التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في أنثى القوارض الصغيرة

Summary

النمذجة التقليدي جزئية انسداد المثانة منفذ في القوارض محفوف نفوق الحيوانات. اصابة إزالة التعصيب من تشريح جميع أنحاء القريبة مجرى البول وعنق المثانة هي أيضا مصدر قلق كبير. قمنا بتطوير وتقييم لمنتصف مجرى البول نموذج عرقلة آمنة وموثوق بها، وتجنب أوجه القصور في النموذج التقليدي.

Abstract

جزئية انسداد المثانة منفذ (pBOO) لديها انتشار عالية، يسبب عبئا كبيرا المريض، وتكاليف الرعاية الصحية الهائلة. نموذج حيواني الأكثر شيوعا للتحقيق في المثانة إعادة عرض في pBOO والقوارض الإناث تمر انسداد جزئي في مجرى البول القريبة. التغير في درجة الانسداد ونفوق الحيوانات من الشواغل الرئيسية مع انسداد القريبة. وعلاوة على ذلك، تشريح حول الداني مجرى البول وعنق المثانة يهدد المثانة تعصيب.

قمنا بتطوير نموذج منتصف الإحليلية انسداد التي تقتصد في العصب (نيمو) للpBOO تجنب عيوب النموذج التقليدي. اقتربنا من مجرى البول فقط أقل شأنا من الارتفاق العانة، الذي ينفي الحاجة إلى فتح البطن وكذلك للتشريح في هذا المجال؛ أيضا، وظلت مصرة الإحليل المخططة يمسها. أجرينا نيمو في إناث فئران سبراغ داولي (12 عوائق 6 الحيوانات الشام)، وكذلك في الإناث C57 / الفئران BL6 (20 إعاقةالصورة، 18 الحيوانات الشام). بعد أسبوعين، قمنا بتقييم وظيفة المثانة والكتلة المثانة، وكتلة الجسم.

لم يكن لدينا وفيات بين إناث الفئران obstructed- أو الشام التي تديرها. كما هو موضح في الدانية التقليدي pBOO-الأسلوب، نحن ربط الخيط حول الاحليل الداني وضعت مؤقتا 0.9 ملم قضيب معدني. نيمو الناجم عن زيادة 85٪ في كتلة المثانة بعد أسبوعين، كان متوسط ​​حجم البول المتبقية 0.4 مل في الفئران عرقلت جزئيا في حين لا تتعدى 0.03 مل في الحيوانات صورية. في الفئران، واختبرنا 3 أحجام قنية أننا وضعت على طول مجرى البول عند ربط الخيط. لقد وجدنا أن استخدام قنية 27 عيار أدى في أكثر من نفوق الحيوانات 50٪، وضع قنية عيار 25 لم تسفر عن الاستجابة المطلوبة في زيادة كتلة المثانة. استخدام قنية 26 عيار أسفرت عن نتائج إيجابية مع الوفيات الحد الأدنى من الحيوان (1/8) بعد مهمة زيادة بنسبة 2 أضعاف في كتلة المثانة.

Introduction

جزئية المثانة منفذ إعاقة (pBOO) لديها ارتفاع معدل انتشار ويمكن أن يؤدي إلى شديد المثانة اختلال وظيفي ^1؛ ويتراوح الطيف من التشوهات الخلقية مثل الصمامات الخلفي مجرى البول أو مبال تحتاني، على تضيق الإحليل المكتسبة لتضخم البروستاتا الحميد. هذا الأخير يؤثر على أكثر من 30٪ من الرجال ستين عاما فما فوق ^2. عبء المريض كبيرة وتكاليف الرعاية الصحية الهائلة المرتبطة pBOO تبرر الجهد البحثي الكبير وضعت موضع دراسة إعادة المثانة ردا على مقاومة زيادة تدفق ^3. من عام 2006 وحتى عام 2015، أكثر من 220 فهرستها مجلات نشرت مقالات بشأن تأثير pBOO على المثانة البولية.

على الرغم من أن النماذج الحيوانية للpBOO وقد وضعت في العديد من الأنواع ^4، مثل الفئران ^5، الأرنب ^{6، 7} خنزير، ومذكرات التفاهمه ^{8، 9،} ومع ذلك يمكن القول إن النموذج الحيواني الأكثر استخداما هي إناث الفئران التي تمر انسداد جزئي في مجرى البول القريب. الحصول على بطن الحيوانات، exteriorizing المثانة، وتشريح حول عنق المثانة لا مفر منها مع هذه التقنية مجرى البول عرقلة التقليدية القريبة. التغير في درجة الانسداد ونفوق الحيوانات ليست سوى بعض من المخاوف المرتبطة بهذا الإجراء ^{10، 11؛} أظهرنا أنه في الشام تشغيلها الحيوانات، تشريح حول الاحليل الداني يؤدي إلى التغيرات الفسيولوجية التي ترتبط مع فقدان الألياف العصبية في عنق المثانة ^12. وتشير هذه النتيجة إلى أن الأكثر شيوعا نموذج حيواني pBOO، الذي ينطوي على الوصول إلى مجرى البول الداني في القوارض الإناث، يؤدي إلى إصابة إزالة التعصيب مع التغييرات الهيكلية والوظيفية المرتبطة المثانة، مما يؤثرصورية والحيوانات المتعسرة. لذلك، هناك حاجة إلى نهج تجنب الإصابة إزالة التعصيب بديلة. مختبرنا تطوير وتقييم نهج إعاقة منتصف الإحليلية التي تقتصد في العصب (نيمو) وفعال في إحداث تغييرات المصاحب عرقلة المتوقع في المثانة مثل زيادة في كتلة الجهاز والبول المتبقية، بينما كانت الحيوانات الشام التي تديرها تمييزه عن الحيوانات السيطرة unoperated . أيضا، وظلت مصرة الإحليل المخططة يمسها لأنها تقع الأقرب إلى مستوى تشريح. وعلاوة على ذلك، كان التباين في الزيادة الناجمة عن انسداد في كتلة المثانة أقل بكثير مما كانت عليه في التقليدية انسداد مجرى البول الداني وكان نفوق الحيوانات صفر.

نحن أيضا تطبيقها بنجاح على نيمو في إناث الفئران مع معدل وفيات أقل من 10٪ في الحيوانات إعاقة، في حين ارتبطت كل النماذج pBOO للفئران صفها حتى الآن مع الوفيات حوالي 50٪. سوف دراسة المثانة إعادة عرض في سياق pBOO في الفئران الاستفادة من applicabilإيتي من مجموعة كاملة من التعديلات المعدلة وراثيا.

تشريح حول منتصف مجرى البول في الإناث القوارض لا يسبب التغييرات الهيكلية أو الوظيفية غير المرغوب فيها والتباس في المثانة البولية لوحظت في نموذج عرقلة القريبة التقليدي. ومع ذلك، الأمر الذي أدى إلى إعاقة جزئية على مستوى منتصف مجرى البول لا يزال يدفع المثانة تضخم وزيادة البول المتبقية، كما هو متوقع من نموذج حيواني لpBOO. الأهم من ذلك، أداء نيمو في الفئران يفتح التحقيق في إعادة المثانة في pBOO إلى أساليب المعدلة وراثيا، والتي هي غير متوفرة تقريبا في القوارض أكبر.

Protocol

وتمت الموافقة على بروتوكول التجريبية التالية من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسة.

1. نيمو في إناث الفئران

1. تجهيز
   1. وضع الإناث الفئران سبراغ داولي يزن حوالي 200 غرام أقل من 3٪ الأيزوفلورين التخدير، وتزن الحيوان، ويحلق وتطهير المنطقة prepubic 3 مرات باستخدام فرك الجراحية اليود.
   2. على وسادة التدفئة، والشريط أطرافه الخلفية والذيل إلى أسفل ويقثطر المثانة مع angiocatheter 20 عيار، والذي هو أيضا مسجلة بلطف إلى أسفل لمنع انزلاق.
2. تشريح
   1. استخدام مشرط لإجراء 8 ملم الطولي شق الجلد من الارتفاق العانة واضح نحو الصماخ الإحليل. رفع قبالة الجلد على جانبي لتسهيل احق إغلاق الجرح.
   2. تشريح بصراحة لتحديد مجرى البول stented عن طريق نشر طولية مع مقص غرامة. وضع غرامة الذاتي الاحتفاظ السنانير الجلد لتعزيز التعرضمن مجرى البول.
   3. أداء بعض لطيف طولية نشر باستخدام مقص منحني ظهري إلى مجرى البول لتطوير الطائرة بين مجرى البول والمهبل. ثم، لتمرير بصراحة خياطة 4-0 الحرير وراء مجرى البول وإعداد رمي مزدوج من عقدة الجراح.
3. جزئية انسداد مجرى البول
   1. إزالة angiocatheter، ضع 0.9 ملم قضيب معدني موازية لمجرى البول، ومن ثم تشديد عقدة حول مجرى البول وقضيب معدني، وذلك أن هذا الأخير لا يزال تنزلق بسهولة بعد ذلك.
   2. تأمين عقدة مع 3 المزيد من رميات باستخدام التوتر لطيف قبل إزالة قضيب. قطع خياطة تنتهي حوالي 3 مم لونغ، أو 4 مم إذا إصدار أحدث من انسداد هو جزء من التجربة.
4. إغلاق الجرح
   1. تقريب الغدد المجاورة للإحليل باستخدام غرزة واحدة دفن من امتصاص مضفر خياطة 4-0.
   2. إغلاق الجلد مع غرزة فراش الأفقي دفن باستخدام نفس سوت امتصاصلدى عودتهم. ملاحظة: على الرغم من أنه قد يبدو غير تقليدية لاستخدام الخيط للامتصاص لغرزة اختراق الجلد، ونحن لم تواجه مضاعفات مثل الالتهابات الجروح، ويمكن تجنب ذلك إزالة خياطة.
5. بعد الرعاية
   1. حقن البوبرينورفين 0.1 ملغ / كغ تحت الجلد قبل وضع الفئران في قفص الانتعاش.
   2. تقدم بعض اتباع نظام غذائي استرداد النظام لمدة 24 ساعة الأولى للفأر يقع واحد. بعد هذه الفترة، حيوانات المنزل مرة أخرى في نفس أزواج كما كان من قبل الإجراء شريطة أن تبلي بلاء حسنا وتنتمي إلى مجموعة العلاج نفسها.
   3. تحقق من الفئران يوميا لحجم المثانة والرفاه العام. تسجيل وزنهم على الأقل أسبوعيا.

2. نيمو في الفئران الإناث

1. تجهيز
   1. وضع الإناث C57BL / 6 الماوس يزن حوالي 18 جرام والمضي قدما كما هو مفصل في الخطوة 1.1.1.
   2. المضي قدما كما هو مفصل في خطوة 1.1.2، باستثناء استخدام آنج 24 عيارiocatheter.
2. تشريح
   1. استخدام مشرط لإجراء 6 مم الطولي شق الجلد من الارتفاق العانة واضح نحو الصماخ الإحليل.
   2. تشريح بصراحة لتحديد مجرى البول stented عن طريق نشر طولية مع مقص غرامة. رفع من حزمة من الأعصاب الأوعية الدموية تشغيل البطني على مجرى البول عن طريق تشريح حادة مماثلة.
   3. أداء بعض لطيف طولية نشر باستخدام مقص منحني ظهري إلى مجرى البول لتطوير الطائرة بين مجرى البول والمهبل. ثم، لتمرير بصراحة خياطة 5-0 غير قابل للامتصاص مضفر وراء مجرى البول وإعداد رمي مزدوج من عقدة الجراح.
3. جزئية انسداد مجرى البول
   1. ربط angiocatheter مع حقنة 1 مل وحقن 0.1 مل من محلول ملحي في المثانة.
   2. وضع قنية بالتوازي عيار 26 إلى مجرى البول. تشديد بلطف عقدة حول مجرى البول وقنية في حين يتراجع في angiocaعشر.
   3. تأمين عقدة مع 3 المزيد من رميات باستخدام التوتر لطيف قبل إزالة قنية.
   4. اختبار البول التي تظهر في الصماخ على ضغط لطيف على المثانة الحيوان. تخفيف التعادل إذا كان غير قادر على التعبير عن البول. خلاف ذلك، وقطع الخيط تنتهي حوالي 3 مم.
4. إغلاق الجرح
   1. إغلاق الجلد مع غرزة فراش الأفقي دفن باستخدام 5-0 مضفر خياطة للامتصاص.
5. بعد الرعاية
   1. ضخ 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين تحت الجلد قبل وضع الماوس في قفص الانتعاش.
   2. تقدم بعض اتباع نظام غذائي استرداد النظام ل48 ساعة الأولى للماوس يقع واحد. بعد هذه الفترة، حيوانات المنزل مرة أخرى في نفس المجموعات كما كان من قبل الإجراء شريطة أن تبلي بلاء حسنا وتنتمي إلى مجموعة العلاج نفسها.
      ملاحظة: الفئران مع اضح منتفخة المثانة 24 ساعة بعد العملية التي لا باطل عند التعامل معها والإفراط في عرقلة وسوف يموت في غضون نتحويلة 1-2 أيام ما لم تؤخذ مرة أخرى تحت التخدير لإزالة ربطة المعطل.
   3. تحقق من الفئران يوميا لحجم المثانة والرفاه العام. تسجيل وزنهم على الأقل أسبوعيا.

النتائج

التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في إناث الفئران

معدل الوفيات

أجرينا عرقلة منتصف مجرى البول على أكثر من 40 إناث ال?...

Discussion

نفوق الحيوانات هي واحدة من الاهتمامات الرئيسية للنموذج التقليدي للpBOO في مجرى البول القريبة، بنسبة 15٪ أو أكثر في العديد من التقارير ^{10 و 11 و 13.} يبدو نيمو أن يكون الحد الأدنى من الوفيات عند تطبيقها في إناث ا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Female rat	Charles-River Canada	Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400	about 200 g
Isoflorane vaporizer	Benson medical industries inc.	TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO
Isoflorane	Fresenius Kabi Animal Health	Isoflorane; product code CP0406V2	250 mL bottle
Disposable scalpel	Ted Pella, Inc.	#15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S
Microscopy forceps	Ted Pella, Inc.	Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443
Adson forceps	Ted Pella, Inc.	Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9
Curved surgical scissors	Ted Pella, Inc.	Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376
0.9 mm inox metal rod	goodfellow.com	Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
Skin hooks - self made from inox steel	goodfellow.com	Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
4-0 Silk suture	esutures.com	4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640
5-0 Vicry suture	esutures.com	5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H
Needle holder	Medsupplier.com	Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder - 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC
Temgesic (Buprenorphine)	first veterinary supply	Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701
1 mL syringe with 27 G needle	Fisher Scientific	BD Tuberculin Syringe, BD 309623
20 G Angiocath	Fisher Scientific	Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906
Recovery diet	clearh2o	DietGel 31M; 72-08-5022
C57Bl/6 female mice	Charles-River Canada	C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027	about 18 g
24 G angiocath	Fisher Scientific	Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340
5-0 Ethibond	esutures.com	5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H
26 G syringe needle	Sigma-Aldrich	BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392
Normal Saline	Baxter	0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043