Um método para avaliar Inseticida Eficácia contra Bed Bug,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, Ovos e primeiros estádios

Resumo

avaliações de inseticidas são muitas vezes alvo contra insetos adultos, em vez de estágios imaturos. Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar inseticidas contra ovos de percevejos com uma comparação à primeira fase de percevejos de ninfa. Estes protocolos pode ser modificada para outros insetos para avaliar a eficácia do inseticida nas fases da vida não-adultos.

Resumo

avaliações de toxicidade padrão de inseticidas contra pragas de insetos são realizados principalmente em insetos adultos. As avaliações baseiam-se em uma dose-resposta ou a curva de resposta à concentração, em que a mortalidade aumenta à medida que a dose ou concentração de um insecticida é aumentada. Concentração padrão letal (LC ₅₀₎ e dose letal (LD ₅₀₎ testes que resultam em mortalidade de 50% de uma população de teste pode ser um desafio para avaliação da toxicidade de inseticidas contra não-adultos fases da vida de insetos, como ovos e instar cedo ou estágios de ninfa . No entanto, esta informação é essencial para compreender a eficácia inseticida em todas as fases da vida de percevejos, o que afeta os esforços de controle e tratamento. Este protocolo usa um bioensaio de imersão padrão modificado para ovos de percevejos e um ensaio de insecticida de contacto para o tratamento de ninfa primeiros estádios. Estes ensaios de produzir uma curva de concentração-resposta para a quantificação de LC ₅₀ valores para as avaliações insecticidas.

Introdução

Percevejos são uma praga urbana significativo que pode causar perda de sangue, irritações da pele, insônia, depressão e ansiedade em seus hospedeiros humanos ^{1, 2, 3, 4, 5, 6.} Os custos de eliminação e controle de percevejos são altos e muitas vezes requerem múltiplas visitas a uma casa por uma empresa de controle de pragas ^7. Várias visitas são geralmente necessários por causa do comportamento críptico de percevejos e as dificuldades associadas a matá-los. Em particular, os ovos de percevejos são difíceis de controlar por causa de seu pequeno tamanho e à protecção do embrião com a casca de ovo.

Atualmente, uma prática comum para muitas empresas de controle de pragas em todo os Estados Unidos é tratar uma casa para percevejos usando um inseticida químico. É bem conhecidoque os ovos são difíceis de controlar, por isso muitas empresas têm implementado um prazo de duas semanas para re-tratamentos ^8. Isso permite que os ovos de percevejos tempo suficiente para chocar, de modo que o primeiro instar surgirão e supostamente mais fácil de matar com inseticidas. No entanto, há uma escassez de estudos que avaliam a eficácia de inseticidas líquidos contra ovos de percevejos e primeiros estádios.

ovos de insectos têm sido documentada para ser o estágio de vida mais difícil de controlar pragas de insectos em urbanos, com excepção dos percevejos, para além de muitas pragas agrícolas. A maioria destas dificuldades têm sido atribuídas a casca do ovo, enquanto alguns estudos têm relatado resistência a inseticidas. A resistência na fase de ovo tem sido documentada em Triatoma infestans ^9, Pediculus humanus capitis ^10, Plutella xylostella ^11, Rhyzopertha dominica ^12, Cimex lectularius ^13, e vários besouros produtos armazenados (ou seja Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus e Rhyzopertha dominica). ¹⁴ O desenvolvimento de resistência na fase de ovo e estágios imaturos, bem como complicações associadas com insecticida penetração através da casca do ovo, exige a necessidade de bioensaios de eficácia insecticida contra estas fases da vida.

Este protocolo prevê um procedimento passo-a-passo para determinar a eficiência de inseticidas no ovo e primeiro instar fase de percevejos comuns, Cimex lectularius. Ambos estes protocolos são ensaios de resposta à concentração para permitir a quantificação dos valores de LC _50. ensaios de concentração-resposta são comumente usados ​​para estudos toxicológicos, no entanto, este protocolo foi adaptado para facilmente tratar grupos de ovos de percevejos e primeiros estádios. Estes ensaios podem ser adaptadospara os ovos de várias das espécies de insetos e fases da vida imaturas.

Protocolo

NOTA: Este protocolo inclui dois ensaios de insecticida para tratar separadamente os ovos de percevejos e primeiros estádios. Ambos os protocolos foram realizados utilizando as mesmas insecticidas, no entanto, os protocolos tiveram que ser adaptadas para garantir a exposição insecticida e para manipular facilmente as amostras.

Ensaio 1. Egg Dipping Inseticida

1. Puxe acasaladas, bem alimentados adultos do sexo feminino percevejos de uma colónia e coloque as fêmeas (5-10) em uma placa de Petri com papel de filtro. Ter pelo menos dez repetições para garantir que não haverá ovos suficientes para o ensaio de insecticida. Verifique se as fêmeas colocaram ovos todos os dias.
   1. Uma vez que eles põem ovos, tomar as fêmeas para fora da placa de Petri (6 centímetros x 5 cm) e colocá-los em novas placas de Petri com um novo papel de filtro diariamente e registrar a data em antigos e novos pratos de Petri.
   2. Permitir que os ovos à idade 4 a 5 dias antes de iniciar o ensaio. Suscetibilidade a inseticidas mudanças durante o desenvolvimento embrionário, sO que é importante para controlar a idade de ovo. Mantenha todas as fases da vida às 12:12 L: D fotoperíodo, 60% RH e 27 ° C.
2. Uma vez que os ovos têm idade apropriada, retire os ovos de percevejos suavemente de papéis de filtro usando uma pinça soft-ponta. Raspe o fundo do ovo ligado ao papel de filtro usando a pinça e em seguida, pegue delicadamente sem aplicar muita pressão sobre o ovo para limitar atirando ovos de percevejos.
3. Coloque os ovos de percevejos removidos em seus respectivos grupos no interior de pratos de plástico de Petri. Limitar a eletricidade estática de arremessar ovos de percevejos, esfregando a parte inferior de cada placa de Petri no exterior com uma folha de amaciante de roupas. grupos Tratar de ovos de percevejos (5-10 ovos por grupo) de uma vez. Considere um grupo idêntico e usar, pelo menos, cinco (ou mais) replica para este ensaio.
4. Preparar diluições em série dos insecticidas para obter uma gama de concentrações diferentes (5 mL 0,21-21 / mL para imidacloprid (0,1%) / β-ciflutrina (0,5%) e um controlesolução com o solvente (água da torneira) somente. Adicione 20 mL de cada concentração a ter volume suficiente para o ensaio de imersão.
5. tubos de corte de centrifugação (50 mL) na linha 35 mL medialmente usando uma ferramenta rotativa com um cut-off de acessórios de rodas e, em seguida, cortado um furo na tampa do tubo de centrífuga (diâmetro = 2,54 cm) utilizando a mesma ferramenta rotativa com um alumínio óxido de moagem acessório pedra. Deixar 5 cm na borda da tampa durante o corte, de modo que a tampa de maneira segura, o parafuso para dentro do tubo (Figura 1).
6. Corte de malha fina em quadrados grandes o suficiente para caber dentro da tampa (~ 5 ^cm2). Parafuso a malha firmemente, eliminando todas as colisões, para os tubos de centrifugação usando a tampa de tubo de centrífuga.
7. Coloque um grupo de ovos de percevejos (uma repetição) usando um pincel sobre a malha no interior do tubo de centrifugação. Mergulhar o grupo de percevejos no interior do tubo de centrífuga de corte para uma concentração de insecticida durante 5 segundos.
8. Retire o tubo de centrífuga fora do thsolução de inseticida e. Seca-se a malha, com os ovos no interior, colocando o tubo de centrifugação directamente sobre um tecido de laboratório.
9. Remova o grupo de ovos para fora do tubo de centrifugação usando um pequeno, fino cerdas pincel e colocá-los em uma placa de Petri limpa com um papel de filtro limpo.
10. a mortalidade de ovos Record (falha para chocar) durante 14 dias para garantir que todos os ovos tiveram tempo suficiente para eclodir.
11. Correcta para a mortalidade no tratamento de controle usando a fórmula de Abbott (mortalidade teste% - controle% de mortalidade / 100 - mortalidade dos controlos x 100).
12. Inserir a mortalidade registada com as concentrações correspondentes para o software de análise de ¹⁵ para calcular os valores de LC _50.

Ensaio 2. primeiro instar Inseticida

1. Separar um grupo de percevejos bem alimentados (5 machos adultos e 5 fêmeas adultas), de preferência alimentado um dia antes, e colocá-los em uma placa de Petri (6 centímetros x 5 cm) com papel de filtro prevista mating e a postura de ovos. Permitir que os insetos adultos de cama para acasalar e pôr ovos durante cerca de 7-9 dias. Para a alimentação, use um sistema de alimentação artificial que circula água quente em tubos de vidro que cercam sangue ^16. Para este estudo, utilize sangue de coelho defibronated.
2. Retire os adultos das placas de Petri (6 cm × 5 cm) e permita que os ovos eclodem em primeiros estádios dentro das placas de Petri. Demora cerca de 7-9 dias para os ovos de percevejos para chocar à temperatura ambiente.
3. Recolher os primeiros estádios em jejum da mesma idade usando um pincel. A idade pode ser determinada através da remoção dos primeiros instares diário e registar o dia em que eclodiram. Coloque-os em novos, pratos limpos Petri até o ensaio de inseticida. Primeiros ninfas não são muito resistentes dessecante, então o ensaio de inseticida deve ser concluída o mais rapidamente possível.
4. Para o ensaio, preparar diluições em série de imidacloprid / β-ciflutrina para obter uma gama de concentrações de 5 diferentes e um controlo Solução apenas com dissolvente. produtos formulados marcadas para o controle de percevejos nos Estados Unidos foram utilizados para estes estudos, portanto, o solvente foi água (de acordo com o rótulo).
5. Pipetar alíquotas de 150 ul de cada concentração de insecticida e água para o grupo de controlo para papel de filtro individuais (# 1, 4.2 cm de diâmetro). Distribuir o insecticida ao longo de todo o papel de filtro utilizando a pipeta através da aplicação de gotas ao redor de toda a borda e do centro do papel de filtro.
6. Coloque os papéis de filtro tratados individualmente em cima de painéis de chapas de fibra individuais (7 cm ^2).
7. grupos de libertação de primeiros estádios (5 a 10 por grupo) para a papéis de filtro individuais enquanto ainda molhado com inseticida e cobrir os primeiros estádios com um fundo invertido de uma placa de Petri.
8. Coloque um peso no topo da placa de Petri para evitar que os primeiros percevejos instar de escapar da superfície tratada.
9. mortalidade recorde de primeiros percevejos instar após 24 h de exposição a todosconcentrações inseticida.
10. Correcta para a mortalidade no tratamento de controle usando a fórmula de Abbott (mortalidade teste% - controle% de mortalidade / 100 - mortalidade dos controlos x 100).
11. Insira a mortalidade e as concentrações registradas no software de análise de ¹⁵ para calcular LC ₅₀ valores.

Resultados

Os ovos foram imersas em 5 diferentes concentrações de imidacloprid / β-ciflutrina (uL / mL). Os primeiros instares foram colocados sobre superfícies tratadas de cinco concentrações diferentes de imidacloprid / β-ciflutrina (Figura 2).

Foram utilizados três diferentes populações de C. lectularius: Harlan, Richmond, e épico Center (Tabela 1). A cepa Harlan é su...

Discussão

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri dishes	Fisher Scientific Inc.	08-757-105	Plastic
Filter paper	Whatman	1001-042
Featherweight forceps	Fisher Scientific Inc.	4750
Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)	Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)	FMC Corp.
Centrifuge tube		06-443-18	50 mL; flat-top threaded
Fine mesh		7250C
KimWipe		06-666A	11 cm x 21 cm
Small paint brush			Any small paint brush
Hardboard panels			Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store
Metal weights			Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface