تصنيع أجهزة ميكروفلويديك ثلاثي الأبعاد على الورق ليمونواسايس

Summary

نحن بالتفصيل طريقة لافتعال الأجهزة ميكروفلويديك ثلاثية الأبعاد الورقية لاستخدامها في تطوير المناعية. نهجنا في التجمع الجهاز هو نوع من متعدد الطبقات، والتصنيع مضافة. علينا أن نظهر المناعية شطيرة لتقديم نتائج تمثيلية لهذه الأنواع من الأجهزة الورقية.

Abstract

ورقة الفتائل السوائل بشكل مستقل بسبب العمل الشعري. من خلال الزخرفة ورقة مع الحواجز مسعور، نقل السوائل يمكن التحكم وتوجيه داخل طبقة من الورق. وعلاوة على ذلك، التراص طبقات متعددة من الورق منقوشة يخلق شبكات الموائع الدقيقة ثلاثية الأبعاد المتطورة التي يمكن أن تدعم تطوير المقايسات التحليلية وbioanalytical. أجهزة ميكروفلويديك الورقية وغير مكلفة، والمحمولة، وسهلة الاستخدام، ولا تحتاج إلى معدات خارجية للعمل. ونتيجة لذلك، فإنها تبشر كبيرة بوصفه منصة لتشخيص نقطة من الرعاية. من أجل تقييم فائدة والأداء التحليلي للأجهزة الورقية بشكل صحيح، يجب تطوير أساليب مناسبة لضمان صنعها هو تكرار للوعلى نطاق غير مناسبة للبيئة معملية. في هذه المخطوطة، وسيلة لافتعال يوصف بنية الجهاز العامة التي يمكن استخدامها لالمناعية الورقية. ونحن نستخدم شكل المنتجة لمواد مضافةز (متعدد الطبقات التصفيح) لإعداد الأجهزة التي تتكون طبقات متعددة من الورق المزخرفة ولاصق منقوشة. بالإضافة إلى يدل على الاستخدام السليم لهذه الأجهزة ميكروفلويديك ثلاثية الأبعاد الورقية مع المناعية لموجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (HCG)، وتناقش الأخطاء في عملية التصنيع التي قد تؤدي إلى فشل الجهاز. ونحن نتوقع هذا النهج لتصنيع أجهزة الورقية سوف تجد فائدة واسعة في تطوير التطبيقات التحليلية التي صممت خصيصا لإعدادات مورد محدود.

Introduction

ورقة متاح على نطاق واسع في مجموعة من الصيغ أو الدرجات، يمكن functionalized لضبط خصائصه، ويمكن نقل السوائل بشكل مستقل عن طريق عمل شعري أو فتل. إذا كان نمط ورقة بمادة مسعور (على سبيل المثال، مقاومة للضوء ¹ أو الشمع ^2)، وفتل من السوائل يمكن التحكم مكانيا داخل طبقة من الورق. على سبيل المثال، يمكن أن تكون موجهة لعينة المائية التطبيقية في عدد من مناطق مختلفة لتتفاعل مع الكواشف الكيميائية والكيميائية الحيوية المخزنة داخل الصحيفة. وقد أثبتت هذه الأجهزة ميكروفلويديك الورقية لتكون منبرا مفيدا لتطوير المقايسات التحليلية المحمولة وغير مكلفة ^{3، 4، 5، 6، 7.} وتشمل التطبيقات من أجهزة ميكروفلويديك الورقية التشخيص نقطة من الرعايةEF "> 8، رصد الملوثات البيئية ^9، كشف الأدوية المزورة ^10، والرعاية الصحية ضلت موضعها الصحيح (أو" الطب عن بعد ") في الموارد محدودة ضبط ^11.

طبقات متعددة من الورق المزخرف يمكن تجميعها في جهاز متكامل حيث المناطق المائية من طبقات المجاورة (أي فوق أو تحت) ربط لتشكيل شبكات الموائعية المستمرة التي المداخل والمخارج قد يكون مقرونا أو اليسار مستقلة. ¹² كل طبقة يمكن أن تشمل نمطا فريدا، والتي تمكن الفصل المكاني من الكواشف وفحوصات متعددة ليتم تنفيذها على جهاز واحد. الجهاز ميكروفلويديك الناتجة ثلاثي الأبعاد ليست فقط قادرة على فتل السوائل لتمكين المقايسات التحليلية (على سبيل المثال، وظيفة الكبد اختبارات ¹³ و كشف الكهروكيميائية من جزيئات صغيرة ^14)، ولكن يمكن أيضا سوبميناء عددا من الوظائف المتطورة (على سبيل المثال، صمامات ¹⁵ وبسيطة آلات ¹⁶⁾ مشتركة لنهج ميكروفلويديك التقليدية. الأهم من ذلك، لأن ورقة الفتائل السوائل عن طريق العمل الشعري، وهذه الأجهزة يمكن أن تعمل مع الحد الأدنى من الجهد من قبل المستخدم.

منذ يمكن تخزين الكواشف داخل بنية ثلاثية الأبعاد لجهاز الورقية والبروتوكولات المعقدة يمكن تخفيضها إلى إضافة واحدة من عينة المائية لجهاز. في الآونة الأخيرة، قدمنا ​​بنية الجهاز ثلاثية الأبعاد العامة التي يمكن استخدامها لتطوير المناعية الورقية باستخدام تقنية الشمع الطباعة لخلق طبقات المزخرفة. ^{17، 18} ركز على كيفية الجوانب المتصلة تصميم الجهاز عدد من طبقات مكدسة المستخدمة، تكوين طبقات، ونمط ميكروفلويديك التي تسيطر عليها شبكة في العام ثلاثي الأبعاد هذه الدراساتاألداء من المناعية. في نهاية المطاف، كنا قادرين على استخدام هذه القواعد تصميم لتسهيل التطور السريع للالمناعه المضاعفة ^19. في هذه المخطوطة، والمناعية وضعت سابقا لموجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (قوات حرس السواحل الهايتية، هرمون الحمل) ويستخدم ¹⁷ كمثال لتوضيح الاستراتيجيات التي وضعت لدينا لتجميع وتصنيع المناعية الورقية ثلاثية الأبعاد. وفقا لذلك، ونحن نركز على تجميع وتشغيل جهاز بدلا من تطوير فحص.

في المناعية شطيرة، وهو التنسيق المستخدم للكشف عن قوات حرس السواحل الهايتية، الأجسام المضادة القبض محددة لالمغلفة فرعية واحدة من هرمون على ركيزة صلبة، وهو بعد ذلك منعت للحد من امتصاص غير محددة من عينة أو أي كاشف لاحق. هذه الركيزة هي في معظم الأحيان لوحة microwell البوليسترين (على سبيل المثال، لفحص انزيم مرتبط المناعي أو ELISA). العينة ثمإضافة إلى بئر وسمح لاحتضان لفترة من الزمن. بعد غسل صارم، يتم إضافة الأجسام المضادة المحددة لالوحيدات أخرى من قوات حرس السواحل الهايتية والسماح للاحتضان. قد يكون مترافق هذه الأجسام المضادة كشف لالغروية الجسيمات، انزيم، أو fluorophore من أجل إنتاج إشارة قابلة للقياس. يتم غسلها جيدا مرة أخرى قبل تفسير نتائج مقايسة (على سبيل المثال، باستخدام قارئ لوحة). بينما مجموعات تجارية تعتمد على هذه العملية متعددة الخطوات تستغرق وقتا طويلا، وجميع هذه الخطوات التي يمكن أن يؤديها بسرعة في أجهزة ميكروفلويديك الورقية مع الحد الأدنى من التدخل للمستخدم.

الجهاز المستخدم لالمناعية قوات حرس السواحل الهايتية يضم ست طبقات النشطة، والتي هي، من أعلى إلى أسفل، وتستخدم لإضافة العينة، تخزين المترافقة، الحضانة، والتقاط، وغسل، وصمة عار (الشكل 1). تتكون طبقة عينة إضافة من ورق الترشيح النوعية. فهو يسهل إدخال عينة السائل ويحمي الكواشف في أونلي المترافقةص من التلوث من البيئة أو الاتصال العرضي من قبل المستخدم. طبقة المترافقة (ورق الترشيح النوعية) يحمل كاشف إنتاج اللون (على سبيل المثال، الغروية الأجسام المضادة المسمى الذهب) لالمناعية. طبقة الحضانة (ورق الترشيح النوعية) تسمح للعينة للسفر أفقيا داخل الطائرة من الورق لتعزيز ملزم الحليلة مع الكواشف قبل الوصول إلى الطبقة التالية، وطبقة القبض عليه. طبقة القبض على (غشاء النايلون) تحتوي بروابط محددة لتحليلها كثف لهذه المادة. بعد الانتهاء من الفحص، تبين هذه الطبقة لتمكين التصور من معقد مناعي الانتهاء. طبقة غسل (ورقة مرشح النوعية) توجه السوائل الزائدة بما في ذلك الكواشف المتقارن الحر بعيدا عن الوجه طبقة القبض في طبقة وصمة عار (ورقة اللوني سميكة). يعقد الجهاز ستة الطبقات معا من خمس طبقات من منقوشة لاصقة على الوجهين: أربع طبقات من مادة لاصقة دائمة الحفاظ على سلامة عاصمجهاز نزف وطبقة واحدة من مادة لاصقة قابلة للإزالة يسهل تقشير للجهاز لفحص نتائج المناعية على طبقة القبض عليه.

لغرض هذه المخطوطة، ونحن نستخدم فقط عينات السيطرة السلبية والإيجابية للقوات حرس السواحل الهايتية (0 ميكرو وحدة / مل و 81 ميكرو وحدة / مل، على التوالي) لتقديم نتائج تمثيلية من المناعه الورقية، الذي يبيح للمناقشة مخصصة للعلاقة بين طرق تصنيع وأداء الجهاز. بالإضافة إلى إظهار كيفية تصنيع الأجهزة بنجاح، نسلط الضوء عدة أخطاء التصنيع التي يمكن أن تؤدي إلى فشل الجهاز أو نتائج الفحص irreproducible. والبروتوكول ومناقشة مفصلة في هذه المخطوطة توفر للباحثين معلومات قيمة حول كيفية تصميم المناعية الورقية وملفقة. بينما نحن نركز مظاهرة لدينا على المناعية، فإننا نتوقع أن المبادئ التوجيهية الواردة في هذه الوثيقة ستكون مفيدة على نطاق واسع لتصنيع ثلاثة dimen-ظائف الفئة الأجهزة ميكروفلويديك الورقية.

Protocol

1. إعداد الطبقات جهاز ميكروفلويديك الورقية

1. إعداد أنماط طبقات من الورق والنايلون، ولاصقة باستخدام الرسوم البيانية برنامج تصميم البرمجيات. ⁶ قد يكون لكل طبقة نمطا مختلفا.
   ملاحظة: هذا النمط يمكن أن تشمل ثقوب المحاذاة التي ليست مطلوبة لالمناعية الورقية وظيفي، ولكن مساعدة في تصنيع استنساخه من الأجهزة ثلاثية الأبعاد. ووضع هذه الثقوب تختلف إذا يتم تجميع الأجهزة بشكل فردي، في الشرائط، أو ورقة كاملة. البرنامج البرامج المستخدمة لتصميم أنماط قد تختلف بناء على اختيار أسلوب الزخرفة (على سبيل المثال، ضوئيه، والطباعة الشمع، أو القطع). ⁶
2. رش منطقة العمل بمحلول مكون من 70٪ (V / V) الايثانول والماء. مسح منطقة العمل مع منشفة ورقية نظيفة.

2. إعداد الطبقات ورقة: نموذج بالإضافة إلى ذلك، الاقتراني التخزين، الحضانة، والطبقات غسل

1. تحضير طبقات من ورق الترشيح النوعية باستخدام قطع الورق الطاولة كبير. قطع ورقة من الورق الأسهم إلى حجم الورق لتسهيل الزخرفة باستخدام الحبر الصلب (الشمع) الطابعة. على سبيل المثال، يمكن للواحدة 460 س 570 مم ² ورقة جعل 4 ورقة من الورق رسالة الولايات المتحدة (8.5 × 11 بوصة ^2). التعامل مع ورقة مع قفازات نظيفة في جميع الأوقات للحد من التلوث.
2. تحميل ورقة قطع من الورق اللوني في علبة الطابعة. طباعة طبقات تصميم من قبل (انظر الشكل 1).
   ملاحظة: يمكن طباعة نمط مباشرة على هذه الورقة باستخدام تغذية أوتوماتيكية. فقط ورقة واحدة يجب أن تكون مطبوعة في الوقت المناسب لتجنب انحشار الورق. لجميع الطبقات، واستخدام إعدادات الطباعة "المحسن".

3. إعداد نايلون غشاء طبقة: القبض على طبقة

1. قطع لفة الأسهم من غشاء النايلون في ورقة (7.5 × 10 بوصة ²⁾ باستخدام ورقة الطاولة القاطع. نأخذ عناية كبيرة في التعامل مع النايلونغشاء للحفاظ على سلامتها وحماية ضد التمزيق. تخزين أي مواد غير مستخدمة في مجلس الوزراء مجفف، وأغشية النايلون هي الرطوبة الحساسة.
   ملاحظة: قص الأوراق هي أضيق من الورق رسالة الولايات المتحدة. لأن أغشية النايلون رقيقة وهشة، لا يمكن معالجتها بواسطة الطابعة مباشرة وتحتاج إلى دعم. وتناقش أدناه تفاصيل.
2. باستخدام طابعة شمع، طباعة نمط طبقة القبض على قطعة من الورق نسخة والشريط إلى مربع ضوء لتكون بمثابة دليل لتحديد المواقع من غشاء النايلون. ضوء مربع الايدز المواءمة بين طبقات متعددة.
3. وضع ورقة نظيفة نسخة من ورقة على ورقة مطبوعة سابقا نسخة من ورقة. الشريط شباكه نظيفة من الورق إلى مربع الضوء، ولكن لا الشريط رقتين معا.
4. وضع ورقة قطع غشاء نايلون على قطعة نظيفة من الورق نسخة. تأكد من أن غشاء يغطي مساحة مطبوعة من الطبقة السفلى من الورق نسخة. الشريط كل الجوانب الأربعة للغشاء النايلون إلى ورقة نظيفةمن نسخ ورقية.
   ملاحظة: تأكد من أن غشاء النايلون مسطح وسلس بحيث لا توجد مشاكل مع الطباعة (على سبيل المثال، انحشار الورق أو الطباعة متفاوتة من الشمع). قد تكون طباعة الشمع على الشريط حيث يتم إرفاق غشاء النايلون إلى نسخة ورقية. إذا حدث هذا، والمناطق حيث هو نمط من النايلون بشكل غير كامل بسبب تغطية الشريط يجب التخلص منها. للتحضير المستقبل، أكبر قطعة من غشاء النايلون يمكن استخدامها لتجنب هذا الخطأ الطباعة.
5. تحميل ورقة من غشاء النايلون (بدعم من ورقة نسخة الملصقة على ذلك) في علبة الطابعة التغذية اليدوية. طباعة ورقة واحدة فقط من غشاء النايلون في وقت واحد.
   ملاحظة: لا توجد أية خطوات إعداد المطلوبة لطبقة وصمة عار، وليس هو نمط عليه.

4. إنشاء الحواجز مسعور في طبقة مطبوعة

1. الشريط طبقات المطبوعة على إطار الاكريليك حتى لتسخين فوق وتحت طبقة عندما يوضع في فرن خطورة الحمل الحراري. الحفاظ على غشاء النايلون مسجلة لذاب ورقة الدعم نسخة من ورقة إلا بعد الشمع ويتم تشكيل الحواجز مسعور.
   ملاحظة: الإطار الاكريليك هو حسب الطلب، وقطع ليزر قطعة من 1/2 ". البلاستيك الاكريليك سميكة اثنين من أحجام الإطارات اعتمادا على عدد من الأجهزة التي ملفقة واستخدمت الحدود الخارجي من الإطار أصغر بقياس 11 5/8" × 2 3/4 "، وثقب الداخلية من الإطار يقيس 10 3/8" س 1 3/4 ". والحدود الخارجي من الإطار أكبر يقيس 11 5/8" × 8 7/8 "، والداخلية ثقب الإطار يقيس 10 1/4 "× 7 7/8". ويسمح، الفضاء الداخلي مفتوحا حتى لذوبان الشمع من خلال سمك كامل من ورقة.
2. وضع طبقات في الفرن على 150 درجة مئوية لمدة 30 ثانية حتى يذوب الشمع في سمك الورق. تأكد من أن الشمع وقد تخللت سمك الورقة التي تحول مرارا والتحقق من وجود عيوب في التصميم.
   ويمكن أيضا أن تستخدم القسري أفران الهواء أو لوحات الساخنة لإذابة الحبر الشمع الصلب: ملاحظة. مرات ذوبانأو قد تختلف درجات الحرارة اعتمادا على أسلوب التدفئة.
3. إزالة الورق والنايلون غشاء من الإطار الاكريليك. أيضا، إزالة غشاء النايلون من ورقة دعم نسخة من ورقة.

5. إعداد طبقات لاصق

1. نمط ورقة على الوجهين من الأفلام لاصقة باستخدام الراسمة سكين الروبوتية، وذلك باستخدام ملفات التصميم أعدت من قبل (الخطوة 1.1). حماية أي سطح لاصق يتعرض باستخدام ورقة من بطانة الشمع.
   ملاحظة: يجب أن يكون نمط لاصقة على الوجهين مع الثقوب التي تسمح للعينة لتتدفق من خلال طبقات كمسار فلويديك المستمر. تتم إزالة بطانة الشمع بسهولة من لاصق، ويعمل على حمايته من التلوث وتمزق خلال قطع. وقاطع ليزر أو يموت الصحافة يمكن أن تستخدم أيضا لطبقات نمط أفلام لاصقة.

6. بدعم من الطبقات جهاز مع لاصق

1. رذاذ ضوء مربع بمحلول مكون من 70٪ (ت / ت) الايثانول والماء. يمسح بقطعة ورق ر نظيفةowel.
2. الشريط طبقة منقوشة من الورق أو غشاء النايلون التي تحتاج إلى أن تكون مدعومة بمادة لاصقة على ضوء مربع مع الجانب المطبوعة أسفل.
3. قشر جانب واحد من بطانة واقية من ورقة مزخرفة من مادة لاصقة، ويضعوا على طبقة من الورق أو غشاء النايلون. استخدام ضوء مربع لضمان التوافق السليم من الأنماط. الصحافة معا. وضع الجهاز تجميعها جزئيا إلى انزلاق الواقي.
   ملاحظة: زلة الواقي هو قطعة مطوية من التصفيح دعم الفيلم الذي يحمي الأجهزة من تلوث أو الضرر من قبل التأكد من أنها لا تتصل بكرات تغليف.
4. تمرير الناتجة الجمعية طبقتين من خلال تغليف الآلي للضغط تماما لاصقة ورقة معا، وإزالة أي جيوب الهواء من طبقات ملاصقة.
   ملاحظة: جيوب الهواء بين طبقات الجهاز يمكن أن تتداخل مع سلامة الجهاز وفتل استنساخ عن طريق التسبب في تسرب.

7. علاج الاقتراني Lآير مع الكواشف ليمونواسايس قبل الجمعية الجهاز

1. طبقة المترافقة الشريط على إطار الاكريليك ان هذه المنطقة المائية أن يعامل هو مع وقف التنفيذ وليس في اتصال مع الإطار.
2. إضافة 2.5 ميكرولتر من 100 ملغ / مل ألبومين المصل البقري (BSA) في 1X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) إلى المنطقة للماء على طبقة المترافقة. اتركه حتى يجف في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
   ملاحظة: هذا الكتاب هو فقط ما يكفي لترطيب منطقة ورقة. الحل BSA يساعد على منع تجميع الجسيمات النانوية الغروية أثناء عملية التجفيف، والتي من شأنها تسهيل الافراج عن الجسيمات النانوية عندما يتم ممهى ورقة والكواشف من العينة.
3. إضافة 5 ميكرولتر من 5 OD الغروية جسيمات متناهية الصغر من الذهب مترافق الأجسام المضادة لمكافحة β-HCG، وتكرار عملية التجفيف.
   ملاحظة: وحدات من تركيز جزيئات الذهب الغروية غالبا ما يعبر عنه الكثافة الضوئية (OD) مقاسا absorbance في λ = 540 نانومتر. لا يلزم علاج لوحة الفتيل قبل التجمع الجهاز في القسم 10.

8. علاج قناة الجانبي مع الكاشف ليمونواسايس قبل الجمعية الجهاز

1. الشريط طبقة قناة جانبية على إطار الاكريليك ان هذه المنطقة المائية أن يعامل هو مع وقف التنفيذ وليس في اتصال مع الإطار.
2. إضافة 10 ميكرولتر من عرقلة وكيل (5 ملغ / مل الحليب الخالي من الدسم و 0.1٪ (ت / ت) توين 20 في برنامج تلفزيوني 1X) لعلاج القناة الجانبية. تكرار عملية تجفيف نفسها (2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم في 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق) والطبقة المترافقة.

9. معالجة طبقة التقاط مع الكواشف ليمونواسايس قبل الجمعية الجهاز

1. طبقة التقاط الشريط على إطار الاكريليك ان هذه المنطقة المائية أن يعامل هو مع وقف التنفيذ وليس في اتصال مع الإطار.
2. علاج طبقة التقاط مع 5 ميكرولتر من 1 ملغ / مل مكافحة α-قوات حرس السواحل الهايتية الأجسام المضادة ومن ثم السماح للعينة ليجف في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة تليها 8 دقائق عند 65 درجة مئوية.
3. إضافة 2 ميكرولتر من عرقلة وكيل (5 ملغ / مل الحليب الخالي من الدسم و 0.1٪ (ت / ت) توين 20 في برنامج تلفزيوني 1X). تكرار عملية تجفيف للطبقة القبض عليه.
   ملاحظة: هذا المبلغ المناسب لطلاء الأوراق دون تسد مسام غشاء نايلون، الذي يمكن أن يحدث عندما يستخدم أيضا منع من ذلك بكثير وكيل.

أجهزة ميكروفلويديك الورقية 10. جمعية ثلاثي الأبعاد

1. الشريط طبقة غسل إلى مربع ضوء (الجانب المطبوعة متجهة لأعلى). إذا تم استخدام الثقوب المحاذاة، إخراجها من طبقات اللاحقة باستخدام أداة ثقب لكمة باليد.
2. إزالة طبقة واقية على الجزء الخلفي من طبقة القبض على فضح لاصقة. محاذاة طبقة فوق طبقة القبض غسل باستخدام الثقوب محاذاة كدليل. اضغط طبقتين معا. تجنب لمس المناطق المائية للحد من التلوث أو الأضرار التي لحقت الجهاز. ويمكن استخدام ملاقط لمساعدة assembلاي.
3. إزالة طبقة واقية على الجزء الخلفي من طبقة الحضانة لفضح لاصقة. محاذاة طبقة حضانة فوق طبقة التقاط والضغط عليها معا. متابعة إضافة طبقات في هذه الطريقة حتى يتم تجميع جميع طبقات نشطة.
4. وضع الجهاز تجميعها جزئيا إلى انزلاق الواقي ويضعوا بحزم طبقات معا باستخدام تغليف.
5. إزالة طبقة واقية على الجزء الخلفي من طبقة غسل ويضعوا طبقة وصمة عار على الجزء السفلي من الجهاز. كرر التصفيح خطوة 10.4 لاستكمال تجميع الجهاز ميكروفلويديك ثلاثي الأبعاد الورقية. قطع المرجوة عدد من الأجهزة من شرائط أو ورقة من الأجهزة تجميعها بالكامل باستخدام مقص.
   ملاحظة: صفائح الكاملة من الأجهزة، شرائط من الأجهزة، أو جهاز واحد يمكن إعداد باستخدام نهج مماثل.

11. تنفيذ عملية المقايسة المناعية الورقية

1. إضافة 20 ميكرولتر من عينة إلى منطقة ماء على رأس الجهاز (أي تيانه أخذ عينات طبقة).
2. انتظر العينة إلى ذبالة تماما في الجهاز، ثم إضافة 15 ميكرولتر من غسل العازلة (0.05٪ ت / ت توين 20 في 1X الفوسفات مخزنة المالحة). بعد قسامة الأولى من غسل العازلة وشرير تماما في الجهاز، إضافة ثانية قسامة 15 ميكرولتر من غسل العازلة.
   ملاحظة: غسل العازلة له شرير تماما في الجهاز عندما اختفى الحبرية السائل، تبين عدم وجود الغضروف المفصلي على سطح الورقة. فحص اكتمال عندما قسامة الثانية من غسل العازلة دخلت تماما في الجهاز.
3. للكشف عن نتائج الفحص، قشر بعيدا ثلاث طبقات العليا من الجهاز باستخدام ملاقط لفضح طبقة القبض عليه.
   1. تفسير نتائج فحص نوعيا من خلال مراقبة وجود أو عدم وجود اللون. بدلا من ذلك، صورة طبقة قراءات باستخدام ماسح سطح المكتب واستخدام صورة برامج معالجة أو خوارزميات لتحديد النتائج وتميز توزيع كثافة داخلمنطقة الكشف. ²⁰

النتائج

الحصول على العروض فحص استنساخه في أجهزة ميكروفلويديك ثلاثية الأبعاد الورقية تعتمد على طريقة تصنيع يضمن الاتساق بين الأجهزة. ولتحقيق هذا الهدف، حددنا عددا من عمليات التصنيع والاعتبارات المادية، ومناقشتها هنا في سياق يدل على المناعية الورقية. ونحن ...

Discussion

تحديد استراتيجية التصنيع استنساخه عنصرا أساسيا في التنمية الفحص. ²² نستخدم متتابعة، طبقة تلو طبقة نهج لتصنيع أجهزة ميكروفلويديك ثلاثية الأبعاد الورقية. وعلى النقيض من تلك الأساليب التي تطبق للطي أو اوريغامي تقنيات لإنتاج أجهزة متعددة الطبقات من ورقة وا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Illustrator CC	Adobe		to design patterns for layers of paper and adhesive
Xerox ColorQube 8580 printer	Amazon	B00R92C9DI	to print wax patterns onto layers of paper and Nylon
Isotemp General Purpose Heating and Drying Oven	Fisher Scientific	15-103-0509	to melt wax into paper
Artograph LightTracer	Amazon	B000KNHRH6	to assist with alignment of layers
Apache AL13P laminator	Amazon	B00AXHSZU2	to laminate layers together
Graphtec CE6000 Cutting Plotter	Graphtec America	CE6000-40	to pattern adhesive films
Swingline paper cutter	Amazon	B0006VNY4C	to cut paper or devices
Epson Perfection V500 photo scanner	Amazon	B000VG4AY0	to scan images of readout layer
economy plier-action hole punch	McMaster-Carr	3488A9	to remove alignment holes
Whatman chromatogrpahy paper, Grade 4	Sigma Aldrich	WHA1004917
Fisherbrand chromatography paper (thick)	Fisher Scientific	05-714-4	to function as blot layer
Immunodyne ABC (0.45 µm pore size )	Pall Corporation	NBCHI3R	to function as material for capture layer
removable/permanent adhesive-double faced liner	FLEXcon	DF021621	to facilitate peeling
permanent adhesive-double faced liner	FLEXcon	DF051521
wax liner	FLEXcon	FLEXMARK 80 D/F PFW LINER	to assist with patterning adhesive
acrylic sheet	McMaster-Carr	8560K266	to fabricate frame
self-adhesive sheets	Fellowes	CRC52215	to use as protective slip
absolute ethanol	VWR	89125-172	to sanitize work area
bovine serum albumin	AMRESCO	0332
Sekisui Diagnostics OSOM hCG Urine Controls	Fisher Scientific	22-071-066	to use as positive and negative samples
anti-β-hCG monoclonal antibody colloidal gold conjugate (clone 1)	Arista Biologicals	CGBCG-0701	to treat conjugate layer
goat anti-α-hCG antibody	Arista Biologicals	ABACG-0500	to treat capture layer
10X phosphate buffered saline	Fisher Scientific	BP3991
Oxoid skim milk powder	Thermo Scientific	OXLP0031B
Tween 20	AMRESCO	M147