Simétrica bihemisférica post-mortem del cerebro de corte para estudiar sana y patológica condiciones cerebrales en humanos

Resumen

Procedimientos de corte cerebrales organizados son necesarios para correlacionar fenómenos neuropsiquiátricos específicos con diagnósticos neuropatológicos definitivas. esquejes cerebrales se realizan de manera diferente en base a diversas contingencias clínico-académica. Este protocolo describe un procedimiento de corte cerebro bihemisférica simétrica para investigar las diferencias hemisféricas en patologías del cerebro humano y para maximizar las técnicas biomoleculares / neuroimagen actuales y futuras.

Resumen

Neuropatólogos, a veces, se sienten intimidados por la cantidad de conocimiento necesario para generar diagnósticos definitivos para los fenómenos neuropsiquiátricos complejos descritos en aquellos pacientes en los que se ha solicitado una autopsia del cerebro. A pesar de los avances de las ciencias biomédicas y de neuroimagen han revolucionado el campo de los trastornos neuropsiquiátricos, que también han generado la idea errónea de que las autopsias cerebrales sólo tienen un valor de confirmación. Esta falsa idea creado una reducción drástica de las tasas de autopsia y, en consecuencia, una posibilidad reducida para realizar investigaciones más detalladas neuropatológicos y amplios, que son necesarios para comprender numerosos aspectos normales y patológicas todavía desconocidas del cerebro humano. El método de estimación tradicionales de correlación entre los fenómenos observados y neuropsiquiátricos correspondiente localización / caracterización de sus posibles correlatos neurohistológicos sigue teniendo un valor innegable. En el contexto de neuropsychienfermedades psi-, el método clínico-patológica tradicional sigue siendo la mejor metodología posible (ya menudo la única disponible) para enlazar características neuropsiquiátricas únicas para sus substratos neuropatológicos correspondientes, ya que se basa específicamente en la evaluación física directa de los tejidos del cerebro. La evaluación de cerebros postmortem del cerebro se basa en procedimientos que varían entre los diferentes centros de neuropatología corte. esquejes cerebrales se llevan a cabo de una forma relativamente extensa y sistemática sobre la base de las diversas contingencias clínicos y académicos presentes en cada institución. Una metodología de corte cerebro bihemisférica anatómicamente más inclusiva y simétrica al menos debería ser utilizado con fines de investigación en neuropatología humana para investigar de manera coherente, en profundidad, en condiciones normales como patológicas con las peculiaridades del cerebro humano (es decir, la especialización hemisférica y lateralización de concreto funciones). Tal método proporcionaría un Colle más completacción de cerebros neuropathologically bien caracterizados disponibles para las técnicas biotecnológicas y de neuroimagen actuales y futuras. Se describe un procedimiento de corte cerebro bihemisférica simétrica para la investigación de las diferencias hemisféricas en patologías del cerebro humano y para uso con actuales, así como las técnicas biomoleculares / neuroimagen futuras.

Introducción

Neuropatólogos tienen el privilegio científica, el honor intelectual, y la obligación de diagnóstico para evaluar los cerebros humanos. Durante muchas décadas, las descripciones clínicas detalladas de las enfermedades del cerebro y los grandes esfuerzos Individuar han llevado a cabo sus posibles correlatos neurohistológicos en cerebros postmortem humanos. Históricamente, estos esfuerzos representan la modalidad más productiva mediante el cual las ciencias médicas y la neurología, en particular, avanzaron en la era moderna. Gracias a neuropatólogos anteriores eminentes y su dedicación, determinación, becas y sorprendente capacidad para discriminar entre los tejidos normales y anormales del cerebro (a menudo utilizando herramientas muy rudimentarias), que ahora puede investigar y enfermedades objetivo, tales como la enfermedad de Alzheimer-Perusini (injustamente única llamada la enfermedad de Alzheimer la enfermedad; APD / AD) ^1, la enfermedad de Parkinson (EP) ^2, la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) ^3, la enfermedad de Lou Gehrig-/ Esclerosis lateral Sclerosis (ALS) ^4, y ⁵ Guam enfermedad, por mencionar algunos.

Las técnicas avanzadas de neuroimagen, como la alta definición de la tomografía computarizada (es decir, escaneo CT multicorte espiral; angiografía TC), resonancia magnética funcional y morfológica (es decir, fMRI, por difusión de resonancia magnética, MRI-tractography, etc.), por emisión de positrones (PET), de imágenes basados ​​en ultrasonidos, y otros, sin duda han modificado nuestro enfoque general sobre la forma de diagnosticar y curar a los pacientes neurológicos y psiquiátricos. Sin embargo, aunque las técnicas de neuroimagen son capaces de visualizar el cerebro de una persona cuando vivo, no ofrecen la oportunidad, en el momento que ocurre, para analizar directamente las estructuras celulares y subcelulares altamente complejos de células, tales como las neuronas; o para visualizar, marcar y cuantificar tipos específicos de lesiones intracelulares; o para indicar con precisión su localización neuroanatómica o subregional en circuital y sub-niveles anatómicos circuitales. Por ejemplo, las técnicas de neuroimagen no pueden identificar o localizar cuerpos de Lewy (LB) en las neuronas pigmentadas de la Sustancia negra (SN), una característica patológica común asociado con PD, o marañas neurofibrilares (NFT) en la corteza entorrinal, una característica clásica de la EA y otras patologías cerebrales. investigaciones neuropatológicas combinados con microscopía digital avanzada siguen siendo insustituible para las correlaciones clinicopatológicas detalladas y, por lo tanto, para los diagnósticos definitivos.

Debido a las propiedades peculiar anatomo-funcional del cerebro humano, y en especial a su localización anatómica (es decir, dentro del cráneo, un sistema natural de protección que no permite el examen directo de su contenido), la introducción de técnicas de neuroimagen in vivo tienen los clínicos e investigadores extraordinariamente ayudado a encontrar respuestas iniciales a algunos de los misterios de este tejido complejo. Sin embargo, no hay clínica o neuroimagimetodología ng que puede sustituir a la oportunidad única para analizar directamente el tejido del cerebro durante la autopsia. Sólo el conjunto organizado, conservación y clasificación de los cerebros humanos puede permitir investigaciones directas y sistemáticas de las células neuronales y no neuronales, sus componentes subcelulares, intracelular y lesiones patológicas extracelulares, y cualquier tipo de anormalidad en el cerebro para confirmar, modificar o redefinir los diagnósticos clínicos y descubrir nuevas correlaciones clínico-patológicas. Una de las limitaciones aparentes sobre la evaluación del cerebro en la autopsia ha sido el hecho de que este procedimiento es una metodología de sección transversal. Siempre habrá un retraso entre un proceso continuo neuropatológico (clínicamente manifiesta o no) y la posibilidad, en su caso, para definirlo a nivel neurohistológica. Esto se debe principalmente a la incapacidad del cerebro humano de regenerarse. Actualmente no es posible obtener tejido cerebral in vivo sin crear permanent daños. En consecuencia, no es posible evaluar longitudinalmente y neuropathologically el mismo cerebro / persona. Sin embargo, los procedimientos bancarios cerebro estandarizados y una mayor conciencia de la donación de cerebro entre el público en general podrían contribuir en gran medida a la resolución de problemas de sincronización con el cerebro mediante el aumento de la autopsia constantemente el número de casos para recoger y analizar. De esta manera, los números más adecuadas de cerebros postmortem podrían obtenerse para definir patrones constantes de origen patológico y la progresión para cada tipo específico de lesión cerebral asociada con cada enfermedad cerebro humano. Esto requeriría la donación y la colección de tantos cerebros como sea posible de los pacientes afectados por cualquier trastorno neuropsiquiátrico, así como de los sujetos de control sanos en todas las edades. Un método posible podría ser la recogida tantas cerebros postmortem como sea posible de los centros médicos especializados y generales, como una rutina estándar. La necesidad de donaciones del cerebro se ha expresado recientementepor los que estudian la demencia y el envejecimiento normal ^6. La misma necesidad se debe expresar por el campo neuropsiquiátrico como conjunto.

Por lo anterior, y por otras razones, una actualización de los procedimientos de corte cerebral en curso es necesario. Por otra parte, el cerebro procedimientos de corte debe ser universalmente estandarizado a través de diferentes centros de investigación neuropatología en todo el mundo, teniendo también en cuenta la posibilidad de emplear técnicas biotecnológicas actuales y futuros para investigar mejor y, con suerte, para entender definitivamente, las causas y mecanismos de las enfermedades cerebrales en los seres humanos.

Aquí, principalmente con fines de investigación, se describe una metodología simétrica para cerebral postmortem de corte en los seres humanos. Este procedimiento se propone recoger las regiones más cerebral que normalmente hecho y de ambos hemisferios cerebrales y el cerebelo. Un procedimiento de corte cerebro bihemisférica simétrica encaja mucho mejor con nuestro conocimiento actual de los recursos humanosneuroanatomía, neuroquímica, neurofisiología y. Este método también permite la posibilidad de analizar neuropathologically las características únicas del cerebro humano, tales como la especialización hemisférica y lateralización que están asociadas con funciones cognitivas y no cognitivas superiores o exclusivamente típicamente presente en nuestra especie. Si existen relaciones específicas entre patogénicos hemisférica especialización / lateralización y determinados tipos de lesiones cerebrales, o si un evento patogénico neuropsiquiátrico es peculiar inicialmente, predominantemente o exclusivamente asociados con un hemisferio específica y la función no se conoce actualmente. Mediante la descripción de este procedimiento de corte simétrico cerebro, nuestro objetivo es proponer un método de actualización de la disección del cerebro humano que podría ayudar a comprender mejor las condiciones normales y patológicas en un tejido altamente especializado, el cerebro. Este método también toma en consideración aquellos aspectos hemisféricos morfo-funcionales que existen sólo en los seres humanos.

Protocolo

Los procedimientos que implican tejidos humanos postmortem han sido revisados ​​por la junta de revisión institucional y exenta en virtud de 45 CFR (Código de Regulaciones Federales).

NOTA: El protocolo describe un procedimiento de corte cerebro bihemisférica simétrica para la evaluación cerebral postmortem finalizado para los estudios neuropatológicos en los seres humanos. serán excluidos descripciones detalladas de los aparatos, instrumentos, materiales y suministros necesarios para realizar el corte cerebro humano. Materiales y suministros para las disecciones del cerebro se seleccionan según el criterio del investigador único y se basan en instrumentos de autopsia permitidos o autorizados en cada institución de investigación. El conjunto mínimo de herramientas y materiales necesarios para este procedimiento se describe en la Tabla de materiales / equipo. Procedimientos de corte específicos y precauciones para enfermedades cerebrales transmisibles sospechosos, tales como la ECJ humana, están fuera de los objetivos de este manuscrito y están disponibles de otras fuentes ^7.

1. simétrica BiEl corte cerebral hemisférica

Nota: Asegúrese de que el cerebro ha recibido la fijación del tejido necesario (utilizando, por ejemplo, tamponada neutra al 10% de formalina) por un período de dos a tres semanas, dependiendo de la periagonal, metabólica (es decir, pH), y el tejido de preservación ( es decir, temperatura) condiciones. Sin embargo, para los estudios de correlación de imágenes de patología, un período de fijación más largo (> 5,4 semanas) se ha sugerido ^8.

1. Coloque el cerebro en una superficie plana hacia el investigador, con los polos frontales dirigidas en la dirección opuesta con respecto al investigador.
2. Coloque el cerebro de una manera tal como para permitir una visualización clara y completa de todos circunvoluciones cortical y surcos del cerebro entero (Figura 1a).
3. Primer vistazo a las anomalías de las meninges, las asimetrías hemisféricas macroscópicas (posibles indicadores de focal, lobar o fenómenos generalizados hemisféricas de atrofia), lesiones macroscópicas tissutal (es decir, tumors o hernia), malformaciones congénitas, anomalías de los vasos, y cualesquiera otras anomalías posibles o presentaciones inusuales de la superficie cerebral.
   NOTA: Para obtener descripciones detalladas sobre cómo evaluar un cerebro humano, se refiere a los libros de texto neuropatología disponibles en el mercado y manuales de la autopsia ^9,10.

2. Protocolo de Secuencia

1. Enfrentar los postes frontales lejos del investigador, con los aspectos superficiales de los hemisferios (telencéfalo) que se enfrenta el investigador. Tomar tantas fotos digitales, según sea necesario en cada caso en particular para documentar posibles macro-anomalías y dar cuenta de posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y post-corte. Haga que un asistente de investigación tomar fotografías digitales de forma perpendicular al cerebro para capturar toda la superficie cortical (Figura 1a - c).
2. Marcos pre y circunvoluciones corticales poscentral utilizando tinta o agujas de color antes de cortar el cerebro (Figura 1b ).
   NOTA: Este procedimiento facilita un reconocimiento más inmediata del motor y la corteza somatosensorial primaria después del corte.
3. Girar el cerebro por 180 grados mientras que lo mantiene en la misma dirección (es decir, los polos frontales frente lejos del investigador). Con cuidado, inspeccionar la base del cerebro. Prestar especial atención a las condiciones de los sistemas cerebrovasculares (es decir, las arterias basilar y vertebral y el círculo de Willis) y los nervios craneales en el tronco del encéfalo sus niveles de salida / entrada. Manejo de los bulbos olfatorios y extensiones con especial cuidado para evitar la laceración tissutal, debido a su extrema fragilidad.
   1. Tomar tantas fotos digitales, según sea necesario en cada caso en particular para documentar posibles macro-anomalías y dar cuenta de posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y post-corte. Tiene un asistente de investigación tomar fotografías digitales de forma perpendicular al cerebro para capturar la totalidad de las superficies corticales y del tronco cerebral.
4. Frente a la base del cerebro y el uso de un bisturí, cortar el tronco cerebral transversalmente a nivel de la parte superior de la protuberancia (lo más cerca posible a la base del cerebro). Inspeccione cuidadosamente el SN (es decir, por la palidez) ¹¹ y otras estructuras vecinas ^12. Tome en cuenta, posiblemente utilizando un dispositivo grabador de audio, de cualquier aspecto inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal ^13.
5. Una vez más girar el cerebro en 180 grados y, con un cuchillo afilado, separar los dos hemisferios al cortar el cuerpo calloso centralmente a través de la fisura longitudinal medial y siguiendo una dirección fronto-occipital. Inspeccionar cada lado de cada hemisferio de posibles anomalías (por ejemplo, ampliaciones ventriculares, malformaciones, suavizantes de tejidos, tumores, etc.) ^13. Véase la figura 2a.
   1. Tomar tantas fotos digitales, según sea necesario en cada caso en particular para documentar posibles anomalías y macro-para tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y post-corte. Tiene un asistente de investigación tomar fotografías digitales de forma perpendicular al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Atender a cualquier característica inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
6. Coloque los dos hemisferios plana, acostado en sus aspectos mediales, con los lóbulos frontales de espaldas al investigador, como se muestra en la Figura 2b. Colocarlos en una forma que sus centros se tocan (también en caso de marcada asimetría hemisférica).
7. Con un cuchillo afilado, cortar manualmente a través de ambos hemisferios cerebrales, a partir de los polos frontales y en movimiento hacia los polos occipital a través de toda la longitud de los hemisferios. Obtener dos series de 1 cm de espesor bloques de tejido cerebral (alrededor de 18 losas para cada hemisferio).
8. Coloque las losas del cerebro en una secuencia organizada anatómica (dirección fronto-occipital) sobre una superficie plana separada. Use un surfa blancoce con una regla impresa en él para un mejor contraste al fotografiar. Mostrar las dos series de placas cerebrales de una manera anatómicamente simétrico (dirección fronto-occipital), asegurándose de que sus superficies coronales son visibles para la inspección visual directo y la fotografía digital (Figura 3a). Use superficies de corte con rejillas milimétricas impresas en ambos lados para localizar estructuras cerebrales, tamaños y posibles anomalías de una manera más precisa.
   1. Tomar tantas fotos digitales, según sea necesario en cada caso en particular para documentar posibles macro-anomalías y dar cuenta de posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y post-corte. Tiene un asistente de investigación tomar fotografías digitales de forma perpendicular al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Tome notas (posiblemente utilizando un dispositivo grabador de audio), de cualquier aspecto inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
9. El uso de un escalpelo afilado, diseccionar manualmente pequeños bloques rectangulares detejido cerebral para cada región cerebral establecido. Siga el sistema de recogida región cerebral propuesto que se describe en la Tabla 1.
   1. Poner cada bloque de tejido en histocassettes etiquetados por separado.
      NOTA: Cada bloque de tejido cerebral necesita ser cortado para ajustarse, tanto como sea posible, el volumen máximo histocassette estándar (30 x 20 x 4 mm ^3).
   2. Etiquetar los histocassettes utilizando un código de identificación de cada caso y el uso de identificadores neuroanatómicas específicas (no usar letras o números aleatorios para diferentes cerebros; más bien, utilizar siempre la misma región anatómica nombres o números correspondientes, como se muestra en la Tabla 1). Crear códigos de identificación de, por ejemplo, mediante la generación de números aleatorios o semi-aleatoria para cada caso (es decir, BRC 130, donde B se mantiene para el Cerebro, R se mantiene para el recurso, C se mantiene durante Center y 130 es una adhesión progresiva o AD160001, donde AD es sinónimo de "estudio de la enfermedad de Alzheimer", 16 es elaño en el que se realizó la autopsia (2016), y 0001 una serie de muestras de adhesión progresiva).
      NOTA: Este paso es muy útil para los futuros investigadores; mantener una leyenda, y especificar el hemisferio (L = hemisferio izquierdo, R = hemisferio derecho). Utilice dos colores diferentes de histocassettes, el establecimiento de un color específico para cada hemisferio.
   3. Tomar tantas fotos digitales, según sea necesario en cada caso en particular para documentar posibles macroanomalies y para tener en cuenta las posibles consideraciones clínico-neuroanatómicas y post-corte. Tiene un asistente de investigación tomar fotografías digitales de forma perpendicular al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Atender a cualquier característica inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.
10. Tomar fotografías digitales (tantos como sea necesario o deseado) de todo el cerebro corte y los histocassettes asociados.
11. Punch (por ejemplo, por Accu-punch) pequeños trozos de tejido para la extracción de ADN y análisis genéticos. Utilizarun punzón de 2 - 5 mm de diámetro.
    NOTA: Por su alto contenido de material genómico, el cerebelo es la opción preferida; Sin embargo, ninguna otra región está muy bien.
12. Re-sumergir todas histocassettes que contienen bloques de tejido cerebral en el mismo tipo de solución de fijación (por ejemplo, 10% de formalina tamponada neutra) tal como se utiliza anteriormente hasta que el siguiente paso de procesamiento de tejidos.
13. Siga los procedimientos estándar para el procesamiento de tejido fijado con formalina humano ^14.

3. Un enfoque especial: Alterna fijos y congelados de corte simétrico bihemisférica

NOTA: El protocolo de corte cerebro bihemisférica simétrica se describe en la sección 2 ofrece la posibilidad de cortar losas de tejido de cerebro no fijadas, frescos (cuando esté disponible) de la misma manera sistemática y simétrica.

1. Coloque todo el cerebro fresco al revés (preferentemente en una superficie de plástico en forma de bol semiesférica) para de 8 - 10 min en un congelador a -80ºC para endurecer el tejido cerebral Without provocando daño bioquímico y para facilitar el corte manual.
2. Con un cuchillo afilado, cortar en ambos hemisferios en un suplente y de manera consecutiva, siguiendo el protocolo de corte cerebro se describe en la Sección 2, pero congelar y solucionar todos los demás losa (de ambos hemisferios ya lo largo de una dirección anatómica fronto-occipital).
   1. En este punto, no trate de cortar cada región cerebral, tal como se describe en la Tabla 1. Cortar regiones específicas del cerebro frescas de ser requerido para el ARN inmediata o la extracción de proteínas (es decir, para los estudios de genómica o proteómica) ^15.
3. Después del corte, inmediatamente congelar, etiqueta, y el número de cada tejido fresco. Tomar fotografías digitales de la serie completa de la losa; empacar cada losa en una sola bolsa de plástico; recoger las losas en una sola cerebro de sólo recipiente separado,; y almacenar el recipiente en un dedicado -80 ° C congelador.
   NOTA: El congelador debe ser dedicado a sólo el tejido cerebral humano. Sólo más tarde se cantancortar le regiones del cerebro congelado como se requiere para cada experimento específico.
4. Sumergir cada otra losa de tejido escogido para la fijación (10% de formalina tamponada neutra u otro fijador) en bolsas separadas que contienen un volumen suficiente de fijador (3/1 volumen de la relación / tejido-bloque fijador). Etiquetar cada bolsa por consecutivamente la numeración de ellos siguiendo una secuencia fronto-occipital. Sellar cada bolsa, tomar fotografías digitales, y almacenarlos en un recipiente de plástico.
5. Abrir las bolsas que contienen fijadores-después de 2 semanas de la fijación del tejido y cortar cada región cerebral como se describe en la Tabla 1.

4. Histostain e inmunohistoquímica

NOTA: El conjunto de regiones cerebrales reducido basadas en el esquema propuesto (Tabla 1) son suficientes para satisfacer los criterios patológicos mayoría, si no todos, basado en el consenso, actualmente fijado para el ¹⁶ AD, PD ^17, demencia con cuerpos de Lewy (DCL) ^18, La demencia frontotemporal (DFT / MND) ^{19, progresivo suprabulbar Cerebral (PSP) 20, atrofia multisistémica (MSA) 21, encefalopatía traumática crónica (CTE) 22, etc.}

1. Para cada región del cerebro y para ambos hemisferios, realice el siguiente conjunto mínimo de histostains: hematoxilina y eosina (H & E), cresil violeta (CV; si se planean estudios morfométricos cuantitativos, por ejemplo), y tinción con plata (si los análisis "exploratorias" son necesario).
2. Para cada región del cerebro y para ambos hemisferios, realice el siguiente conjunto mínimo de protocolos de inmunohistoquímica: ß-amiloide (β A), Tau-fosforilada (ptau), α-sinucleína fosforilada (pα-syn), y fosforilados-TDP43 (pTDP43) , como se describe ^14.
   NOTA: El número total de secciones de tejido con el fin de evaluar cada cerebro después de este protocolo es de 46 (si todas las regiones cerebrales de ambos hemisferios están disponibles).

Resultados

Protocolo de cuerpo entero

El tiempo dedicado a un solo procedimiento de corte simétrico bihemisférica fijo cerebro se estima en 1 h (con exclusión del tiempo dedicado creación de la mesa de disección, las herramientas y las superficies de corte, etiquetado,. Etc). El tiempo requerido para una sola alterna bi-hemisférica simétrica congelado y el cerebro fijo procedimiento de corte se estima para tomar 2 h. Se pued...

Discusión

Este método de corte cerebro se puede adaptar a las necesidades específicas de cada laboratorio de neuropatología (por ejemplo, mediante la reducción del número de regiones cerebrales para evaluar para cada hemisferio) al tiempo que conserva el procedimiento de corte simétrica bihemisférica como una de sus características principales. Este protocolo propuesto podría ser utilizado para procedimientos de rutina (centros neuropatológicos orientadas a la investigación) o sólo cuando sea necesario (estudios espec...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use.
Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs.
Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required.
Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales.
Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed.
Histology Container	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64233-24
Histology Cassettes	VWR	18000-142 (orange)
Histology Cassettes	VWR	18000-132 (navy)
Knife Handles and Disposable Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62560-04
Long Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62561-20
Disposable Blade Knife Handles	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72040-08
Scalpel Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72049-22
Accu-Punch 2 mm	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	69038-02
Polystyrene Containers – Sterile	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64240-12
Dissecting Board	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	63307-30
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128 SIGMA
Hematoxylin Solution, Gill No. 2	Sigma-Aldrich	GHS280 SIGMA
Eosin Y solution, aqueous	Sigma-Aldrich	HT1102128 SIGMA
anti-beta-amyloid	Covance, Princeton, NJ	SIG-39220	1:500
anti-tau	Thermo Fisher Scientific	MN1020	1:500
anti-alpha-synuclein	Abcam	ab27766	1:500
anti-phospho-TDP43	Cosmo Bio Co.	TIP-PTD-P02	1:2000
Digital Camera	Any
Head Impulse Sealing machine	Grainger	5ZZ35