Une méthode d&#39;évaluation de l&#39;efficacité des insecticides contre les punaises de lit,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, Les œufs et les premiers stades

Résumé

Les évaluations d'insecticides sont souvent ciblés contre les insectes adultes, plutôt que les stades immatures. Ici, nous présentons un protocole d'évaluation des insecticides contre lit les œufs de bugs avec une comparaison à la première étape de la punaise de lit nymphal. Ces protocoles pourraient être ajustés pour d'autres insectes pour évaluer l'efficacité des insecticides dans les stades de la vie non-adultes.

Résumé

évaluations de toxicité standard d'insecticides contre les insectes ravageurs sont menées principalement sur les insectes adultes. Les évaluations sont basées sur une relation dose-réponse ou d'une courbe de concentration-réponse, où l'augmentation de la mortalité de la dose ou à la concentration d'un insecticide est augmentée. Concentration standard létale (CL ₅₀₎ et la dose létale (DL ₅₀₎ Tests qui se traduisent par une mortalité de 50% d'une population d'essai peut être difficile pour évaluer la toxicité des insecticides contre la non-adultes stades de vie des insectes, tels que les œufs et du premier stade ou stades larvaires . Toutefois, cette information est essentielle pour comprendre l'efficacité des insecticides à tous les stades de la vie de punaises de lit, ce qui affecte les efforts de contrôle et de traitement. Ce protocole utilise un bioessai de trempage standard modifié pour les oeufs de punaises de lit et un essai insecticide de contact pour traiter larvaires premiers stades. Ces essais produisent une courbe de concentration-réponse afin de mieux quantifier CL ₅₀ pour les évaluations d'insecticide.

Introduction

Les punaises de lit sont un ravageur urbain important qui peut causer la perte de sang, irritations de la peau, l' insomnie, la dépression et l' anxiété chez leurs hôtes humains ^{1, 2, 3, 4, 5, 6.} Les coûts d'élimination et de contrôle des punaises de lit sont élevés et souvent nécessitent plusieurs visites dans une maison par une entreprise de lutte antiparasitaire ^7. Plusieurs visites sont habituellement nécessaires en raison du comportement cryptique des punaises de lit et les difficultés associées à les tuer. En particulier, les œufs de punaises de lit sont difficiles à contrôler en raison de leur petite taille et de la protection de l'embryon par la coquille.

À l'heure actuelle, une pratique courante pour de nombreuses entreprises de lutte antiparasitaire à travers les États-Unis est de traiter une maison pour les punaises de lit à l'aide d'un insecticide chimique. C'est bien connuque les oeufs sont difficiles à contrôler, tant d'entreprises ont mis en place un délai de deux semaines pour re-traitements ^8. Cela permet à des oeufs de punaises de lit suffisamment de temps pour éclore, de sorte que le premier stade larvaire émergera et prétendument plus facile de tuer avec des insecticides. Cependant, il y a une pénurie dans les études évaluant l'efficacité des insecticides liquides contre lit oeufs de bugs et premiers stades.

Les œufs d'insectes ont été documentés pour être l'étape la plus difficile de la vie à contrôler dans les insectes nuisibles urbains, autres que les punaises de lit, en plus de nombreux ravageurs agricoles. La plupart de ces difficultés ont été attribués à la coquille, tandis que quelques études ont rapporté la résistance aux insecticides. Résistance dans le stade de l' œuf a été documentée dans Triatoma infestans ^9, Pediculus humanus capitis ^10, Plutella xylostella ^11, Rhyzopertha dominica ^12, Cimex lectularius ^13, et plusieurs coléoptères de produits stockés (c. -à- Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus et Rhyzopertha dominica). ¹⁴ Le développement d' une résistance au stade de l' oeuf et les stades immatures, ainsi que des complications associées à la pénétration de l' insecticide à travers la coquille d' oeuf, nécessite le besoin d'efficacité insecticide contre ces essais biologiques stades de développement .

Ce protocole prévoit une procédure étape par étape pour déterminer l'efficacité des insecticides dans le stade de punaises de lit commun œuf et premier stade larvaire, Cimex lectularius. Ces deux protocoles sont des tests de concentration-réponse pour permettre la quantification des valeurs de CL _50. dosages concentration-réponse sont couramment utilisés pour les études toxicologiques, mais ce protocole a été adapté pour traiter facilement des groupes de lit oeufs de bugs et premiers stades. Ces essais peuvent être adaptéspour les œufs d'espèces différentes d'insectes et les stades immatures.

Protocole

NOTE: Ce protocole comprend deux essais d'insecticide pour traiter séparément les oeufs de punaises de lit et les premiers stades. Les deux protocoles ont été réalisés en utilisant les mêmes insecticides, cependant, les protocoles devaient être adaptés pour assurer une exposition aux insecticides et de manipuler facilement les spécimens.

1. Egg Tremper Insecticide Assay

1. Tirez accouplées, bien nourris femelles adultes punaises de lit à partir d'une colonie et placer les femelles (5-10) dans une boîte de Pétri avec du papier filtre. Avoir au moins dix répétitions pour assurer qu'il y aura suffisamment d'oeufs pour le dosage de l'insecticide. Vérifiez si les femelles ont pondu des oeufs chaque jour.
   1. Une fois qu'ils pondent des œufs, prendre les femelles de la boîte de Pétri (6 cm x 5 cm) et les mettre dans de nouvelles boîtes de Pétri avec un nouveau papier filtre tous les jours et enregistrer la date sur les anciens et les nouveaux boîtes de Pétri.
   2. Laisser les œufs à l'âge de 4 à 5 jours avant de commencer le test. Susceptibilité aux insecticides changements au cours du développement embryonnaire, so il est important de contrôler l'âge de l'oeuf. Maintenez toutes les étapes de la vie à 12h12 L: D photopériode, 60% d'humidité relative et 27 ° C.
2. Une fois les oeufs ont vieilli de manière appropriée, retirer les oeufs de punaises de lit doucement de papiers filtres en utilisant une pince souple à pointe. racler délicatement le fond de l'œuf attaché au papier filtre à l'aide de la pince, puis saisir en douceur, sans appliquer beaucoup de pression sur l'œuf pour limiter lit lancer des œufs d'insectes.
3. Placez les oeufs de punaises des lits supprimés dans leurs groupes respectifs à l'intérieur de boîtes en plastique de Pétri. Limitez l'électricité statique de jeter des oeufs de punaises de lit en frottant le fond de chaque boîte de Pétri à l'extérieur avec une feuille d'assouplissant textile. Traiter les groupes d'œufs de punaises de lit (5-10 œufs par groupe) à la fois. Considérons un groupe une réplique et d'utiliser au moins cinq (ou plus) répétitions pour cet essai.
4. Préparer des dilutions en série d'insecticides pour obtenir une gamme de 5 différentes concentrations (0,21 à 21 ul / ml pour l'imidaclopride (0,1%) / β-cyfluthrine (0,5%) et un contrôlesolution avec un solvant (eau du robinet) seulement. Faire 20 ml de chaque concentration d'avoir un volume suffisant pour l'essai de trempage.
5. tubes Cut de centrifugeuse (50 ml) à la ligne de 35 mL médiale en utilisant un outil rotatif avec un accessoire de meule de tronçonnage puis découper un trou dans le bouchon du tube de centrifugeuse (diamètre = 2,54 cm) en utilisant le même outil rotatif avec un aluminium oxyde de broyage accessoire de pierre. Laisser 5 cm sur le bord de la capsule lors de la coupe, de sorte que le capuchon solidement visser dans le tube (Figure 1).
6. Couper maille fine en carrés assez grands pour entrer dans le capuchon (~ 5 ² cm). Vissez le maillage serré, ce qui élimine les bosses, dans les tubes de centrifugation en utilisant le bouchon du tube de centrifugeuse.
7. Placez un groupe de lit oeufs de bugs (une répétition) à l'aide d'un pinceau sur le maillage à l'intérieur du tube de centrifugeuse. Trempez le groupe de punaises de lit à l'intérieur du tube de centrifugeuse coupée dans une concentration insecticide pendant 5 secondes.
8. Retirez le tube de centrifugation sur thsolution insecticide e. Sécher le maillage avec les œufs à l'intérieur en plaçant le tube de centrifugeuse directement sur un tissu de laboratoire.
9. Retirez le groupe d'œufs hors du tube de centrifugeuse en utilisant une petite, fine poils pinceau et placez-les dans une boîte de Pétri propre avec un papier filtre propre.
10. la mortalité des oeufs d'enregistrement (échec à éclore) pendant 14 jours pour que tous les oeufs ont eu suffisamment de temps pour éclore.
11. Correct pour la mortalité dans le traitement de contrôle en utilisant la formule d'Abbott (mortalité% test - contrôle de la mortalité% / 100 - mortalité des témoins x 100).
12. Insérez la mortalité enregistrée avec les concentrations correspondantes dans le logiciel d'analyse ¹⁵ pour calculer LC ₅₀ valeurs.

2. Tout d'abord Instar Insecticide Assay

1. Séparer un groupe de punaises de lit bien nourris (5 mâles adultes et 5 femelles adultes), de préférence introduit 1 jour avant, et les placer dans une boîte de Pétri (6 cm x 5 cm) avec du papier filtre prévu mating et la ponte. Laisser les punaises de lit adulte pour s'accoupler et pondent des œufs pendant environ 7-9 jours. Pour l' alimentation, utiliser un système d'alimentation artificielle qui fait circuler l' eau chaude dans des tubes de verre de sang ¹⁶ environnantes. Pour cette étude, utiliser du sang de lapin defibronated.
2. Retirez les adultes des boîtes de Pétri (6 cm x 5 cm) et laisser les œufs éclosent en larves du premier stade dans les boîtes de Pétri. Il faut environ 7-9 jours pour les oeufs de punaises de lit éclosent à la température ambiante.
3. Recueillir les vésiculés premiers stades du même âge à l'aide d'un pinceau. L'âge peut être déterminée en retirant les premiers stades d'enregistrement par jour et le jour où ils ont éclos. Placez-les dans de nouveaux plats propres Pétri jusqu'à ce que le dosage de l'insecticide. Les nymphes du premier stade ne sont pas très déshydratant résistant, de sorte que le dosage de l'insecticide devrait être achevée le plus tôt possible.
4. Pour le dosage, préparer des dilutions en série de l'imidaclopride / β-cyfluthrine pour obtenir une gamme de 5 concentrations différentes et un contrôle solution avec un solvant seulement. Formulé produits étiquetés pour le contrôle des punaises de lit dans les Etats-Unis ont été utilisées pour ces études, donc le solvant est de l'eau (selon l'étiquette).
5. Des aliquotes de pipette 150 ul de chaque concentration en insecticide et de l'eau pour le groupe témoin sur des papiers filtrants individuels (# 1; 4,2 cm de diamètre). Distribuer l'insecticide sur le papier filtre entier à l'aide de la pipette en appliquant des gouttelettes autour de tout le bord et le centre du papier filtre.
6. Placez les papiers filtres traités individuellement au - dessus des panneaux rigides individuels (7 cm ^2).
7. groupes de sortie de premiers stades (5 à 10 par groupe) sur les papiers filtres individuels tout en humide avec un insecticide et couvrir les premiers stades avec un fond inversé d'une boîte de Pétri.
8. Placez un poids sur le dessus de la boîte de Pétri pour empêcher les premiers punaises de lit larvaires de fuir la surface traitée.
9. mortalité record de premières punaises de lit larvaire après 24 h d'exposition à tousconcentrations d'insecticides.
10. Correct pour la mortalité dans le traitement de contrôle en utilisant la formule d'Abbott (mortalité% test - contrôle de la mortalité% / 100 - mortalité des témoins x 100).
11. Insérez la mortalité et les concentrations enregistrées dans le logiciel d'analyse ¹⁵ pour calculer LC ₅₀ valeurs.

Résultats

Les oeufs ont été plongés dans 5 différentes concentrations d'imidaclopride / β-cyfluthrine (ul / ml). Les premiers stades ont été placées sur les surfaces traitées des cinq concentrations différentes de l' imidaclopride / β-cyfluthrine (figure 2).

Nous avons utilisé trois populations différentes de C. lectularius: Harlan, Richmond, et Epic Center (tableau 1)....

Discussion

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri dishes	Fisher Scientific Inc.	08-757-105	Plastic
Filter paper	Whatman	1001-042
Featherweight forceps	Fisher Scientific Inc.	4750
Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)	Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)	FMC Corp.
Centrifuge tube		06-443-18	50 mL; flat-top threaded
Fine mesh		7250C
KimWipe		06-666A	11 cm x 21 cm
Small paint brush			Any small paint brush
Hardboard panels			Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store
Metal weights			Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface