متماثل Bihemispheric تشريح الدماغ قطع لدراسة الصحية والمرضية شروط الدماغ في البشر

Summary

Organized brain cutting procedures are necessary to correlate specific neuropsychiatric phenomena with definitive neuropathologic diagnoses. Brain cuttings are performed differently based on various clinico-academic contingencies. This protocol describes a symmetric bihemispheric brain cutting procedure to investigate hemispheric differences in human brain pathologies and to maximize current and future biomolecular/neuroimaging techniques.

Abstract

Neuropathologists، في بعض الأحيان، يشعر بالخوف من كمية المعرفة اللازمة لتوليد تشخيص نهائي للظواهر النفسية العصبية المعقدة وصفها في هؤلاء المرضى الذين تم طلب تشريح الدماغ. على الرغم من أن التقدم في العلوم الطبية الحيوية والتصوير العصبي أحدثت ثورة في مجال العصبية، فإنها قد ولدت أيضا فكرة مضللة أن تشريح الدماغ ليس لها سوى قيمة مؤكد. خلقت هذه الفكرة خاطئة انخفاض حاد لأسعار التشريح، وبالتالي خفض احتمال أن تؤدي التحقيقات عصبية مرضية أكثر تفصيلا واسعة النطاق، والتي تعتبر ضرورية لفهم العديد من الجوانب الطبيعية والمرضية غير معروف حتى الآن من الدماغ البشري. استمر طريقة استنتاجي التقليدي للعلاقة بين الظواهر النفسية العصبية الملاحظة والمقابلة التعريب / توصيف يرتبط neurohistological المحتملة أن يكون هناك قيمة لا يمكن إنكارها. في سياق neuropsychiالأمراض atric، وطريقة إكلينيكية التقليدي لا يزال هو أفضل منهجية ممكنة (وغالبا ما تكون متاحة فقط) لربط ملامح العصبية والنفسية فريدة من نوعها لركائز عصبية مرضية يناظرها، نظرا لأنه يعتمد بشكل خاص على التقييم المادي المباشر من أنسجة المخ. ويستند تقييم العقول بعد الوفاة على الدماغ قطع الإجراءات التي تختلف باختلاف المراكز العصبية المختلفة. يتم تنفيذ العقل الدماغ بطريقة واسعة نسبيا ومنتظمة على أساس مختلف الحالات الطارئة السريرية والأكاديمية الموجودة في كل مؤسسة. ينبغي على الأقل أن تستخدم منهجية قطع الدماغ شاملة ومتماثل أكثر تشريحيا ثنائية في نصف الكرة الأرضية لأغراض البحث في أمراض الأعصاب الإنسان للتحقيق متماسك، في العمق، والظروف الطبيعية والمرضية مع خصوصيات الدماغ البشري (أي تخصص في نصف الكرة الغربي وlateralization لمحددة وظائف). مثل هذا الأسلوب من شأنه أن يوفر كولي أكثر شمولاction من العقول neuropathologically جيدا اتسم المتاحة لتقنيات التكنولوجيا الحيوية وتصوير الأعصاب الحالية والمستقبلية. نحن تصف ثنائية في نصف الكرة الغربي عملية القطع الدماغ متماثل للتحقيق في الخلافات نصف الكرة الغربي في أمراض الدماغ وللاستخدام مع التيار وكذلك التقنيات الجزيئية البيولوجية / تصوير الأعصاب في المستقبل.

Introduction

Neuropathologists لديها امتياز العلمي والشرف الفكري، والتزام التشخيص لتقييم العقول البشرية. لعقود عديدة، والأوصاف السريرية مفصلة لأمراض الدماغ وبذل جهود كبيرة لindividuate تم اتخاذ الممكنة يرتبط neurohistological في أدمغة بعد الوفاة الإنسان. تاريخيا، مثلت تلك الجهود طريقة مثمرة للغاية التي والعلوم الطبية، وعلم الأعصاب على وجه الخصوص، تقدمت في العصر الحديث. بفضل neuropathologists السابق البارزين وتفانيهم والعزيمة، والمنح الدراسية، وقدرة مذهلة على التمييز بين أنسجة المخ العادية وغير العادية (في كثير من الأحيان باستخدام أدوات اولى جدا)، يمكننا الآن التحقيق والأمراض المستهدفة مثل مرض الزهايمر-Perusini في (ظلما دعا فقط الزهايمر المرض؛ الهادئ / م) ^1، ومرض باركنسون (PD) ^2، مرض كروتزفيلد جاكوب (البقر) ^3، ومرض لو جيهريج-/ الضموري العضلي الجانبي Sclerosiالصورة (ALS) ^4، وغوام المرض ^5، على سبيل المثال لا الحصر.

التقنيات المتقدمة لتصوير الأعصاب، مثل عالية الوضوح محوسب التصوير المقطعي (أي دوامة multisection الاشعة المقطعية، CT تصوير الأوعية) والوظيفية والمورفولوجية التصوير بالرنين المغناطيسي (أي الرنين المغناطيسي الوظيفي، نشر، التصوير بالرنين المغناطيسي، tractography-التصوير بالرنين المغناطيسي، وما إلى ذلك)، التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) والتصوير القائم على الموجات فوق الصوتية، وغيرها، وعدلت بالتأكيد نهجنا العام على كيفية تشخيص وعلاج مرضى الأعصاب والطب النفسي. ومع ذلك، على الرغم من أن تقنيات التصوير العصبي قادرة على تصور دماغ الشخص عندما قيد الحياة، وأنها لا تتيح الفرصة، في لحظة حدوث لتحليل مباشرة الهياكل الخلوية والتحت خلوية معقدة للغاية من الخلايا، مثل الخلايا العصبية. أو تصور، علامة، وتحديد أنواع معينة من الآفات داخل الخلايا. أو للإشارة على وجه التحديد توطين لهم تشريحي عصبي أو دون الإقليمي في circuital والفرعيةمستويات تشريحية circuital. على سبيل المثال، يمكن أن تقنيات التصوير العصبي لا تحدد أو توطين الهيئات ليوي (LB) في الخلايا العصبية الصباغية من المادة السوداء (SN)، وهي سمة مرضية مشتركة المرتبطة PD، أو التشابك الليفي العصبي (NFT) في القشرة المخية الأنفية الداخلية، وهي سمة تقليدية من AD و أمراض أخرى من الدماغ. التحقيقات عصبية مرضية جنبا إلى جنب مع المجهر الرقمية المتقدمة لا تزال لا يمكن استبداله لالارتباط إكلينيكية تفصيلا، وبالتالي، إلى تشخيص نهائي.

نظرا لخصائص غريبة-anatomo الوظيفي للدماغ الإنسان، وخاصة لتوطين تشريحي لها (وهذا هو، داخل الجمجمة، ونظام الحماية الطبيعية التي لا تسمح الفحص المباشر لمحتواه)، وإدخال تقنيات التصوير العصبي في الجسم الحي يكون الأطباء والمحققين ساعد بشكل غير عادي للعثور على إجابات أولية لبعض من أسرار هذا النسيج المعقد. ومع ذلك، لا يوجد السريرية أو neuroimagiمنهجية نانوغرام يمكن ان تحل محل فرصة فريدة لتحليل مباشرة أنسجة المخ أثناء تشريح الجثة. فقط مجموعة منظمة، المحافظة، وتصنيف العقول البشرية يمكن أن تسمح التحقيقات المباشرة والمنتظمة من الخلايا العصبية والخلايا غير العصبية، ناخبيهم التحت خلوية، داخل والآفات المرضية خارج الخلية، وأي نوع من الشذوذ داخل المخ لتأكيد أو تعديل، أو إعادة تعريف التشخيصات السريرية واكتشاف علاقات الارتباط إكلينيكية جديدة. كان واحدا من قيود واضحة بشأن تقييم المخ في تشريح الجثة أن هذا الإجراء هو منهجية مستعرضة. سيكون هناك دائما تأخير بين عملية مستمرة عصبية مرضية (يتجلى سريريا أو لا)، والفرصة، إن وجدت، لتحديد ذلك على مستوى neurohistological. ويرجع ذلك أساسا إلى عدم قدرة العقل البشري على تجديد نفسها هذا. فمن غير الممكن حاليا للحصول على أنسجة المخ في الجسم الحي دون خلق بيالضرر rmanent. ونتيجة لذلك، فإنه ليس من الممكن تقييم طوليا وneuropathologically نفس الدماغ / شخص. ومع ذلك، يمكن أن الإجراءات المصرفية الدماغ موحدة وزيادة الوعي للتبرع الدماغ لدى عامة الجمهور تسهم إلى حد كبير في حل القضايا توقيت التشريح في الدماغ عن طريق زيادة باستمرار عدد من الحالات لجمع وتحليل. بهذه الطريقة، يمكن الحصول على أرقام أكثر ملائمة للدماغ بعد الوفاة لتحديد أنماط ثابتة من أصل المرضية والتقدم لكل نوع محدد من آفة الدماغ المرتبطة بكل مرض في الدماغ البشري. وهذا يتطلب التبرع وجمع أكبر عدد ممكن من العقول ممكن من المرضى تتأثر بأي اضطراب العصبية، وكذلك من الأصحاء في جميع الأعمار. واحد وسيلة ممكنة يمكن جمع أكبر عدد ممكن من العقول بعد الوفاة ممكن من المراكز الطبية العامة والمتخصصة كخطوة روتينية القياسية. وقد أعربت عن الحاجة للتبرع الدماغ مؤخرامن قبل أولئك الذين يدرسون الخرف والشيخوخة العادية ^6. ينبغي التعبير عن نفسها الضرورة مجال العصبية ككل.

لما تقدم ولأسباب أخرى، استكمالا للإجراءات قطع الدماغ الجارية ضروري. وعلاوة على ذلك، الدماغ قطع الإجراءات التي ينبغي أن تكون موحدة عالميا عبر مراكز البحوث العصبية المختلفة في جميع أنحاء العالم، مع الأخذ أيضا في الاعتبار إمكانية استخدام تقنيات التكنولوجيا الحيوية الحالية والمستقبلية لتحقيق أفضل، ونأمل، ولكي نفهم بشكل نهائي، لأسباب وآليات أمراض الدماغ في البشر.

هنا، أساسا لأغراض البحث، ونحن تصف منهجية متماثل للدماغ بعد الوفاة قطع في البشر. يقترح هذا الإجراء جمع أكثر المناطق الدماغية من القيام به بشكل طبيعي ومن كل من نصفي الكرة المخية والمخيخ. وهناك إجراءات ثنائية في نصف الكرة الغربي القطع الدماغ متماثل تناسب أفضل بكثير مع معرفتنا الحالية البشريةالتشريح، الكيمياء العصبية، وعلم وظائف الأعصاب. كما يسمح هذا الأسلوب إمكانية تحليل neuropathologically ميزات فريدة من الدماغ البشري، مثل التخصص في نصف الكرة الغربي وlateralization التي ترتبط مع الوظائف المعرفية وغير المعرفية العليا عادة أو حصرا موجودة في جنسنا البشري. إذا كانت هناك علاقات إمراضي محددة بين نصف الكرة الغربي التخصص / lateralization وأنواع معينة من آفات الدماغ، أو ما إذا كان غريبا حدث إمراضي العصبية هو في البداية، سائد، أو يرتبط حصرا مع نصف الكرة محددة وليس من المعروف الوظيفة في الوقت الحالي. واصفا هذا الإجراء قطع الدماغ متماثل، ونحن نهدف إلى اقتراح طريقة محدثة من تشريح الدماغ البشري الذي يمكن أن يساعد على فهم أفضل الظروف الطبيعية والمرضية في الأنسجة المتخصصة للغاية، والدماغ. يأخذ هذا الأسلوب أيضا بعين الاعتبار تلك الجوانب نصف الكرة مورفو الفنية التي لا توجد إلا في البشر.

Protocol

وقد تم استعراض الإجراءات التي تنطوي على الأنسجة البشرية بعد الوفاة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية ويعفى تحت 45 CFR (قانون اللوائح الفيدرالية).

ملاحظة: يصف بروتوكول لbihemispheric عملية القطع الدماغ متماثل لتقييم الدماغ بعد الوفاة وضع اللمسات الأخيرة للدراسات عصبية مرضية في البشر. سيتم استبعاد وصفا تفصيليا للأجهزة والأدوات والمواد والمستلزمات الضرورية لأداء القطع الدماغ البشري. ويتم اختيار المواد والإمدادات اللازمة لتشريح الدماغ في السلطة التقديرية للمحقق واحد وتقوم على أدوات التشريح يسمح أو وافق على كل مؤسسة بحثية. وصفت مجموعة صغيرة من الأدوات والمواد اللازمة لهذا الإجراء في جدول المواد / المعدات. إجراءات قطع محددة والاحتياطات للاشتباه في أمراض الدماغ المعدية، مثل البقر البشري، خارج أهداف هذه المخطوطة، وهي متاحة من مصادر أخرى ^(7).

1. متماثل بيقطع المخ في نصف الكرة الغربي

ملاحظة: تأكد من أن الدماغ تلقت تثبيت الأنسجة الضرورية (باستخدام، على سبيل المثال، 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة) لفترة من أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع، اعتمادا على periagonal، التمثيل الغذائي (أي، ودرجة الحموضة)، والأنسجة المحافظة ( أي درجة الحرارة) الظروف. ومع ذلك، لدراسات الترابط التصوير علم الأمراض، وهي فترة أطول من التثبيت (> 5.4 أسابيع) وقد اقترح ^8.

1. وضع الدماغ على سطح مستو التي تواجه المحقق، مع أقطاب الأمامية موجهة في الاتجاه المعاكس فيما يتعلق محقق.
2. وضع الدماغ في مثل هذه الطريقة إلى السماح لتصور كامل وواضح من كل التلافيف القشرية والأتلام كامل المخ (الشكل 1A).
3. نظرة أولى على الشذوذ السحائية، عدم التماثل في نصف الكرة الأرضية التي ترى بالعين المجردة (المؤشرات المحتملة من التنسيق، فصي، أو الظواهر في نصف الكرة الأرضية معممة من ضمور)، آفات tissutal العيانية (أي tumoالتمرير أو فتق)، التشوهات الخلقية، تشوهات السفينة، وأي تشوهات أخرى محتملة أو عروض غير عادية من سطح المخ.
   ملاحظة: للحصول على أوصاف مفصلة حول كيفية تقييم المخ البشري، والرجوع إلى الكتب المدرسية الأعصاب المتاحة تجاريا وأدلة التشريح ^9،10.

2. بروتوكول تسلسل

1. مواجهة القطبين الأمامية بعيدا عن المحقق، مع الجوانب السطحية من نصفي الكرة الأرضية (الدماغ الانتهائي) التي تواجه المحقق. كما أخذ العديد من الصور الرقمية عند الضرورة في كل حالة على حدة لتوثيق الممكنة-شذوذ الكلية ولحساب الممكنة الاعتبارات تشريحي عصبي-اكلينيكية وبعد القطع. ومساعد باحث التقاط صور فوتوغرافية رقمية عموديا إلى الدماغ لالتقاط سطح القشرية بأكمله (الشكل 1A - ج).
2. ما قبل الأقسام والتلافيف القشرية التالية للتلم المركزي باستخدام الحبر أو الإبر الملونة قبل قطع الدماغ (الشكل 1B ).
   ملاحظة: هذا الإجراء يسهل اعتراف فوري للمحرك والقشور الأولية الحسية الجسدية بعد القطع.
3. تناوب المخ بنسبة 180 درجة في حين ابقائها تواجه نفس الاتجاه (أي أقطاب الأمامية التي تواجه بعيدا عن المحقق). تفتيش دقيق لقاعدة الدماغ. تولي اهتماما خاصا لأوضاع أنظمة الدماغية (أي الشرايين قاعدية والعمود الفقري ودائرة ويليس) والأعصاب القحفية في الدماغ مستويات الخروج / دخولهم. إدارة بصيلات الشم ومساحات مع عناية خاصة لتجنب تمزق tissutal، بسبب هشاشة المدقع الذي تعانيه.
   1. كما أخذ العديد من الصور الرقمية عند الضرورة في كل حالة على حدة لتوثيق الممكنة-شذوذ الكلية ولحساب الممكنة الاعتبارات تشريحي عصبي-اكلينيكية وبعد القطع. لديك مساعد أبحاث التقاط صور فوتوغرافية رقمية عموديا إلى الدماغ لالتقاط مجمل السطوح القشرية والدماغ.
4. تواجه قاعدة الدماغ واستخدام مشرط، وقطع عرضيا الدماغ على مستوى الجزء العلوي من الجسر (في أقرب وقت ممكن إلى قاعدة المخ). فحص دقيق لSN (أي لشحوب) ¹¹ والهياكل المجاورة الأخرى ^12. يحيط علما، ربما باستخدام جهاز تسجيل الصوت من أي مظهر غير عادي في الدماغ مقارنة مع الدماغ العادي ^13.
5. تدوير مرة أخرى في الدماغ بنسبة 180 درجة، وباستخدام سكين حاد، وفصل نصفي الكرة الأرضية عن طريق خفض الجسم الثفني مركزيا من خلال الشق الطولي وسطي وبعد اتجاه الجبهي القذالي. تفقد كل جانب من كل نصف الكرة للشذوذ ممكنة (على سبيل المثال، التوسعات البطين، والتشوهات، وتليين الأنسجة، والأورام، وما إلى ذلك) ^(13). انظر الشكل 2A.
   1. كما أخذ العديد من الصور الرقمية عند الضرورة في كل حالة على حدة لتوثيق الممكنة-الشذوذ الكلي ولحساب الممكنة الاعتبارات تشريحي عصبي-اكلينيكية وبعد القطع. لديك مساعد أبحاث التقاط صور فوتوغرافية رقمية عموديا إلى الدماغ لالتقاط سطح القشرية بأكمله. يحيط علما أي ميزة غير عادية في الدماغ مقارنة مع الدماغ العادي.
6. وضع نصفي الكرة الأرضية مسطحة، والكذب على جوانبها وسطي، مع الفص الجبهي التي تواجه بعيدا عن المحقق، كما هو مبين في الشكل 2B. وضعها في مثل هذه الطريقة التي مراكزها تاتش (كما في حالة عدم التماثل في نصف الكرة الغربي ملحوظ).
7. باستخدام سكين حاد، وقطع يدويا من خلال كل من نصفي الكرة المخية، بدءا من أقطاب الأمامية وتتحرك باتجاه القطبين القفوية من خلال طول نصفي الكرة الأرضية. الحصول على سلسلتين من 1 سم كتل سميكة من أنسجة المخ (حوالي 18 ألواح لكل نصف الكرة الأرضية).
8. وضع ألواح الدماغ في (الاتجاه الجبهي القذالي) تسلسل نظمت تشريحيا على سطح مستو منفصل. استخدام المعال الأبيضم مع حاكم المطبوعة على ذلك لتباين أفضل عند تصوير. عرض سلسلة اثنين من ألواح الدماغية بطريقة متماثلة تشريحيا (الاتجاه الجبهي القذالي)، والتأكد من أن سطوحها الاكليلية هي لفحص العين المباشر والتصوير الرقمي (الشكل 3A) مرئية. استخدام قطع الأسطح مع شبكات وذكية المطبوعة على كلا الجانبين لتوطين هياكل الدماغ، والأحجام، والتشوهات المحتملة بطريقة أكثر دقة.
   1. كما أخذ العديد من الصور الرقمية عند الضرورة في كل حالة على حدة لتوثيق الممكنة-شذوذ الكلية ولحساب الممكنة الاعتبارات تشريحي عصبي-اكلينيكية وبعد القطع. لديك مساعد أبحاث التقاط صور فوتوغرافية رقمية عموديا إلى الدماغ لالتقاط سطح القشرية بأكمله. تدوين الملاحظات (ويمكن استخدام جهاز مسجل الصوت)، من أي جانب غير عادي في الدماغ مقارنة مع الدماغ العادي.
9. باستخدام مشرط حاد، يدويا تشريح كتل مستطيلة صغيرة منأنسجة المخ لكل المنطقة الدماغية المعمول بها. اتبع الدماغي مخطط جمع المنطقة المقترحة هو موضح في الجدول رقم 1.
   1. وضع كل كتلة الأنسجة في histocassettes صفها كل على حدة.
      ملاحظة: كل كتلة من نسيج المخ يحتاج إلى قطع لتناسب، قدر الإمكان، وhistocassette معيار حجم أقصى (30 × 20 × 4 مم ^3).
   2. تسمية histocassettes باستخدام رمز تحديد دي لكل حالة وباستخدام معرفات تشريحي عصبي محددة (لا تستخدم الرسائل العشوائية أو أرقام لأدمغة مختلفة، بل دائما استخدام أسماء التشريحية أو الأرقام المقابلة نفسها الإقليمي، كما هو مبين في الجدول رقم 1). خلق رموز تحديد دي، على سبيل المثال، عن طريق توليد أرقام عشوائية أو شبه عشوائية لكل حالة (أي، بي آر سي 130، حيث يبقى ب لالدماغ، R يبقى للموارد، C يبقى للمركز و 130 هو الانضمام التدريجي أو AD160001، حيث يقف م ل "دراسة مرض الزهايمر،" 16 هوالعام عندما تم إجراء تشريح الجثة (2016)، و0001 وانضمام عدد العينة التدريجي).
      ملاحظة: هذه الخطوة هي مفيدة جدا للباحثين في المستقبل؛ الحفاظ على أسطورة، وتحديد نصف الكرة الأرضية (L = نصف الكرة المخية الأيسر، R = الصحيحة نصف الكرة الأرضية). استخدام اثنين من ألوان مختلفة من histocassettes، ووضع لون محدد لكل نصف الكرة الغربي.
   3. كما أخذ العديد من الصور الرقمية عند الضرورة في كل حالة على حدة لتوثيق macroanomalies ممكن ولحساب الممكنة الاعتبارات تشريحي عصبي-اكلينيكية وبعد القطع. لديك مساعد أبحاث التقاط صور فوتوغرافية رقمية عموديا إلى الدماغ لالتقاط سطح القشرية بأكمله. يحيط علما أي ميزة غير عادية في الدماغ مقارنة مع الدماغ العادي.
10. التقاط الصور الرقمية (ما يصل عند الحاجة أو الرغبة) لخفض الدماغ بأكمله و histocassettes المرتبطة بها.
11. لكمة (على سبيل المثال، عن طريق المركز الثقافي للكمة) قطع صغيرة من الأنسجة لاستخراج الحمض النووي وتحاليل وراثية. استعماللكمة من 2-5 ملم في القطر.
    ملاحظة: للحصول على محتوى عال من المواد الجينومية، والمخيخ هو الخيار المفضل. ومع ذلك، فإن أي منطقة أخرى على ما يرام.
12. إعادة تزج كل histocassettes تحتوي على كتل أنسجة المخ في نفس النوع من الحل تثبيتي (على سبيل المثال، 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة) كما كانت تستخدم في السابق حتى الخطوة التالية من معالجة الأنسجة.
13. اتبع الإجراءات القياسية لالثابتة الفورمالين معالجة الأنسجة البشرية ^14.

3. منهج خاص: المتردد المجمدة والثابتة متماثل Bihemispheric قطع

ملاحظة: متماثل bihemispheric بروتوكول القطع الدماغ هو موضح في القسم 2 توفر إمكانية قطع ألواح من أنسجة أدمغة غير المثبتة، طازجة (عند توفرها) في نفس بطريقة منتظمة ومتماثلة.

1. وضع الدماغ جديدة بالكامل رأسا على عقب (ويفضل أن يكون على سطح البلاستيك وعاء يشبه semispherical) عن 8-10 دقيقة في الثلاجة -80 درجة مئوية إلى تصلب أنسجة المخ withouر إثارة الضرر الكيمياء الحيوية وتسهيل التقطيع اليدوي.
2. باستخدام سكين حاد، وقطع كل من نصفي الكرة الأرضية في بديل وبطريقة متتالية، بعد بروتوكول القطع الدماغ هو موضح في القسم 2، ولكن تجميد وإصلاح كل لوح آخر (من نصفي الكرة الأرضية وعلى طول اتجاه التشريحية-الجبهي القذالي).
   1. في هذه المرحلة، لا في محاولة لقطع كل المنطقة الدماغية، كما هو موضح في الجدول رقم 1. قطع مناطق الدماغ جديدة محددة فقط إذا لزم الأمر لRNA فوري أو استخراج البروتين (أي للدراسات الجينية أو البروتين) ^15.
3. بعد القطع، وتجمد على الفور، والتسمية، وعدد كل أنسجة جديدة. التقاط الصور الرقمية من سلسلة لوح بأكملها؛ حزمة كل بلاطة في كيس من البلاستيك واحدة؛ جمع الألواح في، عاء منفصل في الدماغ واحد فقط. وتخزين الحاويات في مخصص الفريزر -80 درجة مئوية.
   ملاحظة: يجب أن تكرس الفريزر لأنسجة الدماغ البشري فقط. في وقت لاحق فقط وسوف يغنيأن تقطع جنيه المناطق المجمدة الدماغ كما هو مطلوب لكل تجربة محددة.
4. تزج كل لوح الأنسجة الأخرى المختارة للتثبيت (10٪ مخزنة الفورمالين محايدة أو مثبت أخرى) في أكياس منفصلة تحتوي على كمية كافية من تثبيتي (3/1 حجم نسبة تثبيتي / الأنسجة كتلة). تسمية كل حقيبة عن طريق ترقيمها على التوالي بعد سلسلة الجبهي القذالي. ختم كل حقيبة، والتقاط الصور الرقمية، وتخزينها في وعاء من البلاستيك.
5. فتح أكياس تحتوي على تثبيتي بعد 2 أسابيع من تثبيت الأنسجة وقطع كل المنطقة الدماغية كما هو موضح في الجدول رقم 1.

4. Histostain والمناعية

ملاحظة: مجموعة من المناطق الدماغية لقص بناء على الخطة المقترحة (الجدول 1) كافية لتلبية المعايير المرضية معظم، إن لم يكن كلها، على أساس توافق في الآراء وضعها الآن ^لل16 م، PD ^17، الخرف مع الهيئات ليوي (DLB) ^18، الخرف الجبهي الصدغي (الخرف الجبهي الصدغي / الفرقة المتعددة الجنسيات) 19، التقدمي Suprabulbar الدماغي (PSP) ^20، متعددة نظام ضمور (MSA) ^21، المزمن إصابات الدماغي (كوت) ^22، الخ.

1. لكل منطقة في الدماغ ولكل من نصفي الكرة الأرضية، نفذ مجموعة الحد الأدنى التالية من histostains: الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E)، البنفسجي الكريزيل (السيرة الذاتية، وإذا تم التخطيط الدراسات المورفولوجية الكمية، على سبيل المثال)، والفضة تلطيخ (إذا التحليلات "استكشافية" ل بحاجة).
2. لكل منطقة في الدماغ ولكل من نصفي الكرة الأرضية، نفذ مجموعة الأدنى التالي من بروتوكولات المناعية: بيتا -amyloid (β أ)، فسفرته-تاو (pTau)، فسفرته α-synuclein (pα-اصطناعي)، وفسفرته-TDP43 (pTDP43) ، كما هو موضح ^14.
   ملاحظة: العدد الإجمالي للأقسام الأنسجة من أجل تقييم كل الدماغ بعد هذا البروتوكول هو 46 (إذا كانت جميع المناطق الدماغية من نصفي الكرة الأرضية المتاحة).

النتائج

Protocol Length

The time spent for a single symmetric bihemispheric fixed brain cutting procedure is estimated at 1 h (excluding the time spent setting up the dissection table, tools, and cutting surfaces; labeling; etc.). The time required for a single symmetric bi-hemispheric alternating frozen and fixed brain cutting procedure is estimated to take 2 h. It can take at least between 4 - 6 weeks to obtain definitive histol...

Discussion

This brain cutting method can be adapted to the specific needs of each neuropathology lab (for example, by reducing the number of cerebral regions to assess for each hemisphere) while still retaining the bihemispheric symmetric cutting procedure as one of its main features. This proposed protocol could be used for routine procedures (research-oriented neuropathological centers) or only when necessary (specific clinically oriented studies). It can be selectively used only for specific types of investigations (i.e.,

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use.
Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs.
Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required.
Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales.
Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed.
Histology Container	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64233-24
Histology Cassettes	VWR	18000-142 (orange)
Histology Cassettes	VWR	18000-132 (navy)
Knife Handles and Disposable Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62560-04
Long Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62561-20
Disposable Blade Knife Handles	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72040-08
Scalpel Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72049-22
Accu-Punch 2 mm	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	69038-02
Polystyrene Containers – Sterile	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64240-12
Dissecting Board	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	63307-30
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128 SIGMA
Hematoxylin Solution, Gill No. 2	Sigma-Aldrich	GHS280 SIGMA
Eosin Y solution, aqueous	Sigma-Aldrich	HT1102128 SIGMA
anti-beta-amyloid	Covance, Princeton, NJ	SIG-39220	1:500
anti-tau	Thermo Fisher Scientific	MN1020	1:500
anti-alpha-synuclein	Abcam	ab27766	1:500
anti-phospho-TDP43	Cosmo Bio Co.	TIP-PTD-P02	1:2000
Digital Camera	Any
Head Impulse Sealing machine	Grainger	5ZZ35