منهج في تقييم فعالية المبيدات الحشرية ضد سرير علة،<em&gt; البق الفراشي</em&gt; والبيض والأطوار الأولى

Summary

وكثيرا ما تستهدف تقييم المبيدات الحشرية ضد الحشرات البالغة، بدلا من المراحل غير ناضجة. هنا، نقدم بروتوكول لتقييم المبيدات الحشرية ضد البيض بق الفراش مع مقارنة لأول الحورية مرحلة بق الفراش. يمكن تعديل هذه البروتوكولات للحشرات أخرى لتقييم فعالية المبيدات الحشرية في مراحل الحياة غير البالغين.

Abstract

وتجرى عمليات تقييم سمية القياسية من المبيدات الحشرية ضد الآفات الحشرية في المقام الأول على الحشرات البالغة. تستند تقييمات على الاستجابة للجرعة أو منحنى التركيز على الاستجابة، حيث يتم زيادة ارتفاع وفيات كما الجرعة أو تركيز مبيد حشري. تركيز القياسية المميت (LC ₅₀₎ والجرعة القاتلة (LD ₅₀₎ الاختبارات التي تؤدي إلى نفوق 50٪ من السكان الاختبار يمكن أن يكون تحديا لتقييم سمية المبيدات الحشرية ضد مراحل حياة الحشرات غير البالغين، مثل البيض والطور المبكر أو مراحل الحورية . ومع ذلك، هذه المعلومات ضرورية لفهم فعالية المبيدات الحشرية في جميع مراحل الحياة بق الفراش، مما يؤثر على جهود مكافحة والعلاج. يستخدم هذا البروتوكول الأحيائي غمس القياسية المعدلة للبيض حشرة الفراش والاتصال الحشرات فحص لعلاج الأطوار الأولى الحورية. هذه المقايسات تنتج منحنى التركيز على الاستجابة لمواصلة تحديد LC ₅₀ قيم التقييمات الحشرات.

Introduction

بق الفراش هي آفة الحضرية الهامة التي يمكن أن تسبب فقدان الدم، تهيج الجلد، والأرق، والاكتئاب، والقلق في الجسم البشري المضيف في ^{1، 2، 3، 4، 5، 6.} تكاليف القضاء والسيطرة على بق الفراش مرتفعة وفي كثير من الأحيان تتطلب زيارات متعددة إلى المنزل من قبل شركة مكافحة الحشرات ^(7). هناك حاجة زيارات متعددة عادة بسبب سلوك خفي من بق الفراش والصعوبات المرتبطة قتلهم. على وجه الخصوص، بيض بق الفراش يصعب السيطرة عليها بسبب صغر حجمها وحماية الجنين من قشر البيض.

حاليا، وهي ممارسة شائعة للعديد من شركات مكافحة الآفات في جميع أنحاء الولايات المتحدة هي لعلاج منزل لبق الفراش باستخدام المبيدات الحشرية الكيميائية. ومن المعروف جيداأن البيض يصعب السيطرة عليها، الكثير من الشركات قد نفذت إطار زمني لمدة أسبوعين لإعادة العلاجات ^8. وهذا يسمح بيض بق الفراش ما يكفي من الوقت ليفقس، حتى أن الطور الأول سوف تظهر ويكون من الأسهل على قتل مع المبيدات الحشرية في الظاهر. ومع ذلك، هناك ندرة في الدراسات التي تقيم فعالية من المبيدات الحشرية السائلة ضد البيض بق الفراش والأطوار الأولى.

وقد تم توثيق بيض الحشرات لتكون مسرح الحياة أصعب للسيطرة على الآفات الحشرية في المناطق الحضرية، وغيرها من بق الفراش، بالإضافة إلى العديد من الآفات الزراعية. وقد نسبت معظم هذه الصعوبات إلى قشر البيض، في حين أن عدد قليل من الدراسات ذكرت مقاومة المبيدات الحشرية. وقد تم توثيق المقاومة في مرحلة البيض في الفسفس infestans ^9، قمل الرأس ^10، xylostella Plutella ^11، Rhyzopertha دومينيكا ^12، البق الفراشي ^13، ومتعددة الخنافس المنتجات المخزنة (أي Oryzaephilus surinamensis، كونفيوسم كاستانيم، Cryptolestes اأسجار وRhyzopertha دومينيكا). ¹⁴ تطور المقاومة في مرحلة البيض ومراحل غير ناضجة، وكذلك المضاعفات المرتبطة اختراق الحشرات من خلال قشر البيض، يتطلب الحاجة إلى اختبارات بيولوجية الحشرات فعالية ضد هذه المراحل الحياة.

يوفر هذا البروتوكول إجراء خطوة بخطوة لتحديد مدى فعالية من المبيدات الحشرية في مرحلة البيض والطور الأول من بق الفراش المشتركة، والبق الفراشي. كل من هذه البروتوكولات هي فحوصات التركيز والاستجابة للسماح الكمي لLC ₅₀ القيم. وتستخدم المقايسات تركيز استجابة شائعة للدراسات السمية، ومع ذلك فقد تم تكييف هذا البروتوكول لعلاج بسهولة مجموعات من البيض بق الفراش والأطوار الأولى. هذه المقايسات يمكن تكييفهاللحصول على البيض مختلف أنواع الحشرات "ومراحل حياة غير ناضجة.

Protocol

ملاحظة: يتضمن هذا البروتوكول تحليلين الحشرية لعلاج منفصل بيض حشرة الفراش والأطوار الأولى. أجريت كل من البروتوكولات باستخدام نفس المبيدات الحشرية، ومع ذلك، كان البروتوكولات يمكن تكييفها لضمان التعرض الحشرات وبسهولة التعامل مع العينات.

1. بيضة الغمس الحشرات الفحص

1. سحب تزاوج، تغذية جيدة الكبار بق الفراش الإناث من مستعمرة ووضع الإناث (10/05) في طبق بتري مع ورقة الترشيح. لديهم لا يقل عن عشرة مكررات لضمان أنه لن يكون هناك ما يكفي من البيض لفحص المبيدات الحشرية. تحقق لمعرفة ما إذا كانت الإناث قد وضعت البيض كل يوم.
   1. بمجرد وضع البيض، واتخاذ الإناث من طبق بتري (6 سم × 5 سم) ووضعها في أطباق بتري جديدة مع ورقة مرشح جديدة يوميا وتسجيل التاريخ على أطباق بتري القديمة والجديدة.
   2. السماح للبيض لعمر 4 إلى 5 أيام قبل البدء في الفحص. الحساسية للتغيرات المبيدات الحشرية أثناء التطور الجنيني، قس من المهم للسيطرة على عمر البيض. عقد كل مراحل الحياة في 00:12 L: D الضوئية، و 60٪ RH، و 27 درجة مئوية.
2. مرة واحدة البيض الذين تتراوح أعمارهم بين بشكل مناسب، وإزالة البيض علة السرير برفق من أوراق الترشيح باستخدام ملقط لينة طرف. كشط بلطف الجزء السفلي من البيض تعلق على ورقة الترشيح باستخدام ملقط وثم الاستيلاء بلطف دون الضغط كثيرا على البيض للحد من رمي البيض بق الفراش.
3. وضع إزالة البيض بق الفراش إلى مجموعات كل منها داخل أطباق بتري البلاستيكية. الحد من الكهرباء الساكنة من الرمي بيض بق الفراش عن طريق فرك أسفل كل طبق بيتري في الخارج مع ورقة المنقي النسيج. مجموعة علاج من البيض بق الفراش (5-10 بيضة في المجموعة) في كل مرة. النظر في مجموعة واحدة في تكرار واستخدام خمسة على الأقل (أو أكثر) يعيد لهذا الاختبار.
4. إعداد التخفيفات المسلسل من المبيدات الحشرية للحصول على مجموعة من 5 تركيزات مختلفة (0،21 حتي 21 ميكرولتر / مل لايميداكلوبريد (0.1٪) / β-سيفلوثرين (0.5٪) والتحكمالحل مع مذيب (مياه الصنبور) فقط. جعل 20 مل من كل التركيز أن يكون حجم يكفي للمقايسة غمس.
5. أنابيب قطع أجهزة الطرد المركزي (50 مل) في خط مل 35 إعلامي يستخدم أداة دوارة مع قطع الاكسسوار عجلة ثم قطع ثقب في الغطاء من أنبوب الطرد المركزي (قطر = 2.54 سم) باستخدام نفس أداة دوارة مع الألومنيوم أكسيد طحن التبعي حجر. ترك 5 سم على حافة الغطاء عندما قطع، حتى أن الحد الأقصى سوف المسمار بإحكام في أنبوب (الشكل 1).
6. قطع شبكة غرامة إلى مربعات كبيرة بما يكفي لتناسب الحد الأقصى (~ 5 سم ^2). المسمار شبكة بإحكام، والقضاء على أي المطبات، في أنابيب الطرد المركزي باستخدام غطاء أنبوب الطرد المركزي.
7. وضع مجموعة من البيض بق الفراش (مكررة واحدة) باستخدام فرشاة الطلاء على شبكة داخل أنبوب الطرد المركزي. تراجع مجموعة من بق الفراش داخل أنبوب قطع أجهزة الطرد المركزي إلى تركيز مبيدات الحشرات لمدة 5 ثوان.
8. إزالة أنبوب الطرد المركزي من الحل الحشرات الإلكترونية. تجفيف يتناغم مع البيض داخل عن طريق وضع أنبوب الطرد المركزي مباشرة على الأنسجة في المختبر.
9. إزالة مجموعة من البيض من أنبوب الطرد المركزي باستخدام صغيرة، ودفع غرامة شعيرات فرشاة الدهان ووضعها في طبق بيتري نظيفة مع ورقة نظيفة التصفية.
10. وكان معدل وفيات البيض سجل (عدم تفقس) لمدة 14 يوما لضمان كل البيض ما يكفي من الوقت ليفقس.
11. صحيح بالنسبة للوفيات في علاج للسيطرة على استخدام صيغة ابوت (٪ فيات اختبار - تحكم٪ فيات / 100 - فيات السيطرة × 100).
12. إدراج الوفيات المسجلة مع تركيز المناظرة في برامج التحليل ¹⁵ لحساب قيم LC _50.

2. الأولى الطور الحشرات الفحص

1. فصل مجموعة من بق الفراش تغذية جيدة (5 الذكور البالغين و 5 إناث الكبار)، ويفضل أن يتغذى قبل 1 يوم، ووضعها في طبق بيتري (6 سم × 5 سم) مع ورق الترشيح المنصوص عليها المتنز ووضع البيض. السماح للبق الفراش الكبار للتزاوج ووضع البيض لحوالي 7-9 أيام. بالنسبة للتغذية، استخدام نظام التغذية الاصطناعية التي تدور الماء الساخن في الأنابيب الزجاجية المحيطة الدم ^16. لهذه الدراسة، استخدم defibronated الدم أرنب.
2. إزالة البالغين من أطباق بتري (6 سم × 5 سم) والسماح للفقس البيض في الأطوار الأولى داخل أطباق بتري. يستغرق حوالي 7-9 أيام للبيض بق الفراش ليفقس في درجة حرارة الغرفة.
3. جمع الأطوار الأولى unfed من نفس الفئة العمرية باستخدام فرشاة الطلاء. العمر يمكن تحديده من خلال إزالة الأطوار الأولى يوميا وتسجيل اليوم فقست. وضعها في أطباق بتري نظيفة الجديدة حتى فحص المبيدات الحشرية. حوريات العمر الأول ليست مقاومة المجففة جدا، لذلك يجب أن يتم الانتهاء من فحص المبيدات الحشرية في أقرب وقت ممكن.
4. للمقايسة، وإعداد التخفيفات المسلسل ايميداكلوبريد / β-سيفلوثرين للحصول على مجموعة من 5 تركيزات مختلفة والسيطرة على المحاليلنشوئها مع المذيب فقط. واستخدمت المنتجات المركبة وصفت للسيطرة على بق الفراش في الولايات المتحدة لهذه الدراسات، لذلك كان المذيب المياه (وفقا للتسمية).
5. ماصة 150 مكل من كل تركيز المبيدات الحشرية والمياه لمجموعة المراقبة على أوراق الترشيح الفردية (# 1؛ 4.2 سم القطر). توزيع المبيدات الحشرية على ورقة الترشيح بأكملها باستخدام pipetter عن طريق تطبيق قطرات حول حافة كامل ومركز ورقة الترشيح.
6. وضع أوراق الترشيح تعامل بشكل فردي على قمة الألواح ألواح الفردية (7 سم ^2).
7. مجموعة الافراج عن الأطوار الأولى (5-10 لكل مجموعة) على أوراق الترشيح الفردية في حين لا تزال مبللة بالمبيدات الحشرية وتغطية أول أطوار مع أسفل المقلوب طبق بيتري.
8. وضع الوزن على الجزء العلوي من طبق بيتري لمنع الأولى بق الفراش الطور من الهرب من سطح المعالجة.
9. وفيات سجل أول البق الطور السرير بعد تعرض 24 ساعة لجميعتركيزات المبيدات الحشرية.
10. صحيح بالنسبة للوفيات في علاج للسيطرة على استخدام صيغة ابوت (٪ فيات اختبار - تحكم٪ فيات / 100 - فيات السيطرة × 100).
11. إدراج الوفيات وتركيزات المسجلة في برامج التحليل ¹⁵ لحساب قيم LC _50.

النتائج

وقد انخفض البيض في 5 تركيزات مختلفة من ايميداكلوبريد / β-سيفلوثرين (ميكرولتر / مل). وضعت الأطوار الأولى على الأسطح المعالجة من خمسة تركيزات مختلفة من ايميداكلوبريد / β-سيفلوثرين (الشكل 2).

Discussion

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri dishes	Fisher Scientific Inc.	08-757-105	Plastic
Filter paper	Whatman	1001-042
Featherweight forceps	Fisher Scientific Inc.	4750
Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)	Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)	FMC Corp.
Centrifuge tube		06-443-18	50 mL; flat-top threaded
Fine mesh		7250C
KimWipe		06-666A	11 cm X 21 cm
Small paint brush			Any small paint brush
Hardboard panels			Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store
Metal weights			Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface