينها على المدى الطويل، دوامة القارورة لمدة 30 ثانية إلى فصل كتل من المواد المركبة التي تشكل أثناء وجوده في الثلاجة. بعد vortexing ل، وفحص الهياكل مع هيئة التصنيع العسكري مقلوبroscope لضمان أن المجاميع وفصلها، وكرر vortexing لالضرورة.
    4. استخدام مقلوب المجهر الضوئي الأبيض لتقييم فعالية تجميع لتجربة معينة باستخدام CNPS. على سبيل المثال، وتوثيق وجود أو عدم وجود المتفاعل CNPS في قوارير التوليف تستخدم لbiocomposites CNP المستمدة من قوارير مع معلمات مختلفة مثل الوقت من التوليف.
      ملاحظة: فردية CNPS صغيرة جدا أن نلاحظ مع المجهر الضوئي، ولكن غير المتفاعل CNP المجاميع سوف تظهر مستديرة الشكل والأشياء المظلمة، وعلى النقيض من توليفها بنجاح CNP-المركبة التي سيكون لها نسبة عالية الجانب، شكل خطي، و سيكون لديك مجموعة من أطوال مختلفة. تجنب إجراء توليف لفترة طويلة جدا لفترة من الوقت قبل إنهاء الخدمة، لأن هذا سيؤدي في تشعبت للغاية "قنفذ" الهياكل نوع، التي يصعب تفريق في الهياكل الفردية تشكلت مرة واحدة.
    5. استخدام مقلوب الضوء الأبيض المجهر لتقييم فعاليةمن التوليف لتجربة معينة باستخدام كبريتات النحاس. منذ كبريتات النحاس يذهب تماما في حل باستخدام هذا البروتوكول، فإن الحل يبدو أقل المظلم من الحل من التوليف باستخدام CNPS. توثيق حجم ومدى المركبة كبريتات النحاس من خلال مقارنة قوارير مع الظروف التوليف مختلفة مثل الوقت من التوليف قبل الإنهاء.
      ملاحظة: ستكون المركبة توليفها بنجاح تظهر مجموعة من أطوال مختلفة. تجنب إجراء توليف لفترة طويلة جدا لفترة من الوقت قبل إنهاء الخدمة، لأن هذا سيؤدي في المجاميع تشعبت للغاية من المواد المركبة، وبعضها سيكون "قنفذ مثل" في الهيكل، والتي يصعب تفريق في الهياكل الفردية تشكلت مرة واحدة .
  2. على التركيز biocomposites بعد التوليف، حلول أجهزة الطرد المركزي المركبة في أنبوب الطرد المركزي. إضافة 6 مل من أي هياكل CNP المشتقة أو الهياكل المستمدة من كبريتات النحاس لأنبوب الطرد المركزي 15 مل. أجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقةفي 500 x ج في RT لتشكيل بيليه. لأحجام أصغر، إضافة 500 ميكرولتر من الهياكل في حل إلى 0.6 مل أنابيب الحجم. أجهزة الطرد المركزي في 2000 x ج في RT لمدة 10 دقيقة على الأقل لتشكيل بيليه.
    1. بعد الطرد المركزي لمدة ما يكفي من الوقت (10 دقيقة على الأقل لmicrofuges)، حفظ بيليه يمكن ملاحظتها في الجزء السفلي من الأنبوب حيث تتركز الهياكل عن طريق إزالة بعناية السائل طاف فوق بيليه. ويبدو أن الهياكل Biocomposite المستمدة من كبريتات النحاس الأزرق في اللون والهياكل المستمدة من CNPS هي أكثر قتامة (الرمادي إلى الأسود).
    2. إضافة المزيد من المواد المركبة لهذا الأنبوب وتكرار هذه العملية في نفس أنبوب للتركيز هياكل إذا رغبت في ذلك. لتفريق الكريات المركزة، إضافة حجم المطلوب من حل للأنبوب، ودوامة لمدة 10-30 ثانية.
  3. هياكل يصوتن بمجرد تشكيلها، لنقل متوسط ​​حجم السكان (أطوال) من هياكل لخفض القيم. هياكل مكان في الماء منزوع الأيونات معقمة ويصوتن لفي LeAST 10 دقيقة. باستخدام هذه العملية، مع مرور الوقت، والهياكل تصبح مجزأة وأصغر في متوسط ​​طول (انظر الشكل 6 من النص). تغييرات الوثيقة في أحجام المركبة مع أوقات صوتنة مختلفة باستخدام الأبيض مقلوب المجهر الضوء والكاميرا الرقمية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

ويبين الشكل 1 تخطيطي تدفق الرسم البياني للخطوات تركيب لتشكيل biocomposites الخطية الموصوفة في هذا العمل. CNPS أو كبريتات النحاس عن بدء مواد وجنبا إلى جنب مع الماء المعقم لتشكيل 2 ملغ / مل حل، وهذا الحل هو مختلطة وsonicated لتوفير حتى الخليط، ثم يتم خلط هذا الحل النحاس في نس...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

أثناء تقييم الآثار السامة المحتملة للمواد متناهية الصغر بما في ذلك CNPS، لوحظ أن أكثر على المدى الطويل، تحولت CNPS من توزيع الجسيمات في البداية أكثر تشتتا ل، مجمعة أكبر (الشكل 2). في بعض الحالات، وهذه التشكيلات شديدة التجميع التي أنتجت في طبق زراعة الخلايا، في ظل...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors would like to acknowledge the technical assistance of Alfred Gunasekaran in electron microscopy studies at the Institute of Micromanufacturing at Louisiana Tech University, and Dr. Jim McNamara for assistance with additional microscopy studies. The work described was supported in part by Louisiana board of Regents PKSFI Contract No. LEQSF (2007-12)-ENH-PKSFI-PRS-04 and the James E. Wyche III Endowed Professorship from Louisiana Tech University (to M.D.).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Mini VortexerVWR (https://us.vwr.com)58816-121
CO2 Incubator Model # 2425-2VWR (https://us.vwr.com)Contact vendorCurrent model calalog # 98000-360
Eppendorf Centrifuge (Refrigerated Microcentrifuge)Labnet (http://labnetinternational.com/)C2500-RModel Prism R
Cell Culture Centrifuge Model Z323KLabnet (http://labnetinternational.com/)Contact vendorCurrent model Z206A catalog # C0206-A
Sonicator (Ultrasonic Cleaner)Branson Ultrasonics Corporation (http://www.bransonic.com/)1510R-MTH
BalanceSartorius (http://dataweigh.com)Model CP225D similar model CPA225D
Olympus IX51 Inverted Light MicroscopeOlympus (http://olympusamerica.comContact vendor
Olympus DP71 microscope digital cameraOlympus (http://olympusamerica.comContact vendor
external power supply unit - white light for Olympus microscopeOlympus (http://olympusamerica.comTH4-100
10X, 20X, and 40X microscope objectivesOlympus (http://olympusamerica.comContact vendor
Scanning Electron MicroscopeHitachi (http://hitachi-hitec.com/global/em/sem/sem_index.html)model S-4800
Transmission Electron MicroscopeZeiss (http://zeiss.com/microscopy/en_de/products.html)model Libra 120
Table Top Work Station Unidirectional Flow Clean BenchEnvirco (http://envirco-hvac.com)model PNG62675Used for sterile cell culture technique

References

  1. Klinman, J. P. The copper-enzyme family of dopamine beta-monooxygenase and peptidylglycine alpha-hydroxylating monooxygenase: resolving the chemical pathway for substrate hydroxylation. The Journal of biological chemistry. 281, 3013-3016 (2006).
  2. Uauy, R., Olivares, M., Gonzalez, M. Essentiality of copper in humans. The American journal of clinical nutrition. 67, 952S-959S (1998).
  3. Karlsson, H. L., Cronholm, P., Gustafsson, J., Copper Moller, L. oxide nanoparticles are highly toxic: a comparison between metal oxide nanoparticles and carbon nanotubes. Chemical research in toxicology. 21, 1726-1732 (2008).
  4. Parekh, G., et al. Layer-by-layer nanoencapsulation of camptothecin with improved activity. International journal of pharmaceutics. 465, 218-227 (2014).
  5. Harrington, M. J., Masic, A., Holten-Andersen, N., Waite, J. H., Fratzl, P. Iron-clad fibers: a metal-based biological strategy for hard flexible coatings. Science. 328, 216-220 (2010).
  6. Keyson, D., et al. CuO urchin-nanostructures synthesized from a domestic hydrothermal microwave method. Materials Research Bulletin. 43, 771-775 (2008).
  7. Liu, B., Zeng, H. C. Mesoscale organization of CuO nanoribbons: formation of 'dandelions'. J Am Chem Soc. 126, 8124-8125 (2004).
  8. Peng, M., et al. Controllable synthesis of self-assembled Cu2S nanostructures through a template-free polyol process for the degradation of organic pollutant under visible light. Materials Research Bulletin. 44, 1834-1841 (2009).
  9. Deodhar, S., Huckaby, J., Delahoussaye, M., DeCoster, M. A. High-Aspect Ratio Bio-Metallic Nanocomposites for Cellular Interactions. IOP Conference Series: Materials Science and Engineering. 64, 012014(2014).
  10. Montes-Burgos, I., et al. Characterisation of nanoparticle size and state prior to nanotoxicological studies. Journal of Nanoparticle Research. 12, 47-53 (2010).
  11. Wiogo, H. T., Lim, M., Bulmus, V., Yun, J., Amal, R. Stabilization of magnetic iron oxide nanoparticles in biological media by fetal bovine serum (FBS). Langmuir. 27, 843-850 (2011).
  12. Yunker, P. J., Still, T., Lohr, M. A., Yodh, A. G. Suppression of the coffee-ring effect by shape-dependent capillary interactions. Nature. 476, 308-311 (2011).
  13. Kahler, H., Lloyd Jr, B., Eden, M. Electron Microscopic and Other Studies on a Copper–Cystine Complex. The Journal of Physical Chemistry. 56, 768-770 (1952).
  14. Furia, E., Sindona, G. Complexation of L-cystine with metal cations. Journal of Chemical & Engineering Data. 55, 2985-2989 (2010).
  15. Hawkins, C., Perrin, D. Polynuclear Complex Formation. II. Copper (II) with Cystine and Related Ligands. Inorganic Chemistry. 2, 843-849 (1963).
  16. Hallman, P., Perrin, D., Watt, A. E. The computed distribution of copper (II) and zinc (II) ions among seventeen amino acids present in human blood plasma. Biochem. J. 121, 549-555 (1971).
  17. Jensen, L. S., Maurice, D. V. Influence of sulfur amino acids on copper toxicity in chicks. The Journal of nutrition. 109, 91-97 (1979).
  18. Lee, Y., Choi, J. R., Lee, K. J., Stott, N. E., Kim, D. Large-scale synthesis of copper nanoparticles by chemically controlled reduction for applications of inkjet-printed electronics. Nanotechnology. 19, 415604(2008).
  19. Hume, J., et al. Engineered coiled-coil protein microfibers. Biomacromolecules. 15, 3503-3510 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

101 nanocomposites biocomposites microcomposites

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved