İnsanlardaki Sağlıklı ve Patolojik Beyin Koşulları Eğitim için Kesme Simetrik Bihemispheric Postmortem Beyin

Özet

Organize beyin kesme prosedürleri kesin nöropatolojik tanıları ile belirli nöropsikiyatrik olayları ilişkilendirmek için gereklidir. Beyin kesimler çeşitli klinik-akademik beklenmedik göre farklı yapılır. Bu protokol, insan beyni patolojilerinde hemisferik farklılıkların araştırılması ve mevcut ve gelecekteki biomoleküler / beyin teknikleri en üst düzeye çıkarmak için bir simetrik bihemispheric beyin kesme prosedürü anlatılmaktadır.

Özet

Nöropatologlar, zaman zaman, bir beyin otopsi talep edildi kimin için bu hastalarda tanımlanan karmaşık nöropsikiyatrik olaylar için kesin tanı üretmek için gerekli olan bilginin miktarına göre çekinmeye. biyomedikal bilimler ve beyin görüntüleme gelişmeler nöropsikiyatrik alanında devrim olmasına rağmen, aynı zamanda beyin otopsi sadece bir doğrulayıcı bir değere sahip olduğunu yanıltıcı fikrini yarattı. Bu yanlış bir düşüncedir dolayısıyla bir azalma olasılığı insan beyninin henüz bilinmeyen sayısız normal ve patolojik yönlerini kavramak için gerekli olan daha detaylı ve kapsamlı nöropatolojik araştırmalar gerçekleştirmek için, otopsi oranları ciddi bir azalma yarattı ve. Gözlenen nöropsikiyatrik olaylar ve bunların olası neurohistological ögelerinden gelen yerelleştirme / karakterizasyonu arasındaki korelasyonun geleneksel çıkarımsal yöntem yadsınamaz bir değere sahip olmaya devam etmektedir. neuropsychi bağlamındabeyin dokularının doğrudan fiziksel değerlendirilmesi üzerine özellikle dayanır çünkü atric hastalıklar, geleneksel klinikopatolojik yöntem, hala bunlara karşılık gelen nöropatolojik yüzeylere benzersiz nöropsikiyatrik özellikleri bağlamak mümkün olan en iyi yöntem (ve genellikle sadece mevcut) 'dir. postmortem beyin değerlendirme beyin farklı nöropatoloji merkezleri arasında değişir kesme işlemleri dayanmaktadır. Beyin kesimler her kurumda mevcut çeşitli klinik ve akademik şarta dayalı nispeten geniş ve sistematik bir şekilde yapılmaktadır. Daha anatomik kapsayıcı ve simetrik iki hemisfer beyin kesme yöntemi en azından derinliği, belirli insan beyninin (yani, hemisferik özelleşme ve lateralizasyon özellikleri ile normal ve patolojik durumlarda, tutarlı araştırmak için insan nöropatoloji araştırma amaçlı kullanılması gerektiğini fonksiyonlar). daha kapsamlı bir colle sağlayacak bu gibi bir yöntem olupmevcut ve gelecekteki biyoteknolojik ve beyin görüntüleme teknikleri kullanılabilir nöropatolojik iyi karakterize beyinlerin ction. Biz insan beyninin patolojilerinde hemisferik farklılıkların incelenmesi için ve akım kullanımının yanı sıra gelecekte biomoleküler / beyin teknikleri simetrik iki hemisfer beyin kesme prosedürü açıklar.

Giriş

Nöropatologlar insan beyni değerlendirmek için bilimsel ayrıcalık, entelektüel şeref ve teşhis yükümlülüğü vardır. Uzun yıllardır, beyin hastalıkları ve önemli çabaların ayrıntılı klinik açıklamaları insan postmortem beyinlerinde olası neurohistological karşılıkları üstlenilmiştir bireyselleşmek için. Tarihsel olarak, bu çabaların özellikle tıp bilimleri ve nöroloji, modern çağın gelişmiş olan en verimli modalite temsil etti. önceki seçkin nöropatolog ve onların özveri, kararlılık, burs ve şaşırtıcı kapasitesi sayesinde (genelde çok rudimental araçları kullanarak) normal ve anormal beyin dokularında arasında ayrım, şimdi araştırmak ve Alzheimer-Perusini hastalığı gibi hedef hastalıkları (haksız sadece adlandırılan Alzheimer hastalığı, APD / MS) ^1, Parkinson hastalığı (PD) ^2, Creutzfeldt-Jakob hastalığı (CJD) ^3, Lou-Gehrig hastalığı / Amyotrofık Lateral sclerosis (ALS) ^4, ve Guam hastalığı ^5, birkaç söz.

Fonksiyonel ve morfolojik manyetik rezonans görüntüleme (yani, fMRI, difüzyon MR, traktografi-MR, vb), Pozitron Emisyon Tomografisi, bu tür yüksek çözünürlüklü bilgisayarlı tomografi (BT anjiyografi, yani multisection spiral CT taraması) olarak nörogörüntülemenin ileri teknikleri, (PET), ultrason tabanlı görüntüleme ve diğerleri, kesinlikle teşhis ve nörolojik ve psikiyatrik hastaların tedavisi için nasıl bizim genel yaklaşım değiştirdiniz. Bununla birlikte, beyin teknikleri canlı, doğrudan nöronlar gibi hücrelerin son derece karmaşık hücresel ve hücre içi yapılarını analiz etmek, ortaya çıkan şu anda, fırsat sunmuyoruz zaman bir kişinin beyni görselleştirme yeteneğine sahip olmasına rağmen; veya, mark görselleştirmek ve hücre içi lezyonların belirli türde ölçmek için; ya da tam circuital ile alt onların nöroanatomik veya alt bölgesel lokalizasyonu belirtmek içincircuital anatomik seviyeleri. Örneğin, beyin görüntüleme teknikleri, entorinal kortekste AD klasik özelliği Substansiya Nigra (SN), PD ile ilişkili patolojik bir özellik ya da nörofibrular düğüm (NFT) pigmente nöronlarda Lewy Kuruluşları (LB) tanımlamak veya lokalize edemez ve diğer beyin patolojileri. gelişmiş dijital mikroskobu ile birlikte nöropatolojik araştırmalar kesin tanı için, böylece yine detaylı klinikopatolojik korelasyon unreplaceable ve.

Nedeniyle insan beyninin kendine özgü anatomo fonksiyonel özellikleri ve özellikle anatomik lokalizasyonu (yani, kafatası, içeriği doğrudan muayene izin vermez doğal bir koruyucu sistem içinde), in vivo beyin görüntüleme tekniklerinin tanıtımı bu karmaşık doku gizemleri bazı ilk yanıtlarını bulmak için olağanüstü yardımcı klinisyen ve araştırmacılar var. Bununla birlikte, herhangi bir klinik veya neuroimagi oradadoğrudan bir otopsi sırasında beyin dokusunun analiz için eşsiz bir fırsat yerini alabilir ng metodolojisi. Sadece organize toplanması, korunması ve insan beyni sınıflandırılması nöronal ve nöronal olmayan hücreler, onların hücre içi bileşenleri, hücre içi ve hücre dışı patolojik lezyonların doğrudan ve sistematik araştırmalar izin verebilir ve beynin içinde anormallik her türlü, onaylamak, değiştirmek ya da klinik tanı yeniden tanımlamak ve yeni klinikopatolojik korelasyon keşfetmek için. Otopside beyin değerlendirilmesine ilişkin belirgin kısıtlamalar biri bu işlem bir kesit yöntem olması olmuştur. Her zaman devam eden bir nöropatolojik süreç (klinik olarak tezahür ya da değil) ve neurohistological düzeyde tanımlamak şansı varsa, arasında bir gecikme olur. Bu kendini yenilemesi insan beyninin göremezlik kaynaklanmaktadır. Pe yaratmadan in vivo beyin dokusu elde etmek mümkün değilrmanent hasar. Sonuç olarak, uzunlamasına ve nöropatolojik aynı beyin / kişi değerlendirmek mümkün değildir. Ancak, standart beyin bankacılık işlemleri ve genel halk arasında beyin bağışı için artan bir farkındalık büyük ölçüde tutarlı toplamak ve analiz etmek için vaka sayısını artırarak beyin otopsi zamanlama sorunların çözümüne katkıda bulunabilir. Bu şekilde, ölüm sonrası beyin daha yeterli sayıda, her bir insan beyin hastalığı ile bağlantılı beyin lezyonu her bir özel tipte patolojik Kalkış ve ilerlemesi sabit desen tanımlamak için elde edilebilir. Bu her yaştan genelinde bağış ve mümkün olduğunca çok sayıda beyin koleksiyonu herhangi bir nöropsikiyatrik bozukluk etkilenen hastaların yanı sıra sağlıklı kontrol grubu gerektirecektir. Bir olası bir yöntem standart rutin olarak genel ve özel tıp merkezlerinden mümkün olduğunca çok sayıda postmortem beyin toplama olabilir. Beyin bağış ihtiyacı son zamanlarda ifade edilmiştirdemans ve normal yaşlanma ⁶ çalışma olanlar tarafından. Aynı zorunluluk bütün olarak nöropsikiyatrik alanı tarafından ifade edilmelidir.

diğer nedenlerle yukarıda belirtilen ve için, devam etmekte olan beyin kesme prosedürlerinin bir güncelleştirme gereklidir. Ayrıca, kesme işlemleri beyin evrensel da daha kesin nedenleri ve beyin hastalıklarının mekanizmaları, anlamak için, umarım, araştırmak ve mevcut ve gelecekteki biyoteknolojik teknikler istihdam imkanı hesabında alarak, dünya çapında farklı nöropatoloji araştırma merkezleri arasında standardize edilmelidir insanlar.

Burada, esas olarak araştırma amaçları için, ölüm sonrası beyin insanlarda kesme simetrik bir yöntem tarif eder. Bu prosedür normalde yapmaktan daha hem serebral ve serebellar hemisferde daha serebral bölgeleri toplama önermektedir. Bir simetrik iki hemisfer beyin kesme işlemi insan mevcut bilgi ile daha iyi uyacakNöroanatomi, nörokimyasal ve nörofizyoloji. Bu yöntem aynı zamanda olasılık nöropatolojik gibi yüksek bilişsel ve non-bilişsel işlevler, tipik veya münhasıran mevcut bizim türlerde ile ilişkili hemisferik uzmanlaşma ve lateralizasyon olarak insan beyninin benzersiz özellikleri, analiz etmeyi sağlar. hemisferik uzmanlık / lateralizasyonun ve beyin lezyonlarının belirli türleri arasındaki özel patogenetik ilişkiler var olsun, ya da bir tuhaf nöropsikiyatrik patogenetik olay olup olmadığını başlangıçta, yaygın, ya da sadece belirli bir yarımkürenin ile ilişkili ve işlev henüz bilinmemektedir. Bu simetrik beyin kesme işlemini anlatarak, daha iyi bir derece uzmanlaşmış dokusunda normal ve patolojik durumları, beyni anlamak için yardımcı olabilir insan beyni diseksiyon güncelleştirilmiş bir yöntem önermektir hedefliyoruz. Bu yöntem aynı zamanda dikkate sadece insanlarda var olan morfo-fonksiyonel hemisferik yönlerini alır.

Protokol

postmortem insan dokuları içeren Prosedürler kurumsal inceleme kurulu tarafından incelenir ve 45 CFR (Federal Düzenlemeler Kanunu) kapsamında muaf edilmiştir.

NOT: protokol insanlarda nöropatolojik çalışmalar için kesinleşmiş postmortem beyin değerlendirmesi için bir simetrik bihemispheric beyin kesme prosedürü anlatılmaktadır. İnsan beyni kesim gerçekleştirmek için gerekli aparatlar, enstrümanlar, malzeme ve sarf malzemelerinin ayrıntılı açıklamalar hariç tutulacaktır. Beyin diseksiyonlarının malzemeleri ve gereçleri tek araştırmacı takdirine seçilir ve izin verilen veya her araştırma kurumunda onaylı otopsi araçları dayanmaktadır. Bu prosedür için gerekli araç ve malzemenin en az set Malzeme / Ekipman Tablo açıklanmaktadır. Spesifik kesme işlemleri ve insan CJD olarak şüpheli bulaşıcı beyin hastalıkları için önlemler, bu yazının amaçları dışında ve diğer kaynaklardan ⁷ edinilebilir.

1. Simetrik Bihemisferik Beyin Kesme

Not: iki ya da üç haftalık bir süre için periagonal, metabolik bağlı olarak (örneğin, Ph), ve doku korunması ((nötr tamponlu% 10 formalin örneğin kullanılarak), beyin, gerekli doku fiksasyon aldığı sağlamak örneğin, sıcaklık) şartları. Ancak, görüntüleme-patoloji korelasyon çalışmaları, fiksasyon uzun bir süre için (> 5.4 hafta) ⁸ ileri sürülmüştür.

1. araştırmacıya göre ters yönde yönlendirilmiş ön direkleri ile, araştırmacı bakan düz bir yüzeye beyin yerleştirin.
2. Tüm kortikal girus ve tüm beyin (Şekil 1a) sulkuslar tam ve net görselleştirme izin için böyle bir şekilde beyin yerleştirin.
3. Meningeal anomaliler için ilk bakış, makroskopik hemisferik asimetriler (fokal, lober veya atrofi genelleştirilmiş hemisferik olayların olası göstergeler), makroskopik tissutal lezyonları (örn tumors veya herniasyon), konjenital malformasyonlar, damar anormallikleri ve diğer olası anormallikler veya serebral yüzeyinin alışılmadık sunumları.
   NOT: insan beyni nasıl değerlendirileceğine ilişkin ayrıntılı açıklamalar için, ticari olarak mevcut nöropatoloji ders kitapları ve otopsi kılavuzları ^9,10 bakın.

2. Protokol Sıra

1. araştırmacı bakan hemisfer (telencephalon) yüzeysel yönleri ile, uzak araştırmacı gelen ön direkleri karşı karşıyadır. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. Araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için beyne dik dijital fotoğraf çekmek var (Şekil 1a - c).
2. Mark öncesi ve beyin kesmeden önce mürekkep veya renkli iğneler kullanılarak postsentral kortikal giruslar (Şekil 1b ).
   Not: Bu yordam, motor ve kesme sonra somatosensoriyel birincil korteks daha yakın tanıma kolaylaştırır.
3. Aynı yöne bakan tutarken 180 derece beyin döndürün (yani, araştırmacı uzağa bakan ön direkleri). Dikkatle beyin tabanını kontrol edin. Serebrovasküler sistem koşulları (yani, baziler ve vertebral arterler ve Willis poligonunun) kendi beyin çıkış / giriş seviyesinde ve kranial sinirlerin özel dikkat gösterin. nedeniyle aşırı kırılganlık için, tissutal laserasyon önlemek için özel bakım ile koku ampuller ve risaleler yönetin.
   1. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi kortikal ve beyin sapı yüzeylerinin bütününü yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var.
4. beynin tabanına bakan ve bir neşter kullanarak, (beyin tabanına mümkün olduğunca yakın) pons üst kısmının seviyesinde beyin sapı enine olarak kesildi. Dikkatle ¹¹ (solukluk için yani) SN incelemek ve diğer komşu yapılar ^12. Muhtemelen normal bir beyne ¹³ oranla beynin herhangi bir olağandışı görünüm, bir ses kaydedici cihazı kullanılarak, not alın.
5. Yine medial longitudinal fissür aracılığıyla merkezi korpus kallosum kesme ve fronto-oksipital yönünü takip ederek iki hemisfer ayırmak, keskin bir bıçak kullanarak, 180 derece beyin döndürmek ve. Mümkün (örneğin, ventriküler büyütmeler, malformasyonlar, doku yumuşatma, tümörler, vb) anomaliler ¹³ her yarımkürenin her tarafını kontrol edin. Şekil 2a bakın.
   1. Olası makro-anomalileri belgelemek için her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekmek veMümkün klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı özelliği dikkate alınız.
6. Şekil 2b gösterildiği gibi frontal lob, uzak araştırmacı dan bakacak, onların medial yönleri üzerinde yatarken, iki hemisfer düz yerleştirin. onların merkezleri (işaretli hemisferik asimetri durumunda da) temas şekilde koyun.
7. Keskin bir bıçak kullanarak, elle ön kutuplarda başlayan ve hemisferlerin tüm uzunluğu boyunca oksipital kutuplara doğru hareket, hem serebral hemisfer kesti. (Her yarım küre 18 slab civarında) beyin dokusu 1 cm kalınlığında iki dizi blok elde edilir.
8. Ayrı bir düz bir yüzey üzerinde anatomik düzenlenen (fronto-oksipital yönü) sırayla beyin döşeme yerleştirin. beyaz bir taşlama kullanınfotoğrafını çekerken daha iyi kontrast için üzerine basılmış bir cetvel ile ce. Onların koronal yüzeyler doğrudan göz muayene ve dijital fotoğrafçılık (Şekil 3a) görebilir emin, anatomik simetrik bir şekilde (fronto-oksipital yönü) serebral plaka iki dizi görüntüler. daha doğru bir şekilde beyin yapıları, boyutları ve olası anormallikleri lokalize her iki tarafta basılı milimetrik ızgaraları ile kesim yüzeyleri kullanın.
   1. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı yönü, (muhtemelen bir ses kaydedici cihazı kullanılarak) notlar alın.
9. keskin bir neşter kullanılarak, elle küçük dikdörtgen bloklar teşrihHer kurulan serebral bölge için beyin dokusu. Tablo 1'de açıklanan önerilen serebral bölge toplama düzeni takip edin.
   1. ayrı bir şekilde etiketlenmiştir histocassettes her doku bloğu koyun.
      Not: beyin dokusunun her blok mümkün olduğu kadar, uygun olarak kesilmesi gereken standart histocassette maksimal hacim (30 x 20 x 4 ^mm3).
   2. Her iki durum için bir de tanımlama kodu kullanarak ve belirli nöroanatomik tanımlayıcıları kullanarak histocassettes etiket (farklı beyinleri için rasgele harf veya rakam kullanmayın; Tablo 1'de görüldüğü gibi daha ziyade, her zaman, anatomik isimleri veya ilgili numaralar aynı bölgesel kullanın). Oluşturma de tanımlayıcı kodları, örneğin, örneğin, BRC 130 B beyin kalır burada, R, kaynak için kalır, Cı Center kalır ve 130 ilerleyici katılım ya AD160001 (her durum için rastgele ya da yarı-rastgele sayılar ile AD için nerede durduğunu "Alzheimer hastalığı çalışmasında," 16yıl otopsi ilerici katılım örnek numarası (2016) gerçekleştirilen ve 0001 ne zaman).
      NOT: Bu adım ileride araştırmacılar için çok yararlı olduğunu; Bir efsane tutmak ve yarımkürede (L = sol yarımküre, R = sağ hemisfer) belirtin. Her yarımkürede için özel bir renk kuran histocassettes iki farklı renkler kullanın.
   3. Mümkün macroanomalies belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı özelliği dikkate alınız.
10. dijital fotoğraf çekin, tüm kesim beyin ve ilişkili histocassettes ve (gerekirse veya istenen birçok gibi).
11. (Accu-zımba ile örneğin) Punch, DNA ekstraksiyon ve genetik analizler için küçük doku parçaları. kullanımçapı 5 mm - 2 bir zımba.
    NOT: Genomik malzeme yüksek içerik için, beyincik tercih ediliyor; Ancak, herhangi bir başka bölge gayet iyi.
12. Daha önce doku işleme sonraki adıma kadar kullanıldığı gibi fiksatif solüsyonu (örneğin,% 10 nötr tamponlu formalin) aynı tip beyin dokusu blokları içeren tüm histocassettes yeniden sokmak.
13. İnsan formalin ile fikse doku işleme ¹⁴ standart prosedürleri uygulayın.

3. Özel Bir Yaklaşım: Alternatif Dondurulmuş ve Sabit Simetrik Bihemispheric Kesme

Not: Bölüm 2'de açıklanan simetrik bihemispheric beyin kesme protokolü aynı sistematik ve simetrik bir şekilde sabitlenmemiş, taze beyinleri doku döşeme kesme olasılığı (mevcut) sunmaktadır.

1. Bir 10 dakika -80 ° C derin dondurucuda beyin dokusunun sertleşmesine ezelî - ters (tercihen yarı küresel kase gibi plastik yüzey üzerinde) 8 tüm taze beyin yerleştirint biyokimyasal hasar kışkırtan ve manuel kesim kolaylaştırmak için.
2. Keskin bir bıçak kullanarak, Bölüm 2'de anlatılan beyin kesme protokol izlenerek, alternatif ve peş peşe iki yarımkürede kesti, ama donma ve (bir fronto-oksipital anatomik yönden her iki yarımkürede gelen ve birlikte) her levha düzeltmek.
   1. Bu noktada, Tablo 1 'de tarif edildiği gibi, her bir serebral bölge kesmek için çalışma. Acil RNA veya protein ekstraksiyon (yani, genomik veya proteomik çalışmalar için) ¹⁵ için gerekli sadece belirli taze beyin bölgeleri kesin.
3. kestikten sonra, hemen her taze doku, etiket dondurmak ve sayısı. Tüm döşeme serisi dijital fotoğraf çekin; Tek bir plastik torba içinde her döşemeyi paketi; Ayrı bir tek beyin tek kapta döşeme toplamak; ve özel bir -80 ° C derin dondurucuda kabı saklayın.
   NOT: dondurucu, insan beyin dokusunun sadece adanmış olmalıdır. Ancak daha sonra şarkı söyleyecekher özel deney için gerekli olan le dondurulmuş beyin bölgelerinin kesilebilir.
4. Yeterli fiksatif hacmini (sabitleyici / doku blok oranı 3/1 hacim) içeren ayrı torbalarda tespit (% 10 nötr tamponlu formalin ya da başka bir sabitleştirici) için seçilen her doku levha daldırın. ardışık bir fronto-oksipital dizisi aşağıdaki onları numaralandırma her torbayı etiketleyin. Her torbanın ağzını sıkıca kapatın dijital fotoğraf çekmek ve bir plastik kapta saklayın.
5. Doku tespitin 2 hafta sonra sabitleştirici içeren çanta açın ve Tablo 1'de açıklandığı gibi, her serebral bölgeyi kesti.

4. Histostain ve İmmünohistokimya

NOT: Serebral bölgelerin kümesi önerilen sisteme dayalı kesmek (Tablo 1) AD ¹⁶ için en, hepsi değilse de, şu anda kurulmuş uzlaşmaya dayalı patolojik kriterleri karşılamak için yeterli, PD ^17, Lewy Bodies (LCD) ¹⁸ Demans, frontotemporal Demans (FTD / MND) ^{19, Progressive Suprabulbar Palsy (PSP) 20, Çoklu Sistem Atrofi (MSA) 21, vb Kronik Travmatik Ensefalopati (CTE) 22.}

1. Her beyin bölgesi için ve her iki yarımkürede için, histostains aşağıdaki asgari kümesi gerçekleştirin: Hematoksilen ve Eosin (H & E), cresyl menekşe (CV; nicel morfometrik çalışmalar, örneğin planlanan varsa), ve gümüş boyama (eğer "keşif" analizler vardır gerekli).
2. Her beyin bölgesi için ve her iki yarımkürede için, immünhistokimya protokolleri aşağıdaki minimum setini gerçekleştirin: (β A) fosforile-Tau (pTau'nun), fosforile α-sinüklein (pα-sin) amiloid BETA ve fosforile-TDP43 (pTDP43) olarak ¹⁴ tanımlanan.
   NOT: (her iki yarımkürede tüm beyin bölgeleri varsa) bu protokol sonrasında her beyin değerlendirmek için doku kesitlerinde toplam sayısı 46 olduğunu.

Sonuçlar

protokol uzunluğu

Tek bir simetrik bihemispheric sabit beyin kesme işlemi için harcanan zaman 1 saat olarak tahmin ediliyor (; etiketleme, yüzeyler diseksiyon tablo, araçlar kurma ve kesme harcanan zaman hariç. Vs). dondurulmuş ve prosedürü kesme beyin sabit tek bir simetrik iki hemisferik alternatif için gereken süre 2 saat alacağı tahmin ediliyor. Tek bir insan beyni / konu için kesin histolojik tanı eld...

Tartışmalar

Bu beyin kesme yöntemi hala ana özelliklerinden biri olarak bihemispheric simetrik kesme işlemi korurken (örneğin, her yarımkürede değerlendirmek için beyin bölgelerinin sayısını azaltarak) her nöropatoloji laboratuarında özel ihtiyaçlarına göre adapte edilebilir. Bu önerilen protokol rutin işlemler (araştırma odaklı nöropatolojik merkezler) veya sadece gerektiğinde (özel klinik odaklı çalışmaları) için kullanılabilir. Bu seçici olarak yalnızca araştırmalar belirli türleri (ör...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use.
Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs.
Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required.
Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales.
Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed.
Histology Container	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64233-24
Histology Cassettes	VWR	18000-142 (orange)
Histology Cassettes	VWR	18000-132 (navy)
Knife Handles and Disposable Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62560-04
Long Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62561-20
Disposable Blade Knife Handles	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72040-08
Scalpel Blades	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72049-22
Accu-Punch 2 mm	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	69038-02
Polystyrene Containers – Sterile	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64240-12
Dissecting Board	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	63307-30
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128 SIGMA
Hematoxylin Solution, Gill No. 2	Sigma-Aldrich	GHS280 SIGMA
Eosin Y solution, aqueous	Sigma-Aldrich	HT1102128 SIGMA
anti-beta-amyloid	Covance, Princeton, NJ	SIG-39220	1:500
anti-tau	Thermo Fisher Scientific	MN1020	1:500
anti-alpha-synuclein	Abcam	ab27766	1:500
anti-phospho-TDP43	Cosmo Bio Co.	TIP-PTD-P02	1:2000
Digital Camera	Any
Head Impulse Sealing machine	Grainger	5ZZ35