JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا الأسلوب موضع الفاصلة الوريد الطعوم في الأرانب، وتوصيل الطعوم، وتحقيق التعبير التحوير دائمة. وهذا ما يسمح التحقيق في أدوار الفسيولوجية والمرضية المتسلسلات ومنتجاتها البروتين في عروق المطعمة، واختبار للعلاج الجيني لمرض الابتزاز المنوال.

Abstract

الابتزاز المنوال سيخضع لعملية جراحية لعلاج مرض الانسداد الشرياني؛ المشتركة ومع ذلك، يقتصر النجاح على المدى الطويل فشل الابتزاز بسبب تجلط الدم، وتضخم إينتيمال وتصلب الشرايين. والهدف من هذه المادة هو عرض أسلوب لوضع الطعوم فاصلة وريدي الثنائية في أرنب، ثم ترانسدوسينج الطعوم مع ناقل نقل جينات يحقق التعبير التحوير دائمة. يسمح الأسلوب التحقيق في أدوار البيولوجي للجينات ومنتجاتها البروتين في التوازن الابتزاز المنوال العادي. كما أنه يتيح اختبار المتسلسلات للأنشطة التي يمكن أن تمنع الوريد الاختلاس الفشل، على سبيل المثال-، ما إذا كان التعبير عن التحوير يمنع نمو نيوينتيمال، ويقلل من التهاب الأوعية الدموية، أو يقلل من تصلب الشرايين في الأرانب تغذية مع اتباع نظام غذائي عالي الدهون. أثناء جراحة بقاء أولية، اقتطعت الجزء من اليمين واليسار الخارجية حبل الوريد ووضعها على الصعيد الثنائي كنهاية إلى جانب الشريان السباتي المشترك المعكوسة فاصلة الطعوم. خلال عملية جراحية بقاء ثانية، يؤديها 28 يوما في وقت لاحق، كل من الطعوم يتم عزل من الدوران مع مقاطع الأوعية الدموية ولومن شغل (عن طريق أرتيريوتومي) مع محلول يحتوي على ناقل (حداد) أدينوفيرال تعتمد على مساعد. بعد حضانة 20 دقيقة، حل المتجهات ويستنشق، أرتيريوتومي يتم إصلاح واستعادة التدفق. يتم حصاد الأوردة في نقاط زمنية تمليها البروتوكولات التجريبية الفردية. التأخير مدة 28 يوما بين موضع الابتزاز وتوصيل ضروري لضمان تكييف الابتزاز المنوال للدورة الدموية الشريانية. ويتجنب هذا التكيف الفقدان السريع للتعبير التحوير الذي يحدث في الوريد ترقيع ترانسدوسيد قبل أو بعد التطعيم مباشرة. الأسلوب فريد في قدرته على تحقيق التعبير التحوير دائم ومستقر في عروق المطعمة. مقارنة بنماذج الابتزاز المنوال الحيوانات الكبيرة الأخرى، الأرانب بمزايا منخفضة التكلفة وسهلة المناولة. بالمقارنة مع نماذج الابتزاز المنوال القوارض، الأرانب لها أكبر وأسهل للتعامل مع الأوعية الدموية التي توفر الأنسجة الوفيرة للتحليل.

Introduction

تصلب الشرايين هو مرض التهاب مزمن الذي تراكم في الدهون والتهاب في جدار الأوعية الدموية تؤدي إلى تضييق التجويف السفينة والنوبات القلبية والسكتات الدماغية وفقدان أطرافه1،2. التدخلات عن طريق الجلد (على سبيل المثال-، القسطرة والدعامات) والعلاج الطبي (مثلاً.، وكلاء statins و antiplatelet) علاج مفيد لتصلّب الشرايين؛ ومع ذلك، أنها غالباً غير فعالة في علاج مرض الانسداد الحاد سواء في التداولات الشرايين التاجية والطرفية. تجاوز التطعيم، باستخدام شرائح الوريد الغازي، وما زال إجراء مشترك لعلاج المرضى الذين يعانون من منتشر شديد، وأمراض الأوعية الدموية التاجية والطرفية3،4. بيد الوريد الطعوم توضع في التاجي كلا والتداولات الطرفية الفقيرة معدلات سالكيه طويلة الأجل. في تداول التاجية، التي تغطي حوالي 10-20% المنطلق الطعوم هي تغطي في السنة 1 و 50% قبل 10 سنوات5،6. في تداول هامشية، هي معدلات فشل الابتزاز المنوال 30-50% في 5 سنوات7.

العلاج الجيني نهج جذابة لمنع فشل الابتزاز المنوال نظراً لأنه يمكن تسليم منتج جين علاجي تحديداً في الموقع لهذا المرض. وبناء على ذلك، اختبرت العديد من الدراسات الإكلينيكية الوريد الاختلاس الجينات العلاج8،9. ومع ذلك، أساسا جميع هذه الدراسات قد فحص نجاعة في أوائل الوقت نقاط (2-12 أسبوعا)10،11،،من1213،14،15، 16 , 17-ونحن على علم بأية أدلة على أن التدخلات العلاج الجيني يمكن أن توفر دائم الحماية (سنوات) من أواخر فشل الابتزاز المنوال الذي ينتج عادة من تضخم وتصلب الشرايين نيوينتيمال4. قمنا بتطوير أسلوب يتيح التعبير التحوير دائم في عروق المطعمة، ومما يسمح اختبار تدخلات العلاج الجيني في النقاط الزمنية المتأخرة فضلا عن أوائل. تحقيق التعبير التحوير دائم، يتضمن الأسلوب ناقلات حداد واستراتيجية توصيل المتأخر. توفير ناقلات حداد التعبير التحوير المطول لأنهم يفتقرون إلى المورثات الفيروسية، منع الاعتراف (ورفض) من الخلايا ترانسدوسيد18،المناعي19،20، 21-تأخر توصيل (المنجزة 28 يوما بعد إيداع الاختلاس) يمنع فقدان الخلايا ترانسدوسيد أثناء عملية أرتيرياليزيشن التي تحدث مبكرا بعد تطعيم22.

أساليب أخرى تحقق التعبير التحوير العلاجية في الجدار الابتزاز المنوال تعتمد على توصيل الابتزاز المنوال في وقت الفساد موضع10،11،،من1215،16 ،17. عندما تقاس متسلسل، رفض التعبير التحوير باستخدام هذا النهج بسرعة بعد توصيل22،23. تبعاً لذلك، لم تقم دراسة الدراسات باستخدام هذا النهج الفعالية تتجاوز 12 أسبوعا بعد التطعيم الوريد، مع آخر لا تقييم فعالية تتجاوز 4 أسابيع. وفي المقابل، يحقق لنا أسلوب الابتزاز المنوال التعبير التحوير التي استمرت ستابلي ل 24 أسبوعا على الأقل، وعلى أساس دراسات مماثلة تجري في الشرايين المحتمل تستمر وقتاً أطول بكثير من،من2224. ونحن ندرك لا الأخرى المنطلق الاختلاس الجينات العلاج التدخل الذي يحقق التحوير مستقرة في التعبير عن هذه المدة.

استخدمنا نموذج أرنب لتطوير أسلوب لدينا. البعض الآخر قد استخدمت القوارض، الأرانب، أو الحيوانات الكبيرة لاختبار المنطلق graft الجينات العلاج10،11،،من1215،16،17،25، 26. بالمقارنة مع نماذج القوارض، الأرانب هي أكثر تكلفة وتخضع لمتطلبات تنظيمية أكثر صرامة. بيد أن المقارنة للحيوانات الكبيرة (على سبيل المثال. والخنازير والكلاب)، الأرانب أقل تكلفة لشراء والبيت وأسهل بكثير للتعامل مع. وعلاوة على ذلك، تشبه الأرنب سفن سفن البشرية فسيولوجيا27، فكبيرة بما فيه الكفاية أن يمكن استخدامها لاختبار التدخلات عن طريق الجلد28،29، وأنها توفر الأنسجة كافية نقاط نهاية متعددة (مثلاً.، علم الأنسجة، والبروتين، الحمض النووي الريبي) يمكن دراسة استخدام22،30عينة واحدة من الأوعية الدموية. وبالإضافة إلى ذلك، عندما يتم تغذية الأرانب مع الطعوم الوريد مع اتباع نظام غذائي عالي الدهون، يطورون الوريد الاختلاس تصلب الشرايين31،32، وسبب شائع للشريان التاجي الالتفافية الوريد الاختلاس فشل4،5 . يمكن أن تخدم هذه الطعوم الوريد أرنب تصلب الشرايين كركيزة لاختبار تدخلات العلاج الجيني تسليمها مع هذا الأسلوب. بروتوكول المتوفرة يمكن أن تساعد المحققين لإتقان المهارات التقنية اللازمة لتحقيق التعبير التحوير دائم في ترقيع الوريد أرنب.

Protocol

جميع البروتوكولات الحيوانية والدراسات بموافقة جامعة "مكتب واشنطن للرفق بالحيوان".

1-مرحلة ما قبل التشغيل (بالنسبة لجميع العمليات الجراحية)

  1. تخدير الأرنب مع xylazine الكيتامين و 1.5 ملغ/كغ 30 ملغ/كغ عن طريق الحقن العضلي (IM) في العضلات باراسبينوس.
    ملاحظة: المواد الغذائية والمياه لا تقتصر قبل الجراحة.
  2. انتظارا للعمق الكافي للتخدير، إعداد الجداول في غرفة التحضير وغرفة العمليات (أو).
    1. إعداد غرفة التحضير لحلق الرقبة الأرنب ووضع المنفذ (رابعا) عن طريق الحقن الوريدي في الإذن (جراحة البقاء على قيد الحياة فقط). ضع مرهم العيون، التصحيح شيفتشنكو (جراحة البقاء على قيد الحياة)، ومقص الشعر، الكحول لوح الإعدادية، 24-ز × ¾ "القسطرة، ومنفذ الحقن، والشريط الجراحي في إعداد الجدول.
    2. في أو، قم بإعداد معدات الرصد والمرتبطة المسابر (رسم القلب (EKG) ونبض oximetry (SpO2)، ودرجة الحرارة). تعد المضخة الرابعة مع حقيبة الرابع مالحة 100 مل مع إبرة ز 18 أو 19-ز ومعدل التدفق على النحو 10 مل/ساعة/كغ (جراحة البقاء على قيد الحياة فقط). قم بإعداد معدات الأكسجين وإيسوفلوراني مع نوسيكوني (الوريد التطعيم أو حصاد العمليات الجراحية).
      1. للمساعدة في تأمين نوسيكوني للأرنب، حلقة شريط من شاش حول أنبوب أن إمدادات الغاز إلى نوسيكوني. يجب أن تحيط هذه الحلقة الأنبوب حيث تعلقها نوسيكوني. نهايات الحرة قطاع الشاش يجب على حد سواء أن تكون حوالي 45 سم طويلة. ضع نوسيكوني (مع شاش المرفقة) في نهاية الجدول الرئيسي.
    3. بدوره على تعميم الماء و/أو القسري الاحترار بطانية على الجدول أو الهواء. على غطاء الاحترار، ضع منشفة تدحرجت كدعم الرقبة ووضع صفيحة القطب المشتتة اليكتروكاوتيري.
    4. كمسكن محلي، ضم في حقنه 1 مل ليدوكائين 2% HCl وتمييع 1 مل بوبيفاكيني 0.5% HCl. الفيروس إلى التركيز المطلوب (هنا، استخدم 2 × 1011 الجسيمات الفيروسية/مل لحداد) في دميم العقيمة والحفاظ على الجليد (جراحة نقل الجينات فقط).
    5. وبعد الوصول إلى عمق الكافي مخدر، إعداد الأرنب لإجراء عملية جراحية.
      ملاحظة: اختبار لانعدام منعكس سحب دواسة لضمان عمق مخدر كافية. مواصلة رصد المعاكسة دواسة طوال عملية جراحية.
      1. تطبيق مرهم العيون على عيون الأرانب.
      2. للسماح بوضع مجس درجة حرارة المستقيم، اضغط بأصابع القفاز فقط فوق المستقيم وتحريك الأصابع نحو فتحه الشرج لإزالة ستولينج من المستقيم للأرنب.
      3. يحلق الأرنب من الشق القصية إلى حافة الفك السفلي. حلق إذن واحدة للموضع الرابع والإذن المعاكس لإدارة التصحيح شيفتشنكو (جراحة البقاء على قيد الحياة فقط). يحلق أصابع الأوسط الخلفي الأيسر لموضع التحقيق SpO2 .
    6. لناقلات ضخ جراحة، التنبيب الأرنب. استخدام 4 مم O.D./3 مم I.D. أونكوفيد أنبوب داخل الرغامى، مترابطة أكثر منظار المفصل. وضع الأرنب في ريكومبينسي القصية وفرط تمديد الرقبة. عقد الفم للأرنب مفتوحة على مصراعيها واستخدام منظار المفصل لتصور طيات المزمار وسرطانات. خلال الإلهام، برفق إدراج أنبوب داخل الرغامى عن طريق الحنجرة والقصبة الهوائية.
    7. للعمليات الجراحية البقاء على قيد الحياة، وضع وتأمين قسطرة الرابع 24-ز الوريد أرنب أذنه اليسرى وكاب مع منفذ حقن. تطبيق تصحيح 25 ميكروغرام/ح شيفتشنكو على الإذن اليمنى للأرنب.
      ملاحظة: البروتوكول طبيب جراح المتمركزة على الجانب الأيمن للأرنب. إذا كانت الجراح على الجانب الأيسر للأرنب، عكس الجانبين في هذه الخطوة للحفاظ على الأسلاك والرابع العكس من الجراح. قم بالتبديل الجانبين في الخطوات المقبلة حسب الحاجة.
    8. لهذا السياق إدارة عيادات التطعيم والحصاد، التخدير العام مع نوسيكوني؛ لعملية جراحية ضخ ناقلات الأمراض، إدارة التخدير العام عن طريق أنبوب داخل رغامى.
      ملاحظة: يمكن استخدام تنبيب لجميع العمليات الجراحية.  في تجربتنا، ولكن مخاطر المضاعفات الناجمة عن الصدمات الرغامى والحنجرة خلال التنبيب يمكن أن تفوق الفوائد التنبيب.  الجراحة التي تتضمن نقل الجينات بطعم (خاصة في الأرانب المروية بنسبة الكولسترول في الدم) هو الجراحة فقط في تنبيب التي يبدو أن توفر فائدة صافية.
    9. حمل الأرنب إلى أو. مع منشفة دعم الرقبة وضعه أسفل الرأس للأرنب، مكان الأرنب في موقف ضعيف على طاولة العمليات. بلطف تمديد الرقبة أرنب حتى يكون مستقيم وأفقي تقريبا.
    10. مكان نوسيكوني للأرنب (الوريد التطعيم وحصاد العمليات الجراحية) أو توصيل أنبوب داخل الرغامى (ناقل ضخ جراحة) مع س2 في 1 لتر في الدقيقة، وبدء إيسوفلوراني. في حالة استخدام نوسيكوني، تأمين بالتفاف نهايات الشرائط شاش المرفقة حول الرقبة الدعم منشفة الأرنب. ضبط تركيز isoflurane حسب الحاجة (عادة 1-2 ٪) المحافظة على مستوى العمليات جراحية للتخدير.
    11. مركز لوحة electrocautery القطب المشتتة تحت ظهره الأرنب. إدراج مسبار درجة حرارة المستقيم وتطبيق SpO2 التحقيق ويؤدي رسم القلب للأرنب.
    12. قم بتوصيل خط الرابع المالحة المنفذ القسطرة في الإذن اليسرى للأرنب وتبدأ مضخة التسريب الرابع في 10 مل/ساعة/كغ. بعد ح 1، خفض معدل ضخ المالحة إلى 5 مل/ساعة/كغ.
    13. فضفاضة ربط الأرجل الأمامية للأرنب على طاولة العمليات كضبط النفس.
      ملاحظة: بشكل اختياري، طاولة بلاستيكية صغيرة يمكن وضعها على الأرنب لمنع الجراح من الضغط على الصدر/البطن في الأرنب، ويحتمل أن يسبب ارتداد المعدي والطموح.
    14. حقن ليدوكائين/bupivacaine (2 مل، مزيج 50/50، والخطوة 1.2.4) تحت الجلد (ميدان) في الرقبة على طول خط الشق المخططة، لتخدير موضعي.
    15. مساعد تطهير العمليات الجراحية للموقع مع 3 التناوب يدعك غلوكونات الكلورهيكسيدين والكحول، ثم رش الموقع مع بوفيدون. وقد فرك الجراح، ثوب، والقفازات، اتباع مبادئ العقيم.
      1. إجراء العمليات الجراحية في البقاء على قيد الحياة تحت ظروف معقمة. يكون مساعد التعامل مع أية عناصر غير معقمة، وتمرير مواد معقمة أسيبتيكالي بالجراح أو أسيبتيكالي وضعها على الجدول صك رايات.
      2. وقد الجراح استخدام المناشف المعقمة أسيبتيكالي التلاعب بمعدات غير معقمة مثل المجهر. وقد الجراح ارتداء 2 × الموازين الجراحية أثناء أداء النصف الأول من الجراحة.

2-السياق الاختلاس جراحة (البقاء على قيد الحياة)

  1. إعداد الصكوك وميدان العقيمة.
    1. يكون المساعد فتح حزم معقمة (ثني جدول، ثني ورق، والمناشف 6) ونقل المحتويات أسيبتيكالي بالجراح.
    2. ثني الجدول الصك. ضع ثني الورق والمناشف المعقمة إلى الطاولة صك رايات. مع المناشف 4، ثني الأرنب، تاركاً فقط في موقع العمليات الجراحية في الرقبة مكشوف. وتكمن ثني الورقة على الأرنب. سيتم استخدام منشفة واحدة في وقت لاحق، وآخر نسخة احتياطية.
    3. يكون المساعد فتح حزمة أداة معقمة وتمرير علبة صك أسيبتيكالي بالجراح. ترتيب الأدوات على الطاولة الصك.
    4. مساعد فتح المعدات التالية وأسيبتيكالي أما تمريره إلى الجراح أو وضعه على الجدول الصك: واحد 1 مل حقنه، واحد 3 مل حقنه، واحد 20 مل حقنه، واحد ز 21 إبرة، 3-0 polyglycolic حمض (PGA) خياطة، وخياطة الشبكة 5-0 ، 7-0 البوليبروبيلين خياطة، والقسطرة رابعا ز 24 واحد.
    5. تأمين كابل اليكتروكاوتيري لثني يغطي الأرنب، استخدام 7.25 "الملقط كانتروويتز. إسقاط نهاية توصيل الكبل على حافة طاولة العمليات أن تكون متصلة بوحدة كهربية وتشغيل بواسطة المساعد.
    6. ملء المحاقن 20 مل مع المالحة العقيمة من حقيبة المالحة أو قنينة أجراها المساعد. استخدام هذا المحلول الملحي حسب الحاجة لمنع جفاف الأنسجة المعرضة أثناء العملية.
    7. إعداد 5 مل المحلول الملحي الفسيولوجي هيبارينيزيد عن طريق إضافة 0.1 مل الهيبارين 5000 وحدة دولية/مل إلى 5 مل المحلول الملحي، أي.، الهيبارين 100 وحدة دولية/مل، في وعاء جراحية صغيرة. استخدام هذا الحل لطرد الاختلاس الوريد والشريان السباتي بانتظام أثناء إجراء التطعيم.
    8. قطع حفرة في ثني الورقة عبر موقع الجراحية في الرقبة للأرنب. استخدام المشابك منشفة المشبك زوايا الحفرة في مكان للمناشف الكامنة.
  2. تشريح الأوعية الدموية
    ملاحظة: استخدم 2 x الصفائحي الجراحية للمعونة مع هذا الجزء من عملية جراحية.
    1. قطع الجلد مع electrocautery على طول خط الوسط بين الشق القصية والفك السفلي (حوالي 7-9 سم في الطول) والمشبك الرقبة الجلد الأرنب للمناشف مع المشابك منشفة. في نهاية والذيلية، جعل قطع أفقية قصيرة عن طريق اللفافة مع electrocautery. صراحة تشريح تحت اللفافة على طول خط الوسط كامل باستخدام مقص كبير. قطع طريق الطبقة اللفافي تشريح على طول خط الوسط مع electrocautery.
    2. تبدأ على الجانب الأيسر. تشريح بين العضلات ستيرنوهيويد تغمر القصبة الهوائية والعضلات ستيرنوسيفاليك على شكل V، لفضح الشريان السباتي المشترك.
    3. تشريح جزء 4-5 سم من الشريان السباتي المشترك وفروعها الكبيرة (عادة 1-2 كل جانب) خالية من الأنسجة المحيطة بعناية. تمديد التشريح من القاعدة العنق بروكسيمالي لعبور العصب البلعوم ديستالي. استخدام حلقات السيليكون الجراحي للمساعدة في سحب الشريان السباتي أثناء التشريح. سد أكبر فروع الشريان السباتي المشترك مع خيوط الحرير 5-0 قبل قطع كل فرع ديستالي.
      ملاحظة: ينبغي الحرص على عدم تعكير العصب المبهم الذي يوازي الشريان السباتي المشترك، أو أصغر الأعصاب التي عبر الشريان.
    4. كرر تشريح على الجانب الأيسر (الخطوة 2.2.3).
    5. استخدام ملقط الأنسجة القابضة لإغلاق مؤقتاً في طبقة النسيج تحت الجلد. تشريح اللفافة السطحية من الجلد على الجانب الأيمن حتى يتم كشفها حبل الوريد الخارجي. تشريح قطعة 4-5 سم في الوريد الخارجي وفروعها من الأنسجة المحيطة، ليجاتينج فروع صغيرة مع خيوط الحرير 5-0 قبل قطع الفرع.
    6. كرر تشريح على الجانب الأيسر (الخطوة 2.2.5).
    7. حقن الهيبارين (150 وحدة دولية/كغ) في القسطرة الرابع ومطاردة مع 10 مل من المحلول الملحي.
    8. قياس قطعة 3 سم في الوريد الخارجي على الجانب الأيمن واضطر والذيلية نهاية الجزء بخياطة الحرير 5-0. السماح الوريد لملء مع الدم، ثم سد نهاية الجمجمة الجزء المتعلق بالوريد. تقسيم الجمجمة نهاية الجزء الخارجي حبل الوريد، واستواء السفينة مع هيبارينيزيد المالحة العادي (100 U/mL) باستخدام حقنه 3 مل يعلق على الرابع 24-ز-قسطرة بعناية. تقسيم الجزء المنطلق في نهايته والذيلية. ضع الجزء المنطلق في موقف موحد، الذي ينتهي والذيلية والجمجمة تمييزها لا لبس فيه.
  3. تطعيم الوريد
    1. واسمحوا المساعد إزالة الصفائحي الجراحية من الجراح ونقل مجهر جراحي (25 س) في الموقف.
      ملاحظة: ينبغي ثني الجراح منشفة عقيمة على المجهر. وهذا يسمح للجراح للتعامل مع المجهر مع الحفاظ على العقم.
    2. المشبك الشريان السباتي المشترك الحق في كل نهاية الجزء المعزول مع ميني-المشابك، وضع المشبك الجمجمة أولاً للسماح للشريان ملء، ثم وضع المشبك والذيلية.
    3. قص 1 × 2 سم قطعة من الورق شديدة (متاح من التغليف خياطة عقيمة) ووضعه تحت الشريان السباتي المشترك، لتحسين التعرض.
    4. نفذ أرتيريوتومي الجمجمة فقط المشبك والذيلية (أرتيريوتومي والذيلية). يجب أن يكون طول أرتيريوتومي يساوي قطر نهاية الجمجمة الجزء المتعلق بالوريد. إدراج المحاقن مع القسطرة الرابع عن طريق أرتيريوتومي والذيلية ومسح تجويف الشريان السباتي مع المحلول الملحي العادي هيبارينيزيد.
    5. خياطة نهاية الجمجمة من الوريد إلى أرتيريوتومي والذيلية، استخدام 7-0 البوليبروبيلين خياطة بغرزة واحدة (الشكل 1).
      1. ضع أول غرزة خياطة نهاية والذيلية أرتيريوتومي والذيلية إلى نهاية الجمجمة الجزء المتعلق بالوريد. مكان الإبرة الثانية 180 درجة من غرزة الأولى، خياطة نهاية الجمجمة أرتيريوتومي والذيلية إلى نهاية الجمجمة الجزء المتعلق بالوريد.
      2. مكان غرزة الثالثة على مسافة واحدة من غرز الأولى والثانية، على الجانب الأفقي لملامسة نقطة. مكان الإبرة الرابعة على الجانب الآنسي من ملامسة، مسافة واحدة من غرز الأولين وقبالة غرزة الثالثة. ضع 4 غرز إضافية (غرز 5-8) بين كل من 1-4 غرز.
      3. أداء أرتيريوتومي الجمجمة الجانب والذيلية للقصاصة الجمجمة. ينبغي أن تكون المسافة بين نهاية الجمجمة أرتيريوتومي الجمجمة ونهاية أرتيريوتومي والذيلية والذيلية نفس طول الجزء المتعلق بالوريد. طول أرتيريوتومي الجمجمة يساوي قطر نهاية الجزء المنطلق والذيلية.
    6. تمديد هذا السياق cranially من ملامسة، وضع على رأس السباتي، دون إدخال أي من التقلبات. تدفق الشريان السباتي والوريد مع المحلول الملحي العادي هيبارينيزيد عبر أرتيريوتومي الجمجمة. المياه المالحة سوف تتدفق من خلال الشريان، في هذا السياق عن طريق ملامسة والذيلية وسيتم الخروج من نهاية الحرة وأونسوتوريد الوريد. يتم مسح هذا السياق أيضا يمنعها من التواء.
    7. خياطة نهاية والذيلية الوريد إلى أرتيريوتومي الجمجمة (الشكل 1).
      1. ضع أول غرزة خياطة والذيلية نهاية أرتيريوتومي الجمجمة إلى نهاية الجزء المنطلق والذيلية. مكان غرزة ثانية خياطة نهاية الجمجمة أرتيريوتومي الجمجمة إلى نهاية الجزء المنطلق والذيلية. أكمل ملامسة كما هو موضح في الخطوة 2.3.5.2. قبل العقدة الأخيرة يرتبط في ملامسة الجمجمة، بإيجاز فتح المشبك في نهاية الجزء الشريان السباتي المشترك تشريح، للسماح بالعودة النزيف الذي يغسل خارجاً في الهواء في الشريان السباتي والمنطلق المطعمة الجمجمة. ثم شد العقدة الأخيرة.
    8. إطلاق سراح المشبك الجمجمة للسماح بشغل الابتزاز المنوال بالدم وثم حرر المشبك والذيلية. ينبغي أن ينظر نبضات انتعش في الابتزاز المنوال. تطبيق ضغط لطيف مع شاش جافة لوقف أي نزيف في أناستوموسيس.
    9. اضطر كل من طرفي الجزء الشريان السباتي المشترك الذي يربط أناستوموسيس مع خياطة حرير 3-0، وتقسيم السباتي في منتصف المسافة بين الحروف المركبة (الشكل 1). تطبيق عدة قطرات من بابافرين (3.5 مغ/مل) إلى الشريان السباتي المتاخمة لكل ملامسة.
    10. حقن الهيبارين (75 وحدة دولية/كغ) في القسطرة الإذن الرابع ومطاردة مع 10 مل من المحلول الملحي. وفي هذا الوقت، حقن البوبرينورفين (ميدان، 0.02 مغ/كغ) توفير التسكين بعد العملية الجراحية حتى التصحيح شيفتشنكو قدمت مستويات البلازما مسكن شيفتشنكو.
      ملاحظة: قد يكون حقن البوبرينورفين إضافية (ميدان، 0.02 مغ/كغ) ح 6 اللازمة بعد الحقن الأول للحفاظ على التسكين حتى شيفتشنكو بلازما يبلغ تركيز علاجي.
    11. تكرار التطعيم على الجانب الأيسر (الخطوات 2.2.8، 2.3.2-2.3.9).
    12. إغلاق الأنسجة تحت الجلد بخياطة الشبكة 5-0 باستخدام نمط مستمر. إغلاق الجلد بخياطة الشبكة 3-0 استخدام نمط الأدمة. دفن في عقده على كلا طرفي.
  4. الإنعاش بعد الجراحة، وتنظيف، والرعاية
    ملاحظة: تسمح الأرنب للتعافي من التخدير في بيئة هادئة وهادئ. رصد الأرنب بشكل مستمر لدرجة حرارة الجسم والأوكسجين مناسبة حتى أنه قد تعافي تماما.
    1. إيقاف إيسوفلوراني والأكسجين وافصل الجهاز التخدير من الأرانب. قطع أنابيب السوائل رابعا الأرنب، لكن مغادرة الميناء الرابع في هذا السياق الإذن للوصول إلى الناشئة.
    2. نقل الأرنب في قفص انتعاش ووضعه على جانبه. تقديم الدعم الحراري مع الماء الدافئ بطانية (أو الاحترار الجوي القسري). تعطي س2 من نوسيكوني حتى SpO2 مستقر.
    3. حتى الأرنب يمكن الجلوس معا وأمبولاتي في قفصة، فليب الأرنب في الجانب الآخر كل 15 دقيقة. ثم إزالة قنية رابعا الإذن والعودة الأرنب إلى قفصة. عودة الأرنب إلى شركة الحيوانات الأخرى إلا بعد أن هو تعافي تماما من التخدير.
    4. التخلص من أي نفايات البروتوكولات المناسبة التالية للوقاية من الإخطار البيولوجية والتخلص من النفايات الأدوات الحادة.
    5. بعد، التحقق من الصحة للأرنب والجرح الجراحي كل يوم. إدارة البوبرينورفين بحاجة للألم لا تديرها التصحيح شيفتشنكو. قم بإزالة التصحيح شيفتشنكو بعد العمليات الجراحية في اليوم 3.

3-ترانسكوتانيوس بالموجات فوق الصوتية

  1. تقييم سالكيه الابتزاز، إجراء الامتحان بالموجات فوق الصوتية على أرنب تخديره من غير 5-7 أيام بعد الجراحة الابتزاز المنوال وجراحة نقل الجينات.
    1. لف الأرنب تخديره من غير أمن في بطانية ومكان الأرنب ضعيف في الطب البيطري الخامس-الحوض الصغير مع الرقبة مدد. يحلق في الرقبة، أو إذا لزم الأمر، إزالة الشعر مع عامل مزيل الشعر. تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية على العنق وأداء امتحان بالموجات فوق الصوتية.
      ملاحظة: يتم امتحان الموجات فوق الصوتية أيضا في تخديره من الأرانب في وقت جراحة نقل الجينات وجراحة الحصاد الاختلاس المحطة الطرفية لدراسة سالكيه الفساد وقياس قطر التجويف الاختلاس. الامتحان يتم فقط قبل تنقية العنق وتتم بطريقة مماثلة أما بالنسبة للأرانب غير تخديره.

4. جراحة نقل الجينات تجري ~ 28 يوما بعد موضع الابتزاز (البقاء على قيد الحياة للجراحة)

  1. إعداد الصكوك وميدان العقيمة.
    1. اتبع الخطوات 2.1.1-2.1.3. في جراحة الابتزاز المنوال.
    2. اسمحوا المساعد فتح المعدات التالية وأما أسيبتيكالي تمريره إلى الجراح أو وضعه على الجدول الصك: ستة 1 مل المحاقن (بالإبرة)، واحد 3 مل حقنه، محقنة 20 مل واحد، واحد ز 21 إبرة، واحد 19-ز الإبرة، وخياطة الشبكة 3-0 ، خياطة الشبكة 5-0 وخياطة البوليبروبيلين 7-0 وهما ز 24 رابعا القسطرة وتحقيق تدفق دم معقمة.
    3. اتبع الخطوات 2.1.5-2.1.6. في جراحة الابتزاز المنوال.
    4. إعداد حقنه 1 مل واحد مع 1 مل دميم للغسيل الاختلاس الشريان والوريد وإعداد اثنين 1-مل-المحاقن مع الفيروسات الحل (~ 0.5-0.7 مل الفيروسات الحل/الوريد الاختلاس). واسمحوا المساعد ذوبان الجليد الفيروس وتمييع في دميم. إعداد محقنة 3 مل واحد مع 0.5 مل من يدوكائين/bupivacaine (ميكس 50/50، خطوة 1.2.4).
    5. اتبع الخطوة 2.1.8 في جراحة الابتزاز المنوال.
  2. عزل ترقيع الأوردة والشرايين السباتي المتاخمة
    ملاحظة: يجب استخدام 2 × الموازين الجراحية لهذا الجزء.
    1. قطع الجلد مع electrocautery على طول خط الوسط بين الشق القصية والفك السفلي (حوالي 7-9 سم في الطول) والمشبك فتح الجلد مع المشابك منشفة. تطبيق 0.5 مل من يدوكائين/bupivacaine (ميكس 50/50، خطوة 1.2.4) إلى الأنسجة تحت الجلد.
    2. في نهاية والذيلية، جعل قطع أفقية قصيرة عن طريق اللفافة مع electrocautery. صراحة تشريح تحت اللفافة على طول خط الوسط أكمله. مع electrocautery، قطع طريق لفافة تشريح على طول خط الوسط.
    3. تبدأ على الجانب الأيسر. تشريح بين العضلات ستيرنوهيويد تتراكب القصبة الهوائية والعضلات ستيرنوسيفاليك على شكل V، لفضح الفساد الوريد. عزل بعناية الابتزاز المنوال و 1.5-2.0 سم الشريان السباتي المتاخمة للابتزاز على جانبي الجمجمة ووالذيليه.
    4. كرر تشريح على الجانب الأيسر بعد الخطوة 4.2.3.
  3. قياس تدفق الدم في ترقيع الأوردة.
    1. ملء تجويف الجرح الجراحي على الجانب الأيمن مع المحلول الملحي العادي لتمكين انتقال الموجات الصوتية. تزج مسبار تدفق ارتشاح 2 مم (متصلة بمقياس حجم تدفق) في المياه المالحة في تجويف الجرح وتعيين معدل التدفق إلى الصفر.
    2. وضع مسبار التدفق حول الشريان السباتي والذيلية أو الجمجمة للابتزاز المنوال. تسجيل بيانات من المسبار التدفق مع نظام الحصول على بيانات إلكترونية.
    3. كرر قياس التدفق على الجانب الأيسر بعد الخطوة 4.3.2.
    4. حساب بولساتيليتي استناداً إلى معدل التدفق الانقباضية الذروة ومعدل التدفق االنبساطي الدنيا ومعدل التدفق يعني. أيضا حساب الصفحي إجهاد القص، استناداً إلى معدل التدفق وقطر التجويف (تقاس مع transcutaneous الموجات فوق الصوتية).
  4. يبث الحل متجه إلى الطعوم الوريد
    ملاحظة: يتم استخدام مجهر جراحي (16 س) حسب الحاجة لثقب والتسريب، وإصلاح الشريان السباتي.
    1. يكون المساعد إزالة الجراحي الموازين الجراح وتحريك المجهر الجراحي في الموقف. وقد الجراح ثني منشفة عقيمة على المجهر. فوط معقمة يسمح للجراح للتعامل مع المجهر مع الحفاظ على العقم.
    2. المساعد حقن الهيبارين (150 وحدة دولية/كغ) في القسطرة الرابع ومطاردة مع المياه المالحة.
    3. استخدام برنامج تشغيل إبرة كبيرة لثني الإبرة ز 21 إلى حوالي 80 درجة فقط فوق المجسم مشطوف الحواف (لا ينحني الشطب؛ الشكل 2 (أ)).
    4. المشبك الشريان السباتي المشترك عند كل نهاية للابتزاز المنوال مع ميني-المشابك، وضع المشبك الجمجمة أولاً للسماح للشريان ملء، ثم وضع القصاصة والذيلية. ضع مقطع والذيلية حوالي 10 مم والذيلية لملامسة، يترك مجالاً أرتيريوتومي.
    5. وضع العلاقات الحرير اثنين حول الشريان والذيلية فقط للاختلاس وقرانهما تراكم واحد على كل-دون تشديد لهم.
    6. ثقب السباتي والذيلية للاختلاس مع الإبرة ز 21 بنت الجمجمة مجرد قصاصة الأوعية الدموية والذيلية. احرص على عدم ثقب الجدران الخلفية أو الجانبية. النهوض الإبرة في تجويف ذهابا وإيابا مرتين للتأكد من أن التجويف واضحة، ثم تسحب الإبرة بعناية.
      ملاحظات: يمكن مساعدة ثقب السباتي المشترك من استيعاب والبرانية الشرياني مع الملقط غرامة ورفع الجدار الأمامي بلطف أثناء إدراج غيض الإبرة فقط والذيلية لرفع درجة (الشكل 2أ). وهذا يقلل من خطر ضرب الجدار الخلفي مع الإبرة.
    7. مع منصات شاش تكشفت عدة، إنشاء عش لوضع المحاقن المستخدمة للحقن. مكان هذا العش شاش والذيلية لموقع الجراحية.
    8. وضع 24 ز الرابع-قسطرة المحاقن مع دميم فقط وتشديد القسطرة في المحاقن فقط ما يكفي لمنع تسرب (المحاقن سيتم إزالتها في وقت لاحق في هذه الجراحة) وينحني القسطرة ~ 4 مم من الحافة حتى أن يحمل الانحناء في حوالي 75 درجة بعد إصدارها.
    9. أدخل القسطرة الرابع في أرتيريوتومي السباتي المشترك وصولاً إلى النقطة ينحني ويغسل التجويف الابتزاز المنوال مرتين مع 0.5 مل دميم. لكل تكرار، ملء الابتزاز المنوال مع دميم. ثم إزالة دميم من الفساد بخفة الضغط مع إصبع القفاز في نهاية الجمجمة الاختلاس. الشريحة بعناية إصبع الاتهام نحو نهاية والذيلية للابتزاز لطرد محتويات لومينال عبر أرتيريوتومي.
    10. إزالة المحاقن دميم من القسطرة، ترك القسطرة في السفينة. قم بتوصيل حقنه تحتوي على الفيروسات الحل، التأكد من أن لا هواء يدخل القسطرة. تحريك العلاقات الحرير المتشنجة فضفاضة أسفل الشريان حتى تكون حول طرف القسطرة، ولكن لا تشديد لهم.
    11. يبث 0.03 مل من محلول الفيروس دفع دميم المتبقية خارج القسطرة. إزالة جميع السوائل من التجويف الابتزاز المنوال مع إصبع، الضغط بلطف من الجمجمة إلى والذيلية.
    12. توثيق العلاقات بين حول تلميح الشريان وقسطرة لختم التجويف. يبث الفيروسات الحل حتى يتم منتفخة الوريد. وضع المحاقن بلطف على عش الشاش.
      ملاحظة: من المهم أن الابتزاز المنوال تتسع للعيار قبل توصيل به ويظل تضخم خلال ضخ الفيروسات. إذا لم يكن الأمر كذلك، تناقص كمية نقل الجينات.
    13. اترك الحل الذي يحتوي على الفيروس في التجويف الابتزاز المنوال لمدة 20 دقيقة، ثم قم باستبدال المحاقن التي تحتوي على الفيروسات المرفقة بالقسطرة مع حقنه فارغة. نضح الحل الذي يحتوي على الفيروس من الاختلاس بلطف حتى يطوي السفينة. إزالة المحاقن، ترك القسطرة في المكان. خفض ورفع القيود عن خيوط الحرير وسحب القسطرة من السفينة. إزالة القسطرة من الشريان السباتي بعناية لتجنب إتلاف البطانة.
    14. مع معونة المجهر الجراحي، أغلق أرتيريوتومي مع خياطة البوليبروبيلين 7-0 باستخدام نمط X (الشكل 2ب).
      1. فهم الخياطة مع حامل إبرة وإدخال السفينة في الجهة السفلي-اليمنى من أرتيريوتومي والخروج من السفينة في الأسفل اليسار. عبر فتح خارج السفينة، وجعل التمرير الثاني من أعلى اليمين إلى أعلى اليسار.
      2. قبل تشديد الخياطة، بإيجاز الإفراج عن القصاصة الأوعية الدموية الجمجمة لتدفق الهواء والفيروسات المتبقية من الاختلاس الوريد والشريان. سوف تدفق الدم من أرتيريوتومي عندما يتم تحرير المشبك.
      3. إغلاق أرتيريوتومي عن طريق سحب بلطف الخياطة ينتهي وربطها مع 2 ساحة عقده.
        ملاحظة: سحب الخياطة ضيقة جداً سوف يسبب تجميع الأنسجة التي سوف تخل بالتدفق وتزيد من خطر تجلط الدم، واحتمال إدخال المتغيرات غير المنضبط.
    15. الإفراج عن القصاصة الأوعية الدموية الجمجمة، ثم القصاصة والذيلية. وقف أي نزيف باستخدام الشاش لتطبيق الضغط الخفيف.
    16. حول هذا الوقت، حقن البوبرينورفين (ميدان، 0.02 مغ/كغ) لتوفير التسكين بعد العملية الجراحية حتى التصحيح شيفتشنكو وفرت شيفتشنكو مسكن مستويات البلازما.
      ملاحظة: قد يكون حقن البوبرينورفين إضافية (ميدان، 0.02 مغ/كغ) ح 6 اللازمة بعد الحقن الأول للحفاظ على التسكين حتى شيفتشنكو بلازما يبلغ تركيز علاجي.
    17. كرر البروتوكول ضخ الفيروسات على الجانب الأيسر، 4.4.5-4.4.15 الخطوات التالية.
  5. إغلاق الجرح
    1. إغلاق الأنسجة تحت الجلد بخياطة الشبكة 5-0، استخدام نمط مستمر. إغلاق الجلد بخياطة الشبكة 3-0 استخدام نمط الأدمة. دفن في عقده على كلا طرفي.
  6. الإنعاش بعد الجراحة، وتنظيف، والرعاية
    1. اتبع الخطوة 2، 4.

5-حصاد جراحة (الطرفية)

  1. إعداد الصكوك وموقع الجراحية.
    1. اتبع الخطوات 2.1.1-2.1.3 في جراحة الابتزاز المنوال.
    2. واسمحوا المساعد فتح أسيبتيكالي على الطاولة الصك (أو تمرير للجراح): محقنة 20 مل واحد وواحد ز 21 إبرة وخياطة الحرير 3-0، وتحقيق تدفق دم معقمة.
    3. اتبع الخطوات 2.1.5-2.1.6 و 2.1.8 الوريد جراحة الاختلاس.
  2. عزل الشرايين السباتي المشترك والطعوم الوريد
    1. قطع الجلد مع electrocautery على طول خط الوسط بين الشق القصية والفك السفلي (حوالي 7-9 سم في الطول) والمشبك الرقبة الجلد الأرنب للمناشف مع المشابك منشفة.
    2. في نهاية والذيلية، جعل قطع أفقية قصيرة عن طريق اللفافة مع electrocautery. صراحة تشريح تحت اللفافة على طول خط الوسط أكمله. قطع طريق لفافة تشريح على طول خط الوسط مع electrocautery.
    3. تبدأ على الجانب الأيسر. تشريح بين العضلات ستيرنوهيويد تغمر القصبة الهوائية والعضلات ستيرنوسيفاليك على شكل V لفضح الاختلاس السباتي والمنطلق المشترك.
    4. تشريح الابتزاز المنوال الصحيح والشريان السباتي المشترك خالية من الأنسجة المحيطة بها. استخدام حلقات السيليكون الجراحي لسحب الشريان والابتزاز المنوال خلال التشريح.
    5. كرر تشريح على الجانب الأيسر 5.2.3-5.2.4 الخطوات التالية.
  3. إجراء قياسات تدفق اتباع الخطوات 4.3.1-4.3.3 في جراحة نقل الجينات.
  4. حصاد الطعوم الوريد
    1. مع خياطة الحرير 3-0، سد الشريان السباتي المشترك حق الجمجمة الاختلاس. ثم سد السباتي والذيلية للاختلاس.
    2. المكوس الابتزاز المنوال الصحيح بقسمة الشريان السباتي المتاخمة بين كل من ليجيشنز وملامسة المتاخمة. إزالة الابتزاز المنوال من الأرانب ومسح التجويف مع المياه المالحة.
    3. قطع الشريان السباتي وأناستوموسيس من كلا الطرفين للابتزاز المنوال. تقليم الأنسجة أدفينتيتيال الزائدة بعيداً من الابتزاز المنوال وقطع الفساد في قطاعات حسب الحاجة لتحليلات مختلفة من نقطة النهاية.
    4. حصاد الابتزاز المنوال الأيسر بتكرار الخطوات 5.4.1-5.4.3.
  5. حقن 1 مل من الفينيتوئين/بينتوباربيتال الرابع للأرنب euthanize.
  6. التخلص من أي نفايات البروتوكولات المناسبة التالية للوقاية من الإخطار البيولوجية والتخلص من النفايات الأدوات الحادة.

النتائج

يجب أن يتم التحقق من صحة الكفاءة التقنية لمشغل جديد قبل المشغل ويمكن استخدام هذا الأسلوب لتوليد البيانات التجريبية. الحدث الرئيسي الأول الذي يجب تحقيق عامل جديد سالكيه الابتزاز المنوال يتفق بعد جراحة الوريد التطعيم الأولى والجراحة تأخر توصيل اللاحقة. سالكيه أكثر من 90% ب...

Discussion

وتشمل الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول إدارة التخدير، والتلاعب التخثر والجراحية الوريد الشريان/المطعمة، والقياسات الفسيولوجية الوريد المطعمة. الإدارة السليمة للتخدير الحاسم في هذا الطراز جراحة بقاء متعددة تتضمن عمليتين من عمليات طويلة نسبيا (عادة من 3 إلى 3.5 ح لتطعيم ثنائية الاتجاه وح ...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Disposables
3mL syringe with 24G needleBecton Dickinson3095712x for vein graft surgery; 2x for gene transfer  surgery
1 mL syringe with 27G needleBecton Dickinson3096232x for vein graft surgery, 5x for gene transfer surgery
19G needleBecton Dickinson305187Gene transfer surgery
20 mL syringe, luer lockNipro Medical CorpJD+20L
Catheters, 24Ga x 3/4”Terumo Medical ProductsSROX2419V
21G needleBecton Dickinson305165Gene transfer surgery and for 20 mL syringe of saline
Gauze 4” x 4”Dynarex3242~10-15 per surgery
3-0 silk sutureCovidien Ltd.S-244
5-0 silk sutureCovidien Ltd.S-182
7-0 polypropylene sutureCP Medical8703PVein graft surgery
7-0 polypropylene sutureCP Medical8648PGene transfer surgery
5-0 polyglycolic acid sutureCP Medical421A
3-0 polyglycolic acid sutureCP Medical398A
Alcohol swabsCovidien Ltd.6818For the placement of I.V. line
Catheter plugVetoquinol411498
Ketamine HCl, 100 mg/mLVedco Inc.5098916106
Xylazine, 100 mg/mLAkorn Inc.4821
Lidocaine, 20 mg/mLPfizer409427702
Marcaine 0.5%Pfizer409161050
Beuthanasia D-SpecialIntervet Inc.NDC 00061047305Harvest surgery only
Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mLPatterson Veterinary12496075705
Saline IV bag, 0.9% sodium chlorideBaxter2B1309
Heparin  (5000 U/mL)APP PharmaceuticalsNDC 63323-047-10
Papaverine (3.5 mg/ml)American Reagent Inc.NDC 0517-4002-25Diluted from 30mg/mL stock; Use 1 mL maximum
Fentanyl patch, 25 mcg/hApotex Corp.NDC 60505-7006-2
IsofluraneMultiple vendorsCatalog number not available
 Viral vectorGene transfer surgery only
Surgical Instruments
Metzenbaum needle holder 7" straightRobozRS-7900
Operating scissors 6.5" straight blunt/bluntRobozRS-6828
Needle holder /w suture scissorsMiltex8-14-IMC
Castroviejo scissorsRobozRS-5658
Castroviejo needle holder, 5.75" straight with lockRobozRS-6412
Stevens scissors 4.25" curved blunt/bluntRobozRS-5943
Alm retractor 4" 4X4 5mm blunt prongsRobozRS-65142x
Backhaus towel clamp 3.5"Roboz4x
Micro clip setting forceps 4.75"RobozRS-6496
Micro vascular clips, 11 mmRoboz
Surg-I-LoopScanlan International1001-81M5 cm length
Bonaccolto forceps, 4” (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip widthRobozRS-5210
Dumont #3 forceps Inox tip size .17 × .10 mmRobozRS-5042
Graefe forceps, 4” (10 cm) long serrated straight, 0.8 mm tipRobozRS-5280
Halstead mosquito forceps,  5" straight, 1.3 mm tipsRobozRS-71102x
Halstead mosquito forceps,  5" curved, 1.3mm tipsRobozRS-7111
Jacobson mosquito forceps 5" curved extra delicate, 0.9 mm tipsRobozRS-7117
Kantrowitz forceps, 7.25" 90 degree delicate, 1.7 mm tipsRobozRS-7305
Tissue forceps 5", 1X2 teeth, 2 mm tip widthRobozRS-8162
Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip widthFine Science Tools11092-122x
Adson forceps, 12 cm, serrated, straightFine Science Tools11006-12
Veterinary electrosurgery handpiece and electrodeMACAN ManufacturingHPAC-1; R-F11
Surgical Suite Equipment
Circulating warm water blanket and pumpMultiple vendorsCatalog number not available
Bair hugger warming unit3MModel 505
IV infusion pumpHeskaVet IV 2.2
Isoflurane vaporizer and scavengerMultiple vendorsCatalog number not available
Veterinary multi-parameter monitorSurgivetSurgivet Advisor
Veterinary electrosurgery unitMACAN ManufacturingMV-9
Surgical microscopeD.F. VasconcellosM90025X magnification for vein graft surgery; 16X magnification for gene transfer surgery

References

  1. Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges. Circ Res. 118, 531-534 (2016).
  2. Fowkes, F. G., et al. Comparison of global estimates of prevalence and risk factors for peripheral artery disease in 2000 and 2010: a systematic review and analysis. Lancet. 382, 1329-1340 (2013).
  3. Mohr, F. W., et al. Coronary artery bypass graft surgery versus percutaneous coronary intervention in patients with three-vessel disease and left main coronary disease: 5-year follow-up of the randomised, clinical SYNTAX trial. Lancet. 381, 629-638 (2013).
  4. de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes. Nat Rev Cardiol. 13 (8), 451-470 (2016).
  5. Harskamp, R. E., Lopes, R. D., Baisden, C. E., de Winter, R. J., Alexander, J. H. Saphenous vein graft failure after coronary artery bypass surgery: pathophysiology, management, and future directions. Ann Surg. 257, 824-833 (2013).
  6. Sabik, J. F. Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124 (3), 273-275 (2011).
  7. Owens, C. D., Ho, K. J., Conte, M. S. Lower extremity vein graft failure: a translational approach. Vasc Med. 13, 63-74 (2008).
  8. Robertson, K. E., McDonald, R. A., Oldroyd, K. G., Nicklin, S. A., Baker, A. H. Prevention of coronary in-stent restenosis and vein graft failure: does vascular gene therapy have a role. Pharmacol Ther. 136, 23-34 (2012).
  9. Yla-Herttuala, S., Baker, A. H. Cardiovascular Gene Therapy: Past, Present, and Future. Mol Ther. 25, 1095-1106 (2017).
  10. Schwartz, L. B., et al. Adenoviral-mediated gene transfer of a constitutively active form of the retinoblastoma gene product attenuates neointimal thickening in experimental vein grafts. J Vasc Surg. (5), 874-881 (1999).
  11. Eefting, D., et al. Local lentiviral short hairpin RNA silencing of CCR2 inhibits vein graft thickening in hypercholesterolemic apolipoprotein E3-Leiden mice. J Vasc Surg. 50, 152-160 (2009).
  12. Handa, M., et al. Adventitial delivery of platelet-derived endothelial cell growth factor gene prevented intimal hyperplasia of vein graft. J Vasc Surg. 48 (6), 1566-1574 (2008).
  13. Kloppenburg, G. T., Grauls, G. E., Bruggeman, C. A., Stassen, F. R. Adenoviral activin A expression prevents vein graft intimal hyperplasia in a rat model. Interact Cardiov Th. 8, 31-34 (2009).
  14. Eefting, D., et al. A novel urokinase receptor-targeted inhibitor for plasmin and matrix metalloproteinases suppresses vein graft disease. Cardiovasc Res. 88, 367-375 (2010).
  15. Eichstaedt, H. C., et al. Gene transfer of COX-1 improves lumen size and blood flow in carotid bypass grafts. J Surg Res. 161, 162-167 (2010).
  16. Kritz, A. B., et al. In vivo modulation of Nogo-B attenuates neointima formation. Mol Ther. 16 (11), 1798-1804 (2008).
  17. Peroulis, M., et al. The role of ex-vivo gene therapy of vein grafts with Egr-1 decoy in the suppression of intimal hyperplasia. Eur J Vasc Endovasc. 40, 216-223 (2010).
  18. Kochanek, S., et al. A new adenoviral vector: Replacement of all viral coding sequences with 28 kb of DNA independently expressing both full-length dystrophin and b-galactosidase. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 5731-5736 (1996).
  19. Parks, R. J., et al. A helper-dependent adenovirus vector system: Removal of helper virus by Cre-mediated excision of the viral packaging signal. P Natl Acad Sci USA. 93, 13565-13570 (1996).
  20. Chen, H. -. H., et al. Persistence in muscle of an adenoviral vector that lacks all viral genes. P Natl Acad Sci USA. 94, 1645-1650 (1997).
  21. Wen, S., Graf, S., Massey, P. G., Dichek, D. A. Improved vascular gene transfer with a helper-dependent adenoviral vector. Circulation. 110, 1484-1491 (2004).
  22. Du, L., Zhang, J., Clowes, A. W., Dichek, D. A. Efficient gene transfer and durable transgene expression in grafted rabbit veins. Hum Gene Ther. 26, 47-58 (2015).
  23. Channon, K. M., et al. Efficient adenoviral gene transfer to early venous bypass grafts: comparison with native vessels. Cardiovasc Res. 35, 505-513 (1997).
  24. Flynn, R., et al. Expression of apolipoprotein A-I in rabbit carotid endothelium protects against atherosclerosis. Mol Ther. 19, 1833-1841 (2011).
  25. George, S. J., et al. Sustained Reduction of Vein Graft Neointima Formation by Ex Vivo TIMP-3 Gene Therapy. Circulation. 124, 135-142 (2011).
  26. Chiu-Pinheiro, C. K., et al. Gene transfer to coronary artery bypass conduits. Ann Thorac Surg. 74, 1161-1166 (2002).
  27. Byrom, M. J., Bannon, P. G., White, G. H., Ng, M. K. Animal models for the assessment of novel vascular conduits. J Vasc Surg. 52, 176-195 (2010).
  28. Ribichini, F., et al. Effects of oral prednisone after stenting in a rabbit model of established atherosclerosis. J Am Coll Cardiol. 50, 176-185 (2007).
  29. Langheinrich, A. C., et al. Quantification of in-stent restenosis parameters in rabbits by Micro-CT. Rofo. 177 (4), 501-506 (2005).
  30. Wacker, B. K., Dronadula, N., Zhang, J., Dichek, D. A. Local Vascular Gene Therapy With Apolipoprotein A-I to Promote Regression of Atherosclerosis. Arterioscler Thromb. 37, 316-327 (2017).
  31. Zwolak, R. M., Kirkman, T. R., Clowes, A. W. Atherosclerosis in rabbit vein grafts. Arteriosclerosis. 9, 374-379 (1989).
  32. Qiang, B., et al. Statin therapy prevents expansive remodeling in venous bypass grafts. Atherosclerosis. 223, 106-113 (2012).
  33. Casa, L. D. C., Ku, D. N. Thrombus Formation at High Shear Rates. Annu Rev Biomed Eng. 19, 415-433 (2017).
  34. Chen, C., Coyle, K. A., Hughes, J. D., Lumsden, A. B., Ku, D. N. Reduced blood flow accelerates intimal hyperplasia in endarterectomized canine arteries. Cardiovasc Surg. 5 (2), 161-168 (1997).
  35. Binns, R. L., Ku, D. N., Stewart, M. T., Ansley, J. P., Coyle, K. A. Optimal graft diameter: effect of wall shear stress on vascular healing. J Vasc Surg. 10, 326-337 (1989).
  36. Oka, K., Mullins, C. E., Kushwaha, R. S., Leen, A. M., Chan, L. Gene therapy for rhesus monkeys heterozygous for LDL receptor deficiency by balloon catheter hepatic delivery of helper-dependent adenoviral vector. Gene Ther. 22, 87-95 (2015).
  37. Miyake, T., et al. Prevention of neointimal formation after angioplasty using nuclear factor-kappaB decoy oligodeoxynucleotide-coated balloon catheter in rabbit model. Circ Cardiovasc Interv. 7, 787-796 (2014).
  38. Chorny, M., et al. Site-specific gene delivery to stented arteries using magnetically guided zinc oleate-based nanoparticles loaded with adenoviral vectors. FASEB J. 27, 2198-2206 (2013).
  39. Hoshino, K., et al. Three catheter-based strategies for cardiac delivery of therapeutic gelatin microspheres. Gene Ther. 13, 1320-1327 (2006).
  40. Nouri, F., Sadeghpour, H., Heidari, R., Dehshahri, A. Preparation, characterization, and transfection efficiency of low molecular weight polyethylenimine-based nanoparticles for delivery of the plasmid encoding CD200 gene. Int J Nanomed. , 5557-5569 (2017).
  41. Jia, S. F., et al. Eradication of osteosarcoma lung metastases following intranasal interleukin-12 gene therapy using a nonviral polyethylenimine vector. Cancer Gene Ther. , 260-266 (2002).
  42. Morishita, R., et al. Intimal hyperplasia after vascular injury is inhibited by antisense cdk 2 kinase oligonucleotides. J Clin Invest. 93, 1458-1464 (1994).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

139

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved