نموذج الفئران لربط قسم الكبد وربط الوريد البابي لإجراءات مرحلية ظهرت (البس)

Summary

حمل السريع تضخم الكبد باستخدام "ربط قسم الكبد" وربط الوريد البابي لظهرت أقام قد اقترح (البس) لاستئصال أورام الكبد ريسيكتابل الشريط الحدودي. هذا النموذج يمكن توضيح الآليات التي تشارك في تضخم سريع ويسمح لاختبار المخدرات التي تعزز أو كتلة التعجيل بالتجديد.

Abstract

البيانات السريرية الأخيرة تدعم نهج جراحية عدوانية لاورام الكبد الأولية والمنتشر على حد سواء. لبعض المؤشرات، مثل الانبثاث الكبد القولون والمستقيم، خلف كمية أنسجة الكبد بعد استئصال الكبد أصبح العامل الرئيسي الذي يحد من ريسيكتابيليتي كبيرة أو عدة أورام الكبد. كمية ضئيلة من أنسجة وظيفية مطلوب لتجنب المضاعفات الشديدة لوظيفة-ظهرت فشل الكبد، التي لديها ارتفاع معدلات الاعتلال والوفيات. حفز نمو الكبد من بقايا المحتملين قبل بتر تصبح أكثر أنشأت في جراحة الكبد، أما في شكل الانصمام الوريد البابي بالأشعة التداخلية أو في شكل ربط الوريد البابي عدة أسابيع قبل الاستئصال. في الآونة الأخيرة، تبين أن تجديد الكبد أكثر اتساعاً وسرعة، عندما تتم إضافة ترانسيكشن متني إلى ربط الوريد البابي في مرحلة أولى ومن ثم، وبعد أسبوع واحد فقط من الانتظار، بتر أداؤها في مرحلة ثانية (اقتران الكبد القسم وربط الوريد البابي لظهرت أقام = البس). البس سرعان ما أصبحت شعبية عبر العالم، ولكن تعرض للانتقاد لأن الوفيات المرتفعة المحيطة بالجراحة. إليه للنمو المتسارع وواسعة النطاق الناجمة عن هذا الإجراء غير مفهومة جيدا. -تم تطوير نماذج حيوانية استكشاف الآليات الجزيئية والفيزيولوجية لتسريع تجديد الكبد في البس كلا. ويعرض هذا البروتوكول نموذج الفئران التي يسمح آليا إلى استكشاف التجديد المتسارع.

Introduction

حدود حجم بقايا الكبد ريسيكتابيليتي أورام الكبد. ¹ في العام، عند أقل من 25% الكبد الأنسجة تركت وراءها، والمريض في زيادة خطر الوفاة من فشل الكبد الحاد بسبب عدم وجود وظيفة التمثيل الغذائي للكائن الحي كامل ("صغير جداً بالنسبة حجم متلازمة"). ² هذا المنصب-ظهرت فشل الكبد هو مضاعفات مدمرة للغاية بعد استئصال الكبد. ولذلك حاولت الأطباء للحث على تجديد الكبد قبل بتر الكبد عن طريق التلاعب في تدفق الوريد البابي. ³ وجد أنه حالما يتم تغطي الوريد البابي، الجزء المتبقي مع تدفق الوريد البابي يبدأ في النمو بمعدل بطيء، ويمكن وبالتالي زيادة تصل إلى 60 في المائة في حجم. ⁴ الربط الجراحي⁵ أو الوريد البابي التداخلية الانسداد سواء سريرياً وأنشئت. ⁴ الزيادة في حجم ووظيفة الكبد يمكن الاعتماد عليها، ولكن معدل النمو في الكبد بعد انسداد المدخل فقط حوالي خمس مقارنة بنمو الكبد بقايا بعد ظهرت جزئية. ⁶

الوقت اللازم للكبد ينمو أسابيع إلى أشهر على الرغم من تجديد الكبد بمعدل أسرع من ذلك بكثير بعد بتر. على هذا النحو، الكبد هو الجهاز الوحيد الذي ينمو مرة أخرى إلى وظيفة طبيعية بعد إزالة جزء منه. ⁷ إجراء رواية حفز التجدد الكبد بوتيرة مماثلة بعد هيباكتيكتومي الجزئية ووضعت مجموعة من الجراحين الذين اكتشفت أنه إضافة ترانسيكتيون بين المغطى ويدفع الجزء غير تغطي الكبد الكبد تضخم نفس معدل النمو بعد استئصال الكبد، ولكن قبل الاستئصال. ⁹ يبدأ الإجراء السريع تضخم 80% داخل بقايا أسبوع كبد في المستقبل، مما يسمح استئصال الأورام واسعة النطاق، أونريسيكتابل أساسا، والكبد في غضون أسبوع. تم استدعاء الإجراء "أسوسياتينج ربط قسم الكبد والوريد البابي لظهرت أقام = البس" وأصبحت سرعة شعبية عبر العالم. ¹⁰ تقارير متعددة تدعم توسع في ريسيكتابيليتي من الشريط الحدودي أورام الكبد ريسيكتابل حققتها تقنية جديدة،¹¹ أثناء العملية الجراحية المعقدة كما وجهت انتقادات لمعدل المضاعفات عالية. ^{12 , 13}

تطوير القوارض، وأيضا نماذج حيوانية كبيرة من تضخم بطيئة وسريعة قد سعت منذ نشر البس في عام 2012 للسماح توصيف النسيجي أفضل وفهم الآليات واختبار تأثيرات المخدرات على معدلات نمو مختلفة من أنسجة الكبد في الحيوانات. وكان نموذج الحيوان الأول الذي وضع نموذج الفئران. في هذا النموذج، تسارع تضخم سريع بعد ترانسيكشن متني بين الحق والجزء الأيسر من الفص المتوسط التجديد للفص اليمين الوسط. ¹⁴ قدم نموذجا مختلفاً في وقت لاحق في الماوس. في هذا النموذج هو مستأصل الفص الجانبي الأيسر، وكانت مرتبطة فروع الوريد البابي إلى كل فص من الكبد إلا متوسط الفص الأيسر. ¹⁵ وفي الوقت نفسه، نماذج حيوانية كبيرة لالبس في الخنازير وقد وصف كذلك. ¹⁶

لدراسة الآليات الفيزيولوجية مثل التغييرات التدفق والضغط في الوريد البابي ونضح والأوكسجين لانسجة الكبد، نموذج الفئران متفوقة على نموذج لالبس في الفئران. ميزة أخرى من الفئران على الطراز مورين هو أن هناك لا ضرورة لاستئصال للفص الجانبي الأيسر،¹⁵ التي قد تلوث آثار استئصال الكبد مع تلك التي لالبس في نموذج الفئران. نموذج الفئران في المقابل لا تقلل الكبد الخلية كتلة. يستخدم نموذج خنزير الفص الخلفي حق كفلقة المتنامي، ولكن الكبد الخنزير لوبولاتيد عالية. ولذلك، من الصعب إنشاء طائرة ترانسيكشن في أنسجة رقيقة فعلا الجسر بين الخلفي الأيسر والفص الأمامي اليمين. وفي المقابل، الفص المتوسط في الفئران تتألف من جزأين التي تم توفيرها بشكل منفصل بالوريد البابي كل ويمكن بسهولة إنشاء طائرة ترانسيكشن متني بينهما باستخدام تقنيات ميكروسورجيكال. يسمح توافر الكمبيوتر الحيوانات الصغيرة التصوير المقطعي (CT) و/أو الرنين المغناطيس التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي) التحديد الكمي الدقيق جداً للنمو الحجمي بين ربط الوريد البابي وحدها وربط الوريد البابي وأضاف ترانسيكتيون، وهو أمر مهم للتحقق من أي نموذج السريع تضخم الكبد.

ويصف البروتوكول المعروضة هنا تقنية جراحية والإجراءات المستخدمة للتحقق من صحة الحجمي وتوصيف الفيزيولوجية من طراز تضخم بطيء وسريع بعد ربط الوريد البابي وربط الوريد البابي مع ترانسيكشن، على التوالي، بالنسبة للفئران.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

جميع التجارب في هذا البروتوكول كانت أقرتها "السلطات البيطرية" لكانتون زوريخ، سويسرا (رقم 60/2014). علاوة على ذلك، تم تنفيذ كافة الخطوات التجريبية في الامتثال الصارم للمبادئ التوجيهية بشأن تجارب مع الحيوانات بالأكاديمية السويسرية للعلوم الطبية (سامز) والمبادئ التوجيهية للاتحاد من الأوروبية مختبر الحيوان العلوم الجمعيات (فيلاسا) .

1-تربية الحيوانات ومعدات غرفة العمليات والصكوك، والتخدير

1. تبقى الذكور ويستار وزنها 250-300 جم في أقفاص التهوية تحت ظروف خالية من مسببات الأمراض القياسية في دائرة ضوء/الظلام ح 12/12. تعطي الحيوانات حرية الوصول إلى الغذاء والماء في درجة حرارة المحيطة من 22 ± 1 درجة مئوية.
2. حمل التخدير في مربع، حيث يتم مسح isoflurane الدخول 5 المجلد % لمدة 30 ثانية (الشكل 1A)، متبوعاً بتركيز 3 المجلد % إيسوفلوراني حتى الحيوان تحت التخدير العميق. تأكيد مستوى التخدير بواسطة منعكس تو-قرصه.
3. توفير تطبيق التسكين تحت الجلد باستخدام البوبرينورفين (0.01 مغ/كغ) أثناء التدخل الجراحي، تليها 0.02 مغ/كغ كل ح 12 في مرحلة ما بعد الجراحة ح 48.
4. نقل الحيوانات إلى مكان العمل، حيث أنهم عفويا تتعرض لخليط غاز من 1.0-2.5 المجلد % إيسوفلوراني في الأكسجين في التنفس (تدفق: 600 مل/دقيقة).
5. إغلاق عيون الحيوانات واستخدام مرهم لحماية العيون. حقن المحلول الملحي 5 مل تحت الجلد، ونصفها على كل جانب من البطن، تليها الأتروبين 0.1 مغ.
6. إجراء عمليات جراحية باستخدام مجهر جراحي في غرفة الجراحة.
7. الحفاظ على هذا الحيوان تحت التخدير المتطايرة استخدام قناع تهوية تتكون من غشاء مطاط (الشكل 1B)، من خلالها يتم الضغط على الآنف للفئران. إصلاح الأطراف مع الشريط (الشكل 1B).
8. وضع الأدوات الجراحية في أزياء العقيمة على طاولة جانبية: المياه المالحة وتدين غارقة الأسفنج (الشكل 2A)، البطن الجدار الكامشات (الشكل 2) فضلا عن خيوط 3-0 لسحب جدار البطن والرهابه، مقص، أدزون الملقط، ودفع غرامة ميكروفورسيبس نصائح مستقيم ومنحني وقبل قطع العلاقات الحرير 6-0 لإجراء عملية ربط (الشكل 2).
9. استخدام غير الخلاف بين القطبين ميكروفورسيبس ترانسيكشن للحمة الكبد. إغلاق جدار البطن والجلد باستخدام خيوط الحرير 3-0 مع الإبر SH-1 و 5-0 Maxon (الشكل 2D). استخدام ملقط من قطبين للارقاء.

2-بدء عملية جراحية

1. يحلق في البطن للحيوان مع ماكينة قص شعر حيوانات صغيرة من الرهابه إلى الأعضاء التناسلية مع جانبية منطقة 2 سم من خط الوسط. دقة إزالة الشعر.
2. تطهير هذه المنطقة 3 مرات مع الأسفنج تدين بالدماء.
3. تنفيذ شق خط الوسط باستخدام مشرط للجلد ومن ثم استخدام مقص الجراحة بفتح البطن.
4. التراجع عن الحق وجدار البطن الأيسر والرهابه مع خيوط الحرير 3-0 (الشكل 3A).
5. التراجع عن المعدة والقولون والأمعاء من الرباط هيباتودودينال من الفئران بسلك صغير عصامي الكامشات (الشكل 3B).

3-الوريد البابي ربط (PVL)

1. الوصول إلى الوريد البابي وفروعه بسحب الأفقي للمعدة والأمعاء (الشكل 3B).
2. تشريح الوريد البابي صراحة بالتقاط الصفاق مع ميكروفورسيبس وتقشير ببطء من ميديالى.
3. تشريح فروع الوريد البابي خارج (الشكل 3) في التسلسل التالي: فرع الخلفي (1) الحق، (2) ترك فرع الوسط الأفقي الأيمن والأيسر معا، وكودات (3).
   1. أولاً، تقشر الصفاق مع التحركات الصغيرة، ليست نشطة جداً لتجنب تمزيق فروع الشرايين الصغيرة الفصوص الكبد التي تعمل مباشرة تحت تغطية البريتوني.
   2. حالما يتم تجريد الوريد البابي الرئيسي، تطويق الفروع مع بطء دفع إلى الأمام وانتشار الحركات، ومن ثم سحب قطعة 1 سم من الحرير 6-0 التعادل حول الوريد البابي كل الفرع واضطر أنه.
4. اضطر فرع الفص الخلفي اليمين. (الشكل 3) الصعوبة التقنية فرع الخلفي حق يتمثل في حقيقة أن يشغل الشريان إلى الفص الخلفي اليمين عبر الفرع الخلفي حق الوريد البابي.
   1. سحب الشريان cranially جنبا إلى جنب مع الصفاق لفضح فرع الحق الوريد البابي مع ميكروفورسيبس منحنية.
   2. اضطر فرع الفص الخلفي اليمين مع قطع قبل التعادل الحرير 6-0. الفص الخلفي حق يتحول واضح شاحب مرة واحدة هي متصلة الوريد البابي.
   3. تجنب دفع ضد المقاومة أثناء الدوران منع تمزق الشريان أو الوريد البابي. في حالة حدوث نزيف، ممارسة الضغط لمدة دقيقة واحدة على الأقل مع مسحه القطن معقمة وثم إعادة تقييم. إذا لم يتوقف النزيف، التضحية بالحيوان.
5. اضطر الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) والفص الأيسر الوسيط (حب حياتي) فروع. هذه الفروع قد جذع مشترك واحد. (الشكل 3). فرع الفص المتوسط الأيسر ينشأ من الوريد البابي داخل لحمه للتعلم مدى الحياة.
   1. سد الوريد البابي مما يؤدي إلى التعلم مدى الحياة على حد سواء، وكذلك الحب بلادي فرع الحياة معا باستخدام قطع قبل التعادل الحرير 6-0.
   2. تجنب وقوع إصابات في الشرايين المؤدية إلى التعلم مدى الحياة والحب حياتي، قيد التشغيل ضمن الطبقة البريتوني. طالما هي مقشرة الصفاق مرة أخرى بعناية، أنها تبقى سليمة. التعلم مدى الحياة والحب حياتي بدوره واضح شاحب مرة واحدة هي متصلة الفروع.
6. اضطر فرع الفص كودات (الشكل 3). الوريد البابي مما يؤدي إلى إلى حد ما الفصوص كودات منفصلة في الفئران تقلع من الوريد البابي الرئيسي، ديستالي وميديالي لاقلاع فرع الفص الأيمن من الوريد البابي الرئيسي (مثل عدم دقة إينفيريورلي في البشر أو الحيوانات الكبيرة).
   1. تشريح بها وتطويق ذلك برفع الغشاء البريتوني بالإضافة إلى القناة الصفراوية والشرايين من الوريد البابي الرئيسي.
   2. تطويق فرع كودات الوريد البابي مع ميكروفورسيبس منحنى قادمة من أفقياً. الفصوص كودات اثنين دورة بالي واضح، مجرد فرع الفص كودات هي متصلة مع الحرير 6-0.
7. ربط هذه ثلاثة فروع الوريد البابي يؤدي إلى نضح الوريد البابي الحصري للفص اليمين الوسط (RML)، الذي يكون مرئياً بخط ترسيم الحدود متميزة بين الفص المتوسط الأيمن والأيسر.

4-الوريد البابي ربط مع ترانسيكشن (PVL + T)

1. أداء ترانسيكشن على طول الخط الفاصل بين RML وحب حياتي بعد PVL (3D الشكل).
2. استخدام ملقط فضة قطبين غير الشائكة مع تلميح الجراحة العصبية جيد جداً إلى بريكاوتيريزي نسيج الكبد خلق قطاع الكي 1 ملم على طول خط ترسيم الحدود.
3. استخدام مقص لقطع الأنسجة بريكاوتيريزيد بعناية. من الصعب جداً تقييم عمق ترانسيكشن بشكل صحيح. الهدف هو الحصول على مقربة من الوريد الأجوف قدر الإمكان، الذي يعمل إينتراهيباتيكالي في الفئران. ويرافق إصابة الوريد الأجوف نزيف واسعة النطاق، التي عادة ما لا يمكن وقفها.
4. في حالة الإصابة تطبيق ضغط لطيف باستخدام مسحه القطن، ولكن إذا لم توقف نزيف داخل دقيقة 3-4، التضحية بالحيوان. المحاولات الرامية إلى إصلاح في الوريد الأجوف استخدام خيوط عموما لم تكلل بالنجاح. الفئران حساسة جداً للجوية الانسداد، الذي قد يحدث في بعض الأحيان ويؤدي إلى سكتة قلبية.

5-المضاعفات قياس ضغط الوريد البابي وحجم التدفق

1. تقييم ضغط الوريد البابي عن طريق كانوليشن المباشر بإبرة G30 متصل بجهاز ضغط (الشكل 4 أ).
2. استخدام وضع المسبار تدفق حجم 2 مم أفقياً متصلاً بجهاز تدفق للقياس المباشر لحجم المدخل تدفق ما يزيد على 2 دقيقة (الشكل 4 باء). سجل البيانات فقط مع نوعية القياس مستقرة كما هو مبين في عرض الجهاز.
3. تقييم تدفق الوريد البابي والضغط بشكل منفصل بعد مجموعة الخطوات التي تحدد الإجراءات الخاصة بكل منها، أي ربط الخروج من ثلاثة فروع الوريد البابي أو ربط الخروج من ثلاثة فروع الوريد البابي بالإضافة إلى أداء ترانسيكشن متني بين RML والحب حياتي.

6-الخطوات النهائية لعملية جراحية

1. تأكد من أن يتم وضع الأمعاء في تجويف البطن قبل أن يغلق بشكل صحيح.
2. إغلاق الصفاق وجدار البطن مع خيوط الحرير 3-0 مع الإبر SH-1.
3. وأخيراً خياطة الجلد باستخدام Maxon 5-0.
4. تطهير الجلد مرة أخرى.
5. تطبيق مرة أخرى الملحية 5 مل تحت الجلد في جانبية النسيج تحت الجلد في البطن.

7-فولوميتري الكبد في الفئران باستخدام الأشعة المقطعية الحيوانات الصغيرة

1. 24 ساعة قبل التصوير المقطعي الأولى ضخ 200 ميكروليتر من عامل التباين في الوريد الذيل عن طريق قسطرة الوريدية G26.
2. استخدام ط م الجزئي لتفحص الفئران. وضع الحيوان في صندوق زجاجي للحث على التخدير العام (أولاً تدفق الدخول 5 المجلد % ل 30 ق، متبوعاً بتركيز إيسوفلوراني من 2-3 المجلد % حتى الحيوان تحت التخدير والحفاظ عليه طوال المسح الضوئي عبر نظام أنابيب). للحصول على جودة الصورة المثلى، مزامنة الأشعة المقطعية مع تنفس الحيوان.
3. تصدير بالتصوير الرقمي والاتصالات في الطب (DICOM) الملفات وتحليلها باستخدام المجال العام التصوير منصة أوسيريكس 8.0. استخدم أداة "المضلع مغلقة" لرسم الحدود الفص استناداً إلى راديودينسيتيي التباين نانوحبيبات في الكبد واستخدام منطقة القائمة الفائدة (ROI) لحساب حجم الكبد الجزئي (انظر الشكل 2 ألف في شادي et al. ¹⁷)
4. في النموذج القياسي، والسماح للكبد لتنمو على مدى 3 أيام والحصول عليها يوميا الأشعة المقطعية لتقييم حجم الزيادة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

ربط الوريد البابي اثنين من الإجراءات الجراحية المختلفة (PVL) و PVL مع ترانسيكشن (PVL + T) النتيجة في حركية النمو اختلافاً واضحا. PVL يدفع زيادة معتدلة في الحجم في غضون 3 أيام، بينما يمكن أن يكون فص اليمين الوسط أكبر بكثير (RML) في PVL + T رأيت (الشكل 5). ويمكن التحقق من ذلك ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ويقدم هذا البروتوكول نموذج حيوان لالبس مع تضخم السريع فعل PVL + T، الذي تضاعف تقريبا حجم الزيادة في غضون 3 أيام PVL وحدها بالمقارنة. ¹⁷ الفص الكبدي الأوسط الحق يستخدم كفلقة نموذجية لزراعة كبد سبب الفص الكبدي الأوسط كتلة متني متجاورة واحدة تم توفيره بواسطة الأوردة مدخل منفصل إلى الي...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurane, 250 mL bottles	Attane, Piramal, Mumbai, India	LDNI 22098	Standard vet. equipment
Tec-3 Isofluorane Vaporizer	Ohmeda, GE-Healthcare, Chicago, IL	not available anymore	Standard vet. equipment
Buprenorphine (Temgesic)	Indivior, Baar, Switzerland	7680419310353	GTIN-number
Vitamine A ointment	Bausch&Lomp, Zug, Switzerland	7680223980247	GTIN-number
Atropine sulfate 0.5 mg/mL	Sintetica SA, Mendrisio, Switzerland	7680565330045	GTIN-number
Microsurgery microscope	Olympus, Tokio, Japan	SZX10	Standard vet. equipment
Betadine	Mundipharma, Basel, Switzerland	7680342821377	GTIN-number
Sponges	Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany	NK83.1	Mini-sponges
Abdominal Wall retractors	N/A	N/A	Self-made from paper clips and Q-Tips
3-0 silk	Ethicon, Sommerville, NJ	K872H	Standard surgical
Scissors	World precision instruments (WPI), Sarasota, FL	503371	Standard microsurgical
Adson forceps	World precision instruments (WPI), Sarasota, FL	501244-G	Standard microsurgical
Fine tips microforceps	World precision instruments (WPI), Sarasota, FL	501976	Tips need to be polished regularly
Curved fine tips microforceps	World precision instruments (WPI), Sarasota, FL	504513	Essential to go around the portal vein branches
6-0 LOOK black braided silk	Surgical Specalities Corporation, Wyomissing, PA	SP114	Spool, precut prior to the procedure
2-0 silk sutures	Ethicon, Sommerville, NJ	K833	Standard surgical
5-0 maxon sutures	Covidien, Dublin, Ireland	6608-21	Standard surgical
Bipolar microforceps	Sutter, Freiburg, Germany	780148SGS	Essential for parenchymal transection
Q-tips small	Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany	EH11.1	Standard surgical
Q-tips big	Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany	XL54.1	Standard surgical
G30 needle	Terumo, Tokyo, Japan	NN-3013R	Standard anesthesia equipment
2 mm volume flow probe	Transonic Systems, Ithaca, NY	MA-2PS	Smallest available probe for HAT-311 flow meter
Transonic flow meter	Transonic Systems, Ithaca, NY	HAT-311 Transsonic flow QC meter	One of the  first generation flow flow meters for surgery
ExiTron nano 12,000	Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany	130-095-698	Nanomoloecular contrast medium that opacifies liver and spleen
G26 intravenous catheter	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	391349	Standard anesthesia equipment
Quantum FX MicroCT	Perkin Elmer, Waltham, MA	N/A	Standard small animal CT scanner at the institute of physiology, University of Zürich
OsiriX 8.0	Pixmeo Sarl, Geneva, Switzerland	N/A	Public domain software : www.pixmeo.com