Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

İnsektisit değerlendirmeler genellikle yetişkin böcekler yerine olgunlaşmamış aşamalarında karşı hedeflenir. Burada, ilk nimf yatak böcek aşamasına bir karşılaştırma ile yatak hata yumurta karşı böcek değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu protokoller, yetişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğini değerlendirmek için başka böcekler için ayarlanabilir.

Özet

Böcek zararlılarına karşı böcek standart toksisite değerlendirmeleri öncelikle yetişkin böcekler üzerinde yapılmaktadır. Değerlendirme bir doz veya bir insektisit konsantrasyonu mortalite de artar bir doz-yanıt veya konsantrasyon-tepki eğrisi, dayanmaktadır. Standart öldürücü konsantrasyon (LC 50) ve öldürücü doz (LD 50) bir test nüfusun% 50 mortalite neden testler, yumurta ve erken instar veya nimf evrelerinde olarak yetişkin olmayan böcek yaşam evrelerinde karşı böcek, toksisitesini değerlendirmek için zor olabilir . Ancak bu bilgiler kontrol ve tedavi çalışmalarını etkileyen tüm yatak böcek yaşam evrelerinde insektisit etkinliği, anlamak için çok önemlidir. Bu protokol yatak hata yumurta için modifiye standart daldırma biyoassay ve nimf ilk instars tedavisi için bir temas böcek öldürücü tahlil kullanır. Bu deneyler, daha insektisit değerlendirmeler için LC50 değerlerinin belirlenmesi için, bir konsantrasyon-yanıt eğrisi oluşturur.

Giriş

Yatak hataların insan konaklar 1, 2, 3, 4, 5, 6 kan kaybı, cilt tahrişleri, uykusuzluk, depresyon, ve anksiyete neden olabilir önemli bir kentsel haşere vardır. Yatak hataların ortadan kaldırılması ve kontrol maliyetleri yüksek ve çoğu kez bir haşere kontrol firması 7 tarafından bir eve birden fazla ziyaret gerektirir. Birden fazla ziyaret nedeniyle genellikle yatak hataların şifreli davranış ve onları öldürerek ile ilişkili zorluklar gereklidir. Özellikle, yatak böcek Yumurtalar, küçük boyutları ve yumurta kabuğu embriyo koruma kontrol etmek zordur.

Şu anda, Amerika Birleşik Devletleri boyunca birçok haşere kontrol şirketleri için ortak bir uygulama, bir kimyasal böcek ilacı kullanan yatak böcek için bir ev tedavi etmektir. BilindikYumurta kontrol etmek zor olduğunu, bu nedenle birçok şirket yeniden tedaviler 8 için iki haftalık bir zaman diliminde hayata geçirdik. İlk evre ortaya ve ileri sürülen böcek ile öldürmek daha kolay olacak, böylece bu yatak böcek yumurta yumurtadan için yeterli zaman sağlar. Ancak, yatakta böcek yumurta ve ilk instars karşı sıvı insektisitlerin etkinliğini değerlendiren çalışmalarda bir eksiklik olduğunu.

Böcek yumurtaları birçok tarım zararlılarının yanı sıra, yatak hataların dışında kentsel böcek zararlılarına kontrol edilmesi en zor yaşam evresi olmak belgelenmiştir. birkaç çalışma insektisit direnci rapor ederken, bu zorlukların çoğu, yumurta kabuğu atfedilmiştir. Yumurta aşamasında direnç, Plutella 11 xylostetla 10 capitis Triatoma infestans 9 Pediculus humanus içinde Rhyzopertha Dominica 12 belgelenmiştir Cımex lectularius 13, ve birden fazla depolanmış ürün böcekleri (yani Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus ve Rhyzopertha dominica). 14 kabuğu ile insektisit penetrasyonu ile ilişkili yumurta aşamasında ve olgunlaşmamış aşamaları yanı sıra komplikasyonlar direnç gelişimi, bu yaşam evrelerinde karşı insektisit etkinliği biyoanalizlere ihtiyacını zorunlu kılmaktadır.

Bu protokol ortak yatak hataların yumurta ve birinci instar aşamasında insektisit etkinliğini belirlemek için bir adım-adım yordam sağlar, Cımex lectularius. Bu protokollerin iki LC50 değerlerinin miktarını belirlemek için konsantrasyon-yanıt deneyleri bulunmaktadır. Konsantrasyon-tepki deneyleri genellikle, ancak bu protokolü kolay yatak böcek yumurta ve birinci instars grupları tedavi etmek için adapte edilmiştir, toksikolojik çalışmalar için kullanılmıştır. Bu deneyler, uyarlanabilirÇeşitli böcek türlerin yumurta ve olgunlaşmamış yaşam evrelerinde.

Protokol

NOT: Bu protokol ayrıca yatak böcek yumurta ve ilk instars tedavisi için iki insektisit testlerini içerir. Her iki protokol aynı böcek kullanılarak yapılmıştır, ancak protokoller insektisit pozlama sağlamak ve kolayca örnekleri işlemek için adapte edilmesi gerekiyordu.

1. Yumurta Daldırma Böcek Deneyi

  1. Bir koloniden evlendirilen, iyi beslenmiş yetişkin dişi yatak hataların çekin ve filtre kağıdı ile bir Petri kabı içine dişileri (5-10) yerleştirin. insektisit tayini için yeterli yumurta var olmasını sağlamak için en az on çoğaltır var. kadın her gün yumurta koydu olmadığını kontrol edin.
    1. Onlar yumurtalarını sonra, Petri kabı (6 cm x 5 cm) dışında kadın almak ve günlük yeni bir filtre kağıdı ile yeni Petri kapları içine koydu ve eski ve yeni Petri kapları tarih kaydedin.
    2. Deneye başlamadan önce 5 gün 4 yaşına yumurta izin verin. embriyonik gelişim sırasında insektisitler değişikliklere duyarlılığı, so yumurta yaş için kontrol etmek önemlidir. D fotoperiyot,% 60 RH ve 27 ° C: 12:12 L tüm yaşam evrelerini tutun.
  2. Yumurta uygun yaş sonra, yumuşak uçlu forseps kullanılarak filtre kağıtları yavaşça yatak böcek yumurta kaldırmak. Yavaşça forseps kullanarak filtre kağıdı bağlı yumurta dibine vurma ve sonra yavaşça atma yatak böcek yumurtalarını sınırlamak için yumurta üzerine fazla baskı uygulamadan yakala.
  3. içinde plastik Petri yemekleri kendi grupları içinde kaldırılır yatak hata yumurta yerleştirin. Bir kumaş yumuşatıcı levha ile dışarıdan her Petri kabı alt sürterek bed bug yumurta flinging statik elektriği sınırlayın. tek seferde yatak böcek yumurtalarının muamele grupları (grup başına 5-10 yumurta). bir grup bir kopyalayan düşünün ve bu deney için çoğaltır en az beş (veya daha fazla) kullanın.
  4. 5 farklı konsantrasyonda (bir dizi elde etmek için insektisitlerin seri dilüsyonları Hazırlama 0,21-21 ul / ml imidakloprid (% 0.1) / β-siflutrin (% 0.5) ve kontrol içinÇözücü (musluk suyu) ile çözüm sadece. Daldırma deneyi için yeterli hacim, her bir konsantrasyonun 20 mL sağlayın.
  5. 35 mL çizgisinde Kesme santrifüj tüpleri (50 ml) medial bir kesme diski aksesuarı ile bir döner alet ve bir santrifüj tüpüne (çap = 2.54 cm) bir alüminyum ile aynı döner alet kap içine bir delik oksit taş aksesuarını taşlama. Kapağı sıkıca boru (Şekil 1) içine vida, böylece keserken kapağın kenarında 5 cm bırakın.
  6. Kap içine sığacak kadar büyük kareler halinde ince örgü Cut (~ 5 cm 2). santrifüj tüp kapağı kullanılarak santrifüj tüplerine, herhangi bir darbe ortadan kaldırarak, sıkıca örgü vidalayın.
  7. santrifüj tüpünün içine örgü üzerine boya fırçası kullanarak yatak böcek yumurta bir grup (bir çoğaltma) yerleştirin. 5 saniye boyunca bir insektisit konsantrasyonu içine kesilmiş santrifüj tüpünün içinde yatak hataların grup batırın.
  8. th dışında santrifüj tüpü çıkarıne insektisit çözüm. içinde bir laboratuvar doku üzerine doğrudan santrifüj tüpü yerleştirerek yumurta ile örgü kurulayın.
  9. Küçük, ince kıl boya fırçası kullanarak santrifüj tüpünün dışında yumurta grubu kaldırmak ve temiz bir filtre kağıdı ile temiz bir Petri Dish içine koyun.
  10. Tutanak yumurta ölüm bütün yumurtaları sağlamak için 14 gün boyunca (yumurtadan başarısızlık) yumurtadan için yeterli zaman vardı.
  11. Abbott formülü (-% kontrol mortalite / 100 - Kontrol ölüm x% 100 test mortalite) kullanarak kontrol tedavisinde mortalite için doğru.
  12. LC 50 değerleri hesaplamak için analiz yazılımı 15 içine gelen konsantrasyonları ile kaydedilen mortalite yerleştirin.

2. İlk Evre Böcek Deneyi

  1. tercihen 1 gün önce beslenen, iyi beslenmiş yatak böcek (5 yetişkin erkek ve 5 yetişkin kadın) bir grup ayırın ve matin için sağlanan filtre kağıdı ile bir Petri kabındaki (6 cm x 5 cm) içine koyung ve yumurtlama. yetişkin yatak böcek dostum ve yaklaşık 7-9 gün süreyle yumurtalarını bırakmak için izin verin. Beslenmesi için kan 16 çevreleyen cam tüplerde sıcak su dolaşır bir yapay besleme sistemi kullanın. Bu çalışma için, defibronated tavşan kanı kullanın.
  2. Petri gelen yetişkin (5 cm x 6 cm) çıkartın ve yumurta Petri içinde ilk instars içine yumurtadan izin verin. yatak hata yumurta, oda sıcaklığında yumurtadan için yaklaşık 7-9 gün sürer.
  3. Bir boya fırçası kullanılarak aynı yaştaki beslenmemiş ilk instars toplayın. Yaş onlar yumurtadan gün günlük ilk instars kaldırarak ve kayıt ile tespit edilebilir. insektisit tahlil kadar yeni, temiz Petri kapları içine koyun. insektisit tahlil kısa sürede tamamlanması gerektiğini, böylece ilk evre perileri, dayanıklı çok kurutucu değildir.
  4. Tahlil için, 5 farklı konsantrasyonda ve bir kontrol Solu bir dizi elde etmek için imidakloprid / p-siflutrin seri dilüsyonları hazırlanmasıSolvent yalnızca yon. Amerika Birleşik Devletleri yatak böcek kontrolü için etiketli formüle edilmiş ürünler, bu nedenle bir çözücü (etikete göre olan su) bu çalışmalar için kullanılmıştır.
  5. Pipet ayrı ayrı filtre kağıtları üzerine, kontrol grubunda her bir insektisit konsantrasyonu ile su ve 150 uL tam bölünen miktarları (# 1, 4.2 cm çapında). filtre kağıdı tüm kenarı ve merkezi etrafında damlacıkları uygulayarak pipetter kullanarak tüm filtre kağıdının üzerine insektisit dağıtın.
  6. Bireysel sunta paneller (7 cm 2) üstünde ayrı ayrı işlenmiş filtre kağıtları yerleştirin.
  7. durumdayken insektisit ile ıslak ve bir Petri tabağına ters bir alt birinci instars kapağı ayrı ayrı filtre kağıtları üzerine ilk instars salınımı grupları (grup başına 5 ila 10).
  8. işlenmiş yüzeyi kaçan ilk evre yatak hataların önlenmesi için Petri kabı üstünde bir ağırlık koyun.
  9. Tüm 24 saat maruz bırakıldıktan sonra ilk evre yatak hataların rekor ölüminsektisit konsantrasyonları.
  10. Abbott formülü (-% kontrol mortalite / 100 - Kontrol ölüm x% 100 test mortalite) kullanarak kontrol tedavisinde mortalite için doğru.
  11. LC 50 değerleri hesaplamak için analiz yazılımı 15 içine kaydedilen mortalite ve konsantrasyonları yerleştirin.

Sonuçlar

Yumurta imidakloprid / p-siflutrin 5 farklı konsantrasyonda (mL / mL) içine daldırılmıştır. İlk instars imidakloprid / p-siflutrin, beş farklı konsantrasyonda (Şekil 2) ile muamele edilen yüzeyler üzerinde yerleştirilmiştir.

Harlan, Richmond, ve Epic Merkezi (Tablo 1): Biz C. lectularius üç farklı popülasyonlar kullanılır. Harlan suşu piretroid insek...

Tartışmalar

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Biz seyreltme ve pestisit formülasyonu yardım için Molly stedfast teşekkür ederiz. Biz de deneysel tasarım ile ilgili yardım için probit analizi rehberliği için Troy Anderson ve Zachary Adelman teşekkür ederiz. Bu araştırma kısmen Entomoloji Vakfı ödülü ile ve Virginia Zararlı Yönetimi burs fonları tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Petri dishesFisher Scientific Inc.08-757-105Plastic
Filter paperWhatman1001-042
Featherweight forcepsFisher Scientific Inc.4750
Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)FMC Corp.
Centrifuge tube06-443-1850 mL; flat-top threaded
Fine mesh7250C
KimWipe06-666A11 cm X 21 cm
Small paint brushAny small paint brush
Hardboard panelsComposite wood or tile would be sufficient from a home improvement store
Metal weightsAny type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface

Referanslar

  1. Sabou, M., et al. Bed bugs reproductive life cycle in the clothes of a patient suffering from Alzheimer's disease results in iron deficiency anemia. Parasite. 20, (2013).
  2. Reinhardt, K., Kempke, D., Naylor, R. A., Siva-Jothy, M. T. Sensitivity to bites by the bedbug, Cimex lectularius. Med. Vet. Entomol. 23, 163-166 (2009).
  3. Leverkus, M., et al. Bullous allergic hypersensitivity to bed bug bites mediated by IgE against salivary nitrophorin. J. invest. entomol. 126, 91-96 (2006).
  4. Fletcher, C. L., Ardern-Jones, M. R., Hay, R. J. Widespread bullous eruption due to multiple bed bug bites. Clin. Exp. Dermatol. 27, 74-75 (2002).
  5. Pritchard, M. J., Hwang, S. W. Severe anemia from bedbugs. Can. Med. Assoc. J. 181, 287-288 (2009).
  6. Goddard, J., de Shazo, R. Psychological effects of bed bug attacks (Cimex lectularius L). Am. J. Med. 125, 101-103 (2012).
  7. Harlan, H. J. Bed bugs 101: the basics of Cimex lectularius. Am. Entomol. 52, 99-101 (2006).
  8. Pinto, L. J., Cooper, R., Kraft, S. K. . Bed Bug Handbook: The Complete Guide to Bed Bugs and Their Control. , (2007).
  9. Toloza, A. C., et al. Differential patterns of insecticide resistance in eggs and first instars of Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) from Argentina and Bolivia. J. Med. Entomol. 45, 421-426 (2008).
  10. Cueto, G. M., Zerba, E. N., Picollo, M. I. Evidence of pyrethroid resistance in eggs of Pediculus humanus capitis (Phthiraptera: Pediculidae) from Argentina. J. Med. Entomol. 45, 693-697 (2008).
  11. Ho, S. H., Goh, P. M. Deltamethrin as a potential ovicidal pyrethroid against Plutella xylostella L. Toxicol. let. 22, 161-164 (1984).
  12. Bell, C. H., Hole, B. D., Evans, P. H. The occurrence of resistance to phosphine in adult and egg stages of strains of Rhyzopertha dominica (F.)(Coleoptera: Bostrichidae). J. Stored Prod. Res. 13, 91-94 (1977).
  13. Campbell, B. E., Miller, D. M. Insecticide Resistance in Eggs and First Instars of the Bed Bug, Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae). Insects. 6, 122-132 (2015).
  14. Price, L. A., Mills, K. A. The toxicity of phosphine to the immature stages of resistant and susceptible strains of some common stored product beetles, and implications for their control. J. Stored Prod. Res. 24, 51-59 (1988).
  15. Robertson, J. L., Preisler, H. K., Russel, R. M. . PoloPlus: Probit and Logit Analysis User's Guide. , (2003).
  16. Montes, C., Cuadrillero, C., Vilella, D. Maintenance of a laboratory colony of Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae) using an artificial feeding technique. J. Med. Entomol. 39, 675-679 (2002).
  17. Brogdon, W. G., McAllister, J. C. Simplification of adult mosquito bioassays through use of time-mortality determinations in glass bottles. J. Am. Mosq. Control. Assoc. 14, 159-164 (1998).
  18. Katarzyna, K., Saddler, A., Koella, J. C. Effects of age and larval nutrition on phenotypic expression of insecticide-resistance in Anopheles mosquitoes. PLoS One. 8 (3), (2013).
  19. Outram, I. Factors affecting the resistance of insect eggs to sulphuryl fluoride-II: the distribution of sulphuryl-35 S fluoride in insect eggs after fumigation. J. Stored. Prod. Res. 3, 353-358 (1967).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

evre BilimleriSay 121ld r c konsantrasyon deneyinimfkonsantrasyon tepki dald rma C mex lectularius Insektisit

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır