JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

שיטה זו מתארת את המיקום של שתלי העורק interposition בארנבים, את התמרה חושית של השתלים, ההישג של הביטוי transgene עמיד. דבר זה מאפשר החקירה של תפקידים פיזיולוגיים ופתולוגיים של transgenes ומוצרים שלהם חלבון בורידים המושתל, ובדיקות של ג'ין טיפולים למחלות שתל הווריד.

Abstract

ניתוח מעקפים שתל הווריד הוא טיפול נפוץ מחלת עורקים ריטלין; עם זאת, הצלחה לטווח ארוך הוא מוגבל על ידי שתל כשל פקקת, היפרפלזיה intimal וכתוצאה טרשת עורקים. מטרת מאמר זה היא להדגים שיטה עבור הצבת interposition ורידים דו-צדדית שתלי ארנב, ואז transducing את השתלים עם וקטור העברת גנים שמקבל ביטוי transgene עמיד. השיטה מאפשרת החקירה של התפקיד הביולוגי של הגנים שלהם מוצרי חלבון הומאוסטזיס שתל הווריד נורמלי. זה גם מאפשר בדיקה של transgenes על הפעילות שעלולים למנוע כשל שתל הווריד, למשל., אם הביטוי של transgene ומונע גידול neointimal, מפחית דלקת כלי הדם או מפחית טרשת עורקים בארנבים האכיל עם דיאטה עתירת שומן. במהלך ניתוח הישרדות הראשונית, פילוחי ימינה ושמאלה חיצוני ומוחלף טוחנות, להציב מבקיעים כמו הפוכה הקצה לצד נפוצות העורק interposition שתלים. במהלך ניתוח הישרדות נוסף, ביצע 28 ימים לאחר מכן, כל אחד השתלים הוא מבודד זרימת הדם עם תפסים, לומן (דרך arteriotomy) מלאים פתרון שמכיל וקטור (HDAd) adenoviral תלויי-עוזר. לאחר דגירה 20-מין, הפתרון וקטור הוא aspirated arteriotomy יתוקן, זרימה משוחזר. הורידים נקצרים בנקודות זמן מוכתב על ידי בודדים בפרוטוקולים ניסיוניים. העיכוב 28 יום בין הצבת שתל את התמרה חושית יש צורך להבטיח את העיבוד של השתל וריד אל הדם העורקי. הסתגלות זו מונע אובדן מהיר של הביטוי transgene המתרחשת אצל שתלי העורק transduced לפני או מיד לאחר הרכבה. השיטה היא ייחודית ביכולתה כדי להשיג את הביטוי transgene עמיד, יציב בורידים המושתל. לעומת דגמים אחרים של שתל הווריד חיה גדולה, ארנבים יש יתרונות הטיפול זולה וקלה. לעומת מודלים שתל הווריד מכרסמים, ארנבונים יש כלי דם גדולים יותר, קל יותר לתמרן, המספקים שפע רקמות לצורך ניתוח.

Introduction

טרשת העורקים היא מחלה דלקתית כרונית שבה הצטברות שומנים בדם ודלקת בדופן כלי הדם להוביל היצרות של כלי השיט לומן, התקפי לב, שבץ, אובדן גפיים1,2. התערבויות מלעורית (למשל., אנגיופלסטיקה ולא סטנט) וטיפול רפואי (למשל., סטטינים antiplatelet סוכנים) טיפולים שימושי עבור טרשת עורקים; עם זאת, לעתים קרובות הם יעילים בטיפול חמור מחלה חסימתית שני ב circulations כלילית ואת היקפי. מעקף השתלת עור, באמצעות מקטעים וריד autogenous, נשאר הליך נפוץ לטיפול בחולים עם חמור, מפוזר כלילית והיקפי מחלת כלי דם3,4. עם זאת, הווריד שתלי להציב שני עוצר ויש circulations היקפי המסכן המחירים patency לטווח ארוך. במחזור כלילית, כ- 10-20% של וריד שתלי הם occluded-1 שנה ו- 50% הם occluded 10 שנים5,6. במחזור היקפיים, וריד שתל כשל תעריפי 30-50%-5 שנים7.

ריפוי גנטי היא גישה אטרקטיבית למניעת כשל שתל הווריד. כי זה יכול לספק מוצר גנים טיפוליים בדיוק באתר של המחלה. בהתאם לכך, מחקרים פרה רבים בדקו וריד שתל ג'ין טיפול8,9. עם זאת, בעיקרו של דבר כל מחקרים אלו בחנו את היעילות בגיל מוקדם זמן נקודות (2-12 שבועות)10,11,12,13,14,15, 16 , 17. אנו מודעים אין ראיות כי התערבויות ריפוי גנטי יכול לספק עמיד (שנים) הגנה מפני המנוח כשל שתל הווריד הנובעת בדרך כלל היפרפלזיה של טרשת עורקים neointimal4. פיתחנו שיטה מאפשרת ביטוי transgene עמיד בורידים המושתל, ובכך מאפשר בדיקה של ריפוי גנטי התערבויות בנקודות זמן מאוחר, כמו גם מוקדם. כדי להשיג את הביטוי transgene עמיד, השיטה משלבת HDAd וקטורים אסטרטגיה התמרה חושית מושהית. וקטורים HDAd לספק ביטוי transgene ממושך בשל העדר גנים ויראלי, מניעת זיהוי (ולא דחייה) של תאים transduced על ידי המערכת החיסונית18,19,20, 21. מושהית התמרה חושית (שבוצעו 28 ימים לאחר הצבת שתל) מונע איבוד תאים transduced במהלך תהליך arterialization המתרחש מוקדם לאחר grafting22.

שיטות אחרות להשיג transgene טיפולית ביטוי בקיר שתל הווריד להסתמך על התמרה חושית של השתל וריד בזמנו של שתל השמה10,11,12,15,16 ,17. כאשר נמדד באופן סדרתי, transgene הביטוי תוך שימוש בגישה זו יורדים במהירות לאחר התמרה חושית22,23. בהתאם לכך, מחקרים באמצעות גישה זו לא בחנו את היעילות מעבר 12 שבועות לאחר וריד משתילים, עם ביותר לא הערכת יעילותם מעבר 4 שבועות. לעומת זאת, השיטה שלנו משיגה שתל הווריד ביטוי transgene stably נמשך לפחות 24 שבועות מבוסס על מחקרים דומים שבוצעו בסביר-העורקים ממשיך22,יותר24. אנחנו מודעים ללא אחרים וריד שתל ג'ין טיפול התערבות שמקבל ביטוי transgene יציבה משך זמן זה.

השתמשנו דגם ארנב לפתח את השיטה שלנו. אחרים השתמשו מכרסמים, ארנבות, או חיות גדולות כדי לבדוק את הווריד להשתיל ג'ין טיפול10,11,12,15,16,17,25, 26. לעומת מודלים מכרסמים, ארנבונים יקרים יותר, והם כפופים דרישות רגולטוריות מחמירים יותר. עם זאת, בהשוואה חיות גדולות (למשל., חזירים, כלבים), ארנבים הם הרבה פחות יקרים לרכוש בית הרבה יותר קל להתמודד. יתר על כן, הארנב כלי דומה כלי האנושי מבחינה פיזיולוגית27, הם מספיק גדולים כי הם יכולים לשמש לבדיקת התערבויות מלעורית28,29, הם מספקים מספיק רקמה את זה נקודות קצה מרובות (למשל., היסטולוגיה, חלבון, RNA) יכולים להיבדק באמצעות כלי דם בודדת הדגימה22,30. בנוסף, כאשר הארנבים עם שתלי העורק ניזונים מדיאטה עתירת שומן, הם מפתחים וריד שתל טרשת עורקים31,32, אשר היא גורם שכיח של עורקים מעקף לווריד שתל כשל4,5 . אלה שתלי העורק ארנב טרשת עורקים יכול לשמש מצע לבדיקת טיפול גנטי התערבויות נמסרות בשיטה זו. פרוטוקול שסופקו יכול לעזור חוקרים לשלוט טכנית הכישורים הדרושים כדי להשיג transgene עמיד ביטוי שתלי העורק ארנב.

Protocol

כל הפרוטוקולים בעלי חיים ולימודי אושרו על ידי אוניברסיטת וושינגטון למשרד של צער.

1. מבצע קדם (עבור כל ניתוחים)

  1. עזים ומתנגד הארנבת עם 30 מ"ג/ק"ג קטמין ו 1.5 mg/kg חריגות השירותים הווטרינריים בזריקה תוך שרירית (IM) בשרירים paraspinous.
    הערה: מזון ומים הם לא מוגבל לפני הניתוח.
  2. בזמן שחיכינו מספיק לעומק של הרדמה, להגדיר את טבלאות חדר ההכנה ובחדר ההפעלה (או אר).
    1. להכין את החדר הכנה גילוח הצוואר של הארנב, והנחת הנמל (IV) תוך ורידי באוזן (ניתוח הישרדות בלבד). מקם את המשחה אופטלמולוגיות, תחבושות של פנטניל (ניתוח הישרדות), קוצץ שיער, משטח ההכנה אלכוהול, 24-G x ¾" קטטר, הזרקת port והדבקה על השולחן הכנה.
    2. בחדר הניתוח, להגדיר את ציוד ניטור ומקושרת רגשים (רל (ג), אוקסימטר (SpO2) וטמפרטורה). להכין את המשאבה הרביעי עם שקית IV saline 100 מ עם המחט ג'י 18 או 19-G, להגדיר קצב הזרימה h 10 מ"ל/ק"ג (ניתוח הישרדות בלבד). להגדיר את ציוד חמצן, איזופלוריין עם nosecone (וריד הרכבה או קציר-ניתוחים).
      1. כדי לאבטח את nosecone הארנב, לולאה רצועה גזה סביב הצינור אספקת גז nosecone. הלופ הזה צריך להקיף את הצינור שבו היא מייחסת nosecone. הפנויות של רצועת גזה צריך שניהם אתעכב כ 45 ס מ. מניחים את nosecone (עם גזה המצורפת) על הקצה של הראש של טבלה.
    3. להפעיל את המים במחזור ו/או דחסת אוויר חימום שמיכה על השולחן או. השמיכה התחממות כדור הארץ, מקמו מגבת מגולגלת כמו תמיכה לצוואר ומניחים על צלחת אלקטרודה ואנליזת electrocautery.
    4. כמו משכך כאבים מקומי, לשלב בתוך מזרק 1 מ"ל של לידוקאין 2% HCl ו 1 מ"ל של 0.5% נמשך HCl. לדלל את הוירוס לריכוז הרצוי (הנה, תשתמש עונה 2 פרק 1011 ויראלי חלקיקים/mL עבור HDAd) ב DMEM סטרילי ולשמור על קרח (ניתוח העברת גנים בלבד).
    5. לאחר עומק הרדמה נאותה מתמלאת, להכין את הארנב לניתוח.
      הערה: הבדיקה על חוסר רפלקס הנסיגה פדלים כדי להבטיח עומק הרדמה נאותה. נמשיך לעקוב את רפלקס לדווש לאורך כל הניתוח.
      1. משחה אופטלמולוגיות חלות על העיניים של הארנב.
      2. כדי לאפשר המיקום של בדיקה רקטלית טמפרטורה, לחץ עם האצבעות בכפפה מעל הרקטום ארוכה להזיז אצבעות לכיוון פי הטבעת כדי להסיר stooling של פי הטבעת של הארנב.
      3. לגלח את הארנב של החריץ בחזה ובצלעות לקצה של הלסת התחתונה. לגלח אוזן אחת עבור מיקום הרביעי ואת האוזן הנגדית עבור ניהול תיקון פנטניל (ניתוח הישרדות בלבד). לגלח את האצבעות האמצעיות האחורי השמאלי את המיקום של המכשיר2 SpO.
    6. לניתוח אינפוזיה וקטור, להנשים את הארנב. השתמש של 4 מ מ O.D./3 מ מ תעודת זהות אני אאזוק אנדוטרכאליות שפופרת, מושחל על אטרוסקופ. הצב את הארנב recumbency בחזה ובצלעות, hyper-להאריך את הצוואר. החזק הפה של הארנב לרווחה ולהשתמש את arthroscope כדי להמחיש את הקפלים glottis, בגרון. ההשראה, במהלך הכנס בעדינות את הצינור אנדוטרכאליות דרך הגרון לתוך קנה הנשימה.
    7. עבור הניתוחים הישרדות, המקום מאובטח צנתר הרביעי 24-G לתוך הווריד אוזן שמאל של הארנב, מכסה אותה עם יציאת הזרקה. להחיל תיקון 25 µg/h פנטניל לאוזן ימין של הארנב.
      הערה: הפרוטוקול היא מנתח ממוקם בצד ימין של הארנב. אם המנתח יהיה בצד שמאל של הארנב, להפוך את הצדדים בשלב זה כדי לשמור את החוטים ועל הרביעי מול של המנתח. מעבר בין הצדדים בשלבים עתידיים לפי הצורך.
    8. עבור הווריד ניתוחים הרכבה ו הקציר, להזריק הרדמה כללית עם nosecone; . לניתוח אינפוזיה וקטור, לנהל הרדמה כללית באמצעות צינור אנדוטרכאליות.
      הערה: צנרור יכול לשמש עבור כל הניתוחים.  מניסיוננו, לעומת זאת, הסיכוי לסיבוכים מטראומה והכו אותי ואת בגרון במהלך צנרור יכול גוברים על היתרונות של צנרור.  הניתוח הכולל העברה גנטית כדי השתלה (במיוחד אצל ארנבונים כולסטרול-fed) הוא הניתוח היחיד אשר צנרור נראה למתן טובת הנאה נטו.
    9. לשאת את הארנב לחדר הניתוח. הצב את הארנב במצב פרקדן על שולחן הניתוחים עם המגבת תמיכה לצוואר ממוקם מתחת לראש של הארנב. בעדינות הארך הצוואר של הארנב ישר ואופקי בקירוב.
    10. מניחים את nosecone על הארנב (וריד הרכבה ו הקציר-ניתוחים) או לחבר את הצינור אנדוטרכאליות (וקטור אינפוזיה ניתוח) עם O2 ב 1 ליטר/דקה, להתחיל איזופלוריין. אם משתמש של nosecone, לאבטח על ידי ליפוף קצות רצועות גזה מצורף סביב מגבת תמיכה לצוואר של הארנב. התאם את הריכוז איזופלוריין לפי הצורך (בדרך כלל 1-2%) כדי לשמור על רמת הניתוח של הרדמה.
    11. מרכז צלחת אלקטרודה ואנליזת electrocautery תחת הגב של הארנב. את הגשוש טמפרטורה רקטלית ולהחיל SpO2 בדיקה ומוביל אק ג על הארנב.
    12. להתחבר לקו IV saline יציאת הצנתר באוזן השמאלית של הארנב ולהתחיל את משאבת אינפוזיה הרביעי ב h 10 מ"ל/ק"ג. לאחר 1 h, להקטין את קצב העירוי מלוחים ש מ ל/ק ג.
    13. לקשור באופן רופף הרגליים הקדמיות של הארנב לשולחן הניתוחים כמו מעצורים.
      הערה: לחלופין, שולחן פלסטיק קטן ניתן להניח מעל הארנב כדי למנוע את המנתח של לחיצה על החזה/הבטן הארנב, ובכך לגרום ריפלוקס ושאיפה.
    14. להזריק לידוקאין/נמשך (2 מ"ל, מערבבים 50/50, שלב 1.2.4) subcutaneously (SQ) בצוואר לאורך קו החתך המתוכנן, על הרדמה מקומית.
    15. להורות למסייע לחטא את ניתוח באתר עם 3 לסירוגין קרצוף chlorhexidine gluconate, אלכוהול איזופרופיל, ואז לרסס את האתר עם povidone יוד. יש את המנתח לשפשף, חלוק, הכפפות, העקרונות אספטי.
      1. לבצע ניתוחים ההישרדות בתנאים אספטי. יש המסייע להתמודד עם כל הפריטים שאינו סטרילי, גילוח ורחיצה כירורגית להעביר חומרים סטרילי המנתח או גילוח ורחיצה כירורגית למקם אותם על השולחן כלי הצרה.
      2. יש את המנתח להשתמש מגבות סטרילי גילוח ורחיצה כירורגית לתפעל ציוד שאינו סטרילי כגון המיקרוסקופ. יש לי את המנתח ללבוש 2 x זכוכיות מגדלת כירורגית בעת ביצוע במחצית הראשונה של הניתוח.

2. ניתוח שתל וריד (הישרדות)

  1. להכין את הכלים ואת שדה סטרילי.
    1. יש העוזר לפתוח סטרילי חבילות (תלוי השולחן, תלוי נייר ומגבות 6) ולהעביר את התוכן גילוח ורחיצה כירורגית למנתח הפלסטי.
    2. לעטוף את הטבלה כלי. מניחים נייר בד ומגבות סטרילי על השולחן כלי הצרה. 4 מגבות, לעטוף את הארנב, עוזב רק באתר כירורגית על הצוואר חשוף. להניח את הכיסוי ותאבטחי נייר על הארנב. מגבת אחת ישמש אחר כך, האחרון הוא גיבוי.
    3. יש העוזר לפתוח חבילת כלי סטיריליים ולהעביר את המגש מכשיר גילוח ורחיצה כירורגית למנתח הפלסטי. לארגן את המכשירים על השולחן כלי נגינה.
    4. להורות למסייע לפתוח את הציוד הבא: גילוח ורחיצה כירורגית להעביר אותו המנתח או להניחו על השולחן כלי: מזרק 1-mL אחד, מזרק 3-mL אחד, אחד 20-mL מזרק, המחט 21 גרם אחד, תפר (PGA) חומצה polyglycolic 3-0, 5-0 PGA תפר , 7-0 בתפר פוליפרופילן, צנתר הרביעי 24 גרם אחד.
    5. אבטח את הכבל electrocautery כדי לעטוף המכסה את הארנב, שימוש של 7.25" Kantrowitz מלקחיים. ירידה בסוף הכנס הכבל מעל קצה שולחן הניתוחים כדי להיות מחובר ליחידת במכשיר צריבה עם ראש ומופעל על-ידי המסייע.
    6. ממלאים מזרק 20-mL מלח סטרילית התיק מלוחים או בקבוקון שהוחזקו על-ידי המסייע. להשתמש זו תמיסת מלח לפי הצורך כדי למנוע את התייבשות של רקמות חשופות במהלך המבצע.
    7. להכין 5 מ ל תמיסת heparinized הפיזיולוגיות על-ידי הוספת 0.1 מ"ל של 5,000 IU/mL הפארין 5 מ של תמיסת מלח, כלומר., הפרין 100 IU/mL, כירורגי בקערה קטנה. השתמש פתרון זה לשטוף את השתל עורק, וריד לעורק הצוואר באופן קבוע במהלך ההליך grafting.
    8. חותכים חור הכיסוי ותאבטחי נייר מעל האתר כירורגית על הצוואר של הארנב. שימוש מלחציים מגבת כדי לצבוט את הפינות של החור במקום המגבות המשמש כבסיס.
  2. ניתוח כלי דם
    הערה: השתמש x 2 זכוכיות מגדלת כירורגית כדי לסייע עם החלק הזה של הניתוח.
    1. לחתוך את העור electrocautery לאורך הקו האמצעי בין החריץ בחזה ובצלעות הלסת התחתונה (כ 7-9 ס מ אורך), תהדק את העור בצוואר של הארנב המגבות עם המלחצות מגבת. בסוף סימטרית, לבצע חתך לרוחב קצר דרך fascia עם electrocautery. בלשון בוטה לנתח תחת fascia לאורך הקו האמצעי כולו באמצעות מספריים גדולים. לחתוך דרך השכבה fascial גזור לאורך הקו האמצעי עם electrocautery.
    2. להתחיל בצד ימין. לנתח בין השריר sternocephalic בצורת V, כדי לחשוף את עורק תרדמני לשריר sternohyoid המכסים את קנה הנשימה.
    3. בזהירות לנתח קטע 4-5 ס מ עורק תרדמני, סניפים גדולים יותר (בדרך כלל 1-2 בכל צד) ללא תשלום מן הרקמות הסובבות. להרחיב את הקרע מבסיס הצוואר הציר הקרוב למעבר של עצב לועי יש. השתמש הסיליקון כירורגי לולאות כדי לסייע הכחשה של העורק הראשי בזמן. מאתרים ומפסיקים את ענפי עורק תרדמני בתפרים משי 5-0 גדול לפני גזירת כל סניף רחוק.
      הערה: יש להיזהר לא להפריע העצב התועה מקבילה של עורק תרדמני או העצבים קטנים יותר לחצות העורק.
    4. חזור על הקרע בצד שמאל (שלב 2.2.3).
    5. להשתמש מלקחיים להחזיק רקמות לסגור זמנית את השכבה התת-עורית. לנתח fascia שטחית בעור בצד ימין עד עורק הצוואר חשוף. לנתח קטע 4-5 ס מ של עורק הצוואר וגישה חופשית שלה ענפים מן הרקמה שמסביב, נבדק ענפים קטנים בתפרים משי 5-0 לפני גזירת הענף.
    6. חזור על הקרע בצד שמאל (שלב 2.2.5).
    7. להזריק הפרין (150 IU/ק ג) הקטטר IV ויש לשטוף עם 10 מ"ל של תמיסת מלח.
    8. קטע 3-ס"מ חיצוני ומוחלף בצד ימין וכולן מאתרים ומפסיקים בסוף סימטרית קטע 5-0 בתפר משי. לאפשר את הווריד למלא עם דם, ואז מאתרים ומפסיקים סוף הגולגולת קטע וריד. לחלק סוף הגולגולת קטע עורק הצוואר, לשטוף היטב את הכלי עם heparinized תמיסת מלח (100 U/mL) בעזרת מזרק 3-mL מחובר צנתר הרביעי 24-G. לחלק על קטע וריד בקצה סימטרית. מניחים על קטע וריד בעמדה מתוקננת, שבו הקצוות סימטרית, הגולגולת ניתנים לזיהוי חד משמעית.
  3. וריד הרכבה
    1. תן המסייע להסיר את זכוכיות מגדלת כירורגי של המנתח ולעבור מיקרוסקופ כירורגי (25 X) למקומן.
      הערה: המנתח צריך לעטוף מגבת נקיה על המיקרוסקופ. דבר זה מאפשר למנתח לתמרן המיקרוסקופ תוך שמירה על עקרות.
    2. תהדק את. עורק תרדמני בסוף כל מקטע מבודד עם מיני-מלחציים, הצבת את המלחציים הגולגולת הראשונה כדי לאפשר את העורק מילוי, ולאחר מכן ממקם את המלחציים סימטרית.
    3. חותכים 1 × 2 ס מ פיסת נייר נוקשה (הזמינים באמצעות אריזה סטרילי תפר) והצב אותה מתחת עורק תרדמני, כדי לשפר את החשיפה.
    4. ביצוע של arteriotomy רק הגולגולת המלחציים סימטרית (arteriotomy סימטרית). אורך arteriotomy צריך להיות שווה לקוטר של סוף הגולגולת קטע וריד. הוסף את המזרק עם הצנתר IV דרך arteriotomy סימטרית ותורידי לומן העורק עם תמיסת מלח heparinized.
    5. תפר סוף הגולגולת הווריד כדי arteriotomy סימטרית, באמצעות 7-0 בתפר פוליפרופילן עם תפרים יחיד (איור 1).
      1. המקום הראשון תפר את האצבעות סוף arteriotomy סימטרית לסוף הגולגולת קטע וריד סימטרית. מקם את התפר השני 180° מ תפר הראשון, לתפור בסוף arteriotomy סימטרית לסוף הגולגולת קטע וריד הגולגולת.
      2. המקום תפר השלישי בנקודה במרחר שווה שני הראשונים תפרים, על הצד הלטראלי של ההשקה. במקום הרביעי תפר על הצד המדיאלי של ההשקה, קו מקביל של התפרים הראשון שני ומול תפר השלישי. מקום 4 תפרים נוספים (תפרים 5-8) בין כל התפרים 1-4.
      3. לבצע את arteriotomy הגולגולת בצד סימטרית של הסרטון הגולגולת. המרחק בין סוף הגולגולת arteriotomy הגולגולת ואת סוף arteriotomy סימטרית סימטרית צריך להיות זהה אורך קטע וריד. אורך arteriotomy הגולגולת שווה לקוטר של סוף קטע וריד סימטרית.
    6. להאריך את הווריד cranially מן ההשקה, שוכב זה בעורק, ללא היכרות עם כל הפיתולים. לשטוף את העורק הראשי, הווריד עם תמיסת heparinized ויה arteriotomy הגולגולת. מלוחים יזרמו דרך העורק, לווריד ויה ההשקה סימטרית, תיסגר בסוף בחינם, unsutured הווריד. פלאשינג הווריד גם מונעת זה פיתול.
    7. תפר סימטרית סוף הווריד כדי arteriotomy הגולגולת (איור 1).
      1. למקם תפר הראשון לתפור בסוף arteriotomy הגולגולת לסוף סימטרית קטע וריד סימטרית. למקם תפר השני לתפור בסוף arteriotomy הגולגולת לסוף סימטרית קטע וריד הגולגולת. להשלים את ההשקה כפי שמתואר בשלב 2.3.5.2. בדיוק לפני הקשר האחרון קשורה על ההשקה הגולגולת, בקצרה פתח את המלחציים בקצה הגולגולת ביתור נפוצות העורק הראשי קטע, כדי לאפשר חזרה-דימום שוטף את האוויר העורק הראשי, וריד המושתל. לאחר מכן, להדק את הקשר האחרון.
    8. לשחרר את המלחציים הגולגולת מאפשרים שתל הווריד מתמלא דם ולאחר מכן שחרר את התפס סימטרית הפעימות בריסק צריך לראות את שתל הווריד. הפעילו לחץ עדין עם גזה יבשה כדי לעצור דימום-חיבור.
    9. מאתרים ומפסיקים את שני הקצוות של המקטע העורק משותפת שמחברת את חיבור בתפר משי 3-0 ולחלק בעורק באמצע הדרך בין ליגטורות (איור 1). מספר טיפות של papaverine (3.5 מ"ג/מ"ל) חלות על העורק הראשי סמוך לכל השקה.
    10. להזריק הפרין (75 IU/ק ג) לתוך הצנתר האוזן IV ויש לשטוף עם 10 מ"ל של תמיסת מלח. בשלב זה, להזריק הבופרנורפין (SQ, 0.02 נקודות מ"ג/ק"ג) כדי לספק שיכוך כאבים לאחר הניתוח עד התיקון פנטניל סיפקה כאבים פלזמה רמות של פנטניל.
      הערה: זריקה הבופרנורפין נוספים (SQ, 0.02 נקודות מ"ג/ק"ג) עשוי להיות נחוץ 6 שעות לאחר הזריקה הראשונה כדי לשמור על שיכוך כאבים עד פנטניל פלזמה מגיע ריכוז טיפולית.
    11. חזור על הרכבה בצד שמאל (שלבים 2.2.8, 2.3.2-2.3.9).
    12. סגור את הרקמה התת עורית 5-0 בתפר PGA באמצעות תבנית רציפה. סגור את העור 3-0 בתפר PGA באמצעות תבנית intradermal. לקבור את הקשרים בשני הקצוות.
  4. ההחלמה לאחר הניתוח, ניקוי, טיפול
    הערה: לאפשר את הארנב להתאושש מן ההרדמה בסביבה רגועה, שקטה. נטר את הארנב ברציפות על טמפרטורת הגוף, חמצון נאות עד זה הוא החלים לחלוטין.
    1. כבה איזופלוריין וחמצן וחבר נתק מכונת ההרדמה של הארנב. נתק את הצנרור נוזלים IV של הארנב, אבל להשאיר הנמל הרביעי בווריד האוזן לגישה מתהווה.
    2. להעביר את הארנב לכלוב שחזור ומניחים אותו על צדו. מספקים תמיכה תרמי עם מים חמים שמיכה (או התחממות בכפייה-אייר). תן O2 מאת nosecone עד SpO2 תהיה יציבה.
    3. עד הארנב יכול לשבת ambulate בכלוב שלו, להעיף את הארנב שלה בצד השני כל 15 דקות. לאחר מכן להסיר את הצינורית הרביעי של האוזן, להחזיר את הארנב לכלוב שלו. להחזיר את הארנב מחברתם של חיות אחרות רק אחרי זה הוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה.
    4. תשליך בפרוטוקולים הבאים פסולת כלשהי המתאימה עבור סילוק פסולת חומרים מסוכנים, שרפ.
    5. במשככי, בדוק פעירת ובריאות של הארנב בכל יום. לנהל הבופרנורפין כפי הצורך כאב לא מנוהל על ידי התיקון פנטניל. הסר את התיקון פנטניל ביום שלאחר הניתוח השלישי.

3. אולטרסאונד transcutaneous

  1. כדי להעריך את שתל patency, מבצע בחינה אולטרסאונד ארנב שאינם מרדימים 5-7 ימים אחרי ניתוח שתל הווריד ניתוח העברה גנטית.
    1. לעטוף את הארנב שאינם מרדימים היטב בשמיכה, למקם את הארנב פרקדן V-פלס וטרינרי עם הצוואר המורחבת. לגלח את הצוואר, או אם יש צורך, להסיר את השיער עם סוכן depilatory. חלות ג'ל אולטרסאונד הצוואר ולבצע בחינה אולטרסאונד.
      הערה: בחינה אולטרסאונד גם מתבצע על ארנבים ומורדמת בזמנו של הניתוח העברת הגן והן הניתוח הקציר שתל מסוף לבחון שתל patency וכדי למדוד את קוטר לומן שתל. הבחינה נעשית רק לפני הצוואר קרצוף ומתבצעת באופן דומה לגבי הארנבים שאינם מרדימים.

4. לבצע ניתוח העברה גנטית ~ 28 ימים לאחר מיקום השתל (ניתוח הישרדות)

  1. להכין את כלי הנגינה ואת השדה סטרילי.
    1. בצע את השלבים הבאים 2.1.1-2.1.3. בניתוח שתל הווריד.
    2. תן המסייע לפתוח את הציוד הבא גם גילוח ורחיצה כירורגית לעבור אותו ל המנתח או להניחו על השולחן כלי: שישה מזרקים 1-mL (עם מחט), מזרק 3-mL אחד, אחד 20-mL מזרק, מחט 21 G אחת, מחט אחת 19-G, תפר PGA 3-0 , תפר PGA 5-0, 7-0 בתפר פוליפרופילן, שני צנתרים הרביעי 24 G ולאחר בדיקה זרימת דם סטרילי.
    3. בצע את השלבים הבאים 2.1.5-2.1.6. בניתוח שתל הווריד.
    4. להכין מזרק 1-mL אחד עם 1 מ"ל DMEM לניקוי השתל עורק, וריד ולהכין שני 1-mL-מזרקים עם וירוס פתרון (~ 0.5-0.7 מ ל וירוס פתרון/וריד שתל). תן המסייע להפשיר את הווירוס, למהול אותו ב- DMEM. להכין מזרק 3-mL אחד עם 0.5 מ של לידוקאין/נמשך (לערבב 50/50, שלב 1.2.4).
    5. בצע את שלב 2.1.8 תגובה-על ניתוח שתל הווריד.
  2. בידוד של שתלי העורק, בעורקים הסמוכים
    הערה: 2 x זכוכיות מגדלת כירורגי אמור לשמש עבור חלק זה.
    1. לחתוך את העור electrocautery לאורך הקו האמצעי בין החריץ בחזה ובצלעות הלסת התחתונה (כ 7-9 ס מ אורך), תהדק את העור חשוף עם מגבת מלחציים. 0.5 מ של לידוקאין/נמשך (לערבב 50/50, שלב 1.2.4) חלות על הרקמה התת עורית.
    2. בסוף סימטרית, לבצע חתך לרוחב קצר דרך fascia עם electrocautery. בלשון בוטה לנתח תחת fascia לאורך הקו האמצעי כולו. עם electrocautery, לחתוך דרך fascia גזור לאורך הקו האמצעי.
    3. להתחיל בצד ימין. לנתח בין השריר sternohyoid בשכבת-על קנה הנשימה לשריר sternocephalic בצורת V, כדי לחשוף את שתל הווריד. בזהירות לבודד את שתל הווריד של 1.5-2.0 ס מ של העורק הראשי הסמוך שהשתל על שני הצדדים הגולגולת ואת סימטרית.
    4. חזור על הקרע בצד שמאל בעקבות צעד 4.2.3.
  3. למדוד את זרימת הדם ב השתלים וריד.
    1. למלא את חלל פעירת בצד ימין עם תמיסת מלח כדי לאפשר את השידור של גלי קול. לטבול 2-מ מ perivascular זרימה בדיקה (מחובר מד נפח זרימה) בתמיסת המלח החלל הפצע ולהגדיר את קצב זרימת אפס.
    2. למקם את החללית זרימה סביב העורק הראשי סימטרית או הגולגולת שתל הווריד. נתוני הרשומה של החללית זרימה עם מערכת רכישת מידע אלקטרוני.
    3. חזור על המדידה זרימה בצד שמאל בעקבות צעד 4.3.2.
    4. לחשב את pulsatility המבוססת על קצב הזרימה סיסטולי שיא, קצב הזרימה הדיאסטולי מינימלי, קצב הזרימה מרושע. גם לחשב למינריות מאמץ גזירה, מבוסס על קצב זרימת קוטר לומן (נמדד עם אולטרסאונד transcutaneous).
  4. להשרות וקטור פתרון לתוך וריד את השתלים
    הערה: מיקרוסקופ כירורגי (16 X) משמש לצורך ניקב, אינפוזיה, והתיקון של העורק הראשי.
    1. יש עוזר להסיר זכוכיות מגדלת כירורגי של המנתח, יושינו, מיקרוסקופ כירורגי. יש לי את המנתח לעטוף מגבת נקיה על המיקרוסקופ. המגבת סטרילי מאפשר למנתח לתמרן המיקרוסקופ תוך שמירה על עקרות.
    2. יש המסייע הזרקת הפרין (150 IU/ק ג) הקטטר הרביעי, לשטוף עם מי מלח.
    3. השתמש נהג מחט גדולה כדי לכופף את המחט 21 G כ 80 ° מעל השיקוע (לא לכופף את השיקוע; איור 2A).
    4. תהדק את עורק תרדמני בקצה אחד של השתל וריד עם מיני-מלחציים, הצבת את המלחציים הגולגולת הראשונה כדי לאפשר את העורק מילוי, ולאחר מכן ממקם את הקליפ סימטרית. במקום הסרטון סימטרית כ 10 מ מ סימטרית כדי ההשקה, להשאיר קצת מקום arteriotomy.
    5. לשים שני קשרים משי סביב העורק סימטרית רק השתל, לקשור קשר עם יד אחת על כל אחד - ללא הידוק אותם.
    6. לנקב בעורק סימטרית כדי השתל עם מחט 21 G כפוף רק הגולגולת של הסרטון וסקולרית סימטרית. יש להיזהר לא לנקב את הקירות אחורי או צדדי. תוחבים את המחט לתוך לומן בחזרה וושוב פעמיים כדי להבטיח כי לומן הוא ברור, אז בזהירות לשלוף את המחט.
      הערות: ניקוב לעורק הצוואר נפוץ יכול להיות שנעזר לתפוס את adventitia עורקי עם מלקחיים בסדר ו בעדינות הרמת קיר חזית בעת הכנסת את קצה המחט סימטרית רק עד לנקודה מעלית (איור 2א). זה מפחית את הסיכון לפגיעה הקיר האחורי עם המחט.
    7. עם כמה תחבושות גזה פרש, ליצור קן כדי למקם את המזרק משמש חליטות. המקום הזה הקן גזה סימטרית באתר כירורגית.
    8. לשים 24 G הרביעי-צנתר על המזרק עם DMEM בלבד, והדק את הצנתר על המזרק מספיק כדי למנוע דליפה (המזרק יוסר מאוחר יותר בניתוח זה) לכופף את הצנתר ~ 4 מ מ מהקצה כך העיקול מחזיק כ 75° לאחר הפצתו.
    9. להכניס את צנתר הרביעי arteriotomy תרדמני נפוץ עד לנקודה בנד ולשטוף לומן שתל הווריד פעמיים עם 0.5 מ של DMEM. עבור כל חזרה, למלא את שתל הווריד DMEM. ואז להסיר את DMEM של השתל בלחיצה קלות עם האצבע בכפפה בקצה הגולגולת של השתל. החלק בזהירות את האצבע לקראת סוף השתל לחשוף את תוכן luminal ויה arteriotomy סימטרית.
    10. הסר את המזרק DMEM הקטטר, עוזב את הצנתר בתוך הכלי. לחבר את המזרק המכיל את הפתרון וירוס, מוודאים כי אין אוויר מזין את הקטטר. הזז שהמשי באופן רופף אניע קושר את העורק עד הם סביב קצה הקטטר, אך אין לחזק אותם.
    11. להשרות 0.03 נקודות מ של וירוס פתרון כדי לדחוף את DMEM שנותרו מחוץ הצנתר. הסר כל נוזל לומן שתל הווריד עם האצבע, הקשה בעדינות מתוך הגולגולת סימטרית.
    12. הדק את שני קשרים סביב קצה עורק, קטטר לאטום לומן. להשרות את הפתרון וירוס עד הווריד נפוחה. הנח בעדינות את המזרק על הקן של גזה.
      הערה: היא חיונית, כי שתל הווריד מתרחבת לקליבר קדם התמרה חושית שלו ונשאר מופרז במהלך החדרת וירוס. אם לא, כמות העברה גנטית תופחת באופן משמעותי.
    13. להשאיר את הפתרון המכיל וירוס לומן שתל הווריד במשך 20 דקות ולאחר מכן להחליף את המזרק המכיל וירוס המצורפת הקטטר עם מזרק ריק. בעדינות מחוק לגמרי הפתרון המכיל וירוס של השתל עד מכווץ כלי הקיבול. הסר את המזרק, עוזב את הצנתר במקום. לחתוך ולא להתיר התפרים משי ולסגת הקטטר מכלי הקיבול. הסר את הצנתר העורק הראשי בקפידה כדי למנוע נזק של אנדותל.
    14. בעזרת מיקרוסקופ כירורגי, סגור את arteriotomy 7-0 בתפר פוליפרופילן באמצעות תבנית X (איור 2B).
      1. לתפוס את התפר עם בעל מחט, הזן את כלי הקיבול בפינה הימנית התחתונה של arteriotomy ולצאת את כלי הקיבול בפינה השמאלית התחתונה. לחצות את הפתיחה מחוץ הספינה ולהפוך מעבר־ההרים השני מקצה עליון ימני ל השמאלית העליונה.
      2. לפני הידוק את התפר, בקצרה לשחרר את הקליפ וסקולרית הגולגולת ריקון אויר ווירוסים שיורית שתל הווריד, העורק. דם יזרום החוצה arteriotomy המלחציים ישוחרר.
      3. סגור arteriotomy על ידי משיכה עדינה את התפר מסתיים, לקשור אותם יחד עם 2 קשרים כיכר.
        הערה: מושך את התפר חזק מדי יגרום אגידה של הרקמה אשר להפריע את זרימת, להגביר את הסיכון פקקת, שעלולים להציג משתנים בלתי מבוקרת.
    15. שחרר את הקליפ כלי הדם לגולגולת, ולאחר מכן את הקליפ סימטרית. לעצור כל הדימום באמצעות גזה כדי להחיל לחץ קל
    16. באמת להזריק הבופרנורפין (SQ, 0.02 נקודות מ"ג/ק"ג) כדי לספק שיכוך כאבים לאחר הניתוח עד התיקון פנטניל סיפקה פנטניל כאבים פלזמה רמות.
      הערה: זריקה הבופרנורפין נוספים (SQ, 0.02 נקודות מ"ג/ק"ג) עשוי להיות נחוץ 6 שעות לאחר הזריקה הראשונה כדי לשמור על שיכוך כאבים עד פנטניל פלזמה מגיע ריכוז טיפולית.
    17. חזור על פרוטוקול אינפוזיה וירוס בצד שמאל, 4.4.5-4.4.15 השלבים הבאים.
  5. סגירת הפצע
    1. סגור את רקמת השומן התת עורית בתפר PGA 5-0, באמצעות תבנית רציפה. סגור את העור 3-0 בתפר PGA באמצעות תבנית intradermal. לקבור את הקשרים בשני הקצוות.
  6. ההחלמה לאחר הניתוח, ניקוי, טיפול
    1. בצע את שלב 2.4.

5. הקציר ניתוח (Terminal)

  1. להכין כלי הנגינה באתר כירורגית.
    1. בצע את השלבים 2.1.1-2.1.3 בניתוח שתל הווריד.
    2. תן המסייע פתיחת, גילוח ורחיצה כירורגית מקום על השולחן כלי (או תעביר את המנתח): אחד מ 20-ל מזרק אחד 21G, תפר משי 3-0, ומחט בדיקה זרימת דם סטרילי.
    3. בצע שלבים 2.1.5-2.1.6, 2.1.8 תגובה על הווריד שתל.
  2. בידוד נפוצים עורק, וריד שתלי
    1. לחתוך את העור electrocautery לאורך הקו האמצעי בין החריץ בחזה ובצלעות הלסת התחתונה (כ 7-9 ס מ אורך), תהדק את העור בצוואר של הארנב המגבות עם מגבת מלחציים.
    2. בסוף סימטרית, לבצע חתך לרוחב קצר דרך fascia עם electrocautery. בלשון בוטה לנתח תחת fascia לאורך הקו האמצעי כולו. לחתוך fascia גזור לאורך הקו האמצעי עם electrocautery.
    3. להתחיל בצד ימין. לנתח בין השריר sternohyoid המכסים את קנה הנשימה והשרירים בצורת V sternocephalic לחשוף את השתל הנפוץ עורק הצוואר ואת הווריד.
    4. לנתח את שתל הווריד הנכון ואת עורק תרדמני חינם מן הרקמות הסובבות. השתמש הסיליקון כירורגי לולאות עבור משיכת את העורק הראשי, של שתל הווריד בזמן.
    5. חזור על הקרע בצד שמאל בעקבות צעדים 5.2.3-5.2.4.
  3. לבצע מדידות הזרימה בעקבות צעדים 4.3.1-4.3.3 בניתוח העברת גנים.
  4. קציר שתלי הווריד
    1. בתפר משי 3-0, מאתרים ומפסיקים את. עורק תרדמני הגולגולת אל השתל. ואז מאתרים ומפסיקים בעורק סימטרית כדי השתל.
    2. לסלק את שתל הווריד הנכון על-ידי חלוקת את העורק הראשי הסמוך כל אחד ligations בין ההשקה סמוכים. הסר את שתל הווריד את הארנב ותורידי לומן עם תמיסת מלח.
    3. לחתוך את העורק הראשי ואת חיבור משני קצוות שתל הווריד. לקצץ משם רקמת adventitial עודף שתל הווריד וחותכים השתל למקטעים לפי הצורך עבור ניתוחים endpoint שונה.
    4. לקצור את שתל הווריד השמאלי חוזרת שלבים 5.4.1-5.4.3.
  5. להזריק 1 מ"ל של פניטואין/פנטוברביטל הרביעי להרדים את הארנב.
  6. תשליך בפרוטוקולים הבאים פסולת כלשהי המתאימה עבור סילוק פסולת חומרים מסוכנים, שרפ.

תוצאות

יש לאמת את מיומנות טכנית של מפעיל חדש לפני האופרטור באפשרותך להשתמש בשיטה זו כדי ליצור נתוני הניסוי. אבן הדרך הראשונה זה מפעיל חדש חייב להשיג הוא patency שתל הווריד עקבי אחרי הניתוח הראשוני הרכבה וריד והן את הניתוח מושהית-התמרה חושית עוקבות. Patency מעל 90% לאחר כל אחד הניתוחים רצ...

Discussion

השלבים הקריטיים של פרוטוקול זה כוללים את הניהול של הרדמה, נוגד קרישה, ניתוח מניפולציה של הווריד של עורק/הושתל, בגרימת מדידות של הווריד של המושתל. ניהול נכון של הרדמה היא קריטית במודל זה מרובים הישרדות ניתוח הכולל שתי פעולות ארוכות יחסית (בדרך כלל 3-3.5 h על הווריד הדו-צדדיים הרכבה ו- 1.5-2.5 h עבור ...

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Disposables
3mL syringe with 24G needleBecton Dickinson3095712x for vein graft surgery; 2x for gene transfer  surgery
1 mL syringe with 27G needleBecton Dickinson3096232x for vein graft surgery, 5x for gene transfer surgery
19G needleBecton Dickinson305187Gene transfer surgery
20 mL syringe, luer lockNipro Medical CorpJD+20L
Catheters, 24Ga x 3/4”Terumo Medical ProductsSROX2419V
21G needleBecton Dickinson305165Gene transfer surgery and for 20 mL syringe of saline
Gauze 4” x 4”Dynarex3242~10-15 per surgery
3-0 silk sutureCovidien Ltd.S-244
5-0 silk sutureCovidien Ltd.S-182
7-0 polypropylene sutureCP Medical8703PVein graft surgery
7-0 polypropylene sutureCP Medical8648PGene transfer surgery
5-0 polyglycolic acid sutureCP Medical421A
3-0 polyglycolic acid sutureCP Medical398A
Alcohol swabsCovidien Ltd.6818For the placement of I.V. line
Catheter plugVetoquinol411498
Ketamine HCl, 100 mg/mLVedco Inc.5098916106
Xylazine, 100 mg/mLAkorn Inc.4821
Lidocaine, 20 mg/mLPfizer409427702
Marcaine 0.5%Pfizer409161050
Beuthanasia D-SpecialIntervet Inc.NDC 00061047305Harvest surgery only
Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mLPatterson Veterinary12496075705
Saline IV bag, 0.9% sodium chlorideBaxter2B1309
Heparin  (5000 U/mL)APP PharmaceuticalsNDC 63323-047-10
Papaverine (3.5 mg/ml)American Reagent Inc.NDC 0517-4002-25Diluted from 30mg/mL stock; Use 1 mL maximum
Fentanyl patch, 25 mcg/hApotex Corp.NDC 60505-7006-2
IsofluraneMultiple vendorsCatalog number not available
 Viral vectorGene transfer surgery only
Surgical Instruments
Metzenbaum needle holder 7" straightRobozRS-7900
Operating scissors 6.5" straight blunt/bluntRobozRS-6828
Needle holder /w suture scissorsMiltex8-14-IMC
Castroviejo scissorsRobozRS-5658
Castroviejo needle holder, 5.75" straight with lockRobozRS-6412
Stevens scissors 4.25" curved blunt/bluntRobozRS-5943
Alm retractor 4" 4X4 5mm blunt prongsRobozRS-65142x
Backhaus towel clamp 3.5"Roboz4x
Micro clip setting forceps 4.75"RobozRS-6496
Micro vascular clips, 11 mmRoboz
Surg-I-LoopScanlan International1001-81M5 cm length
Bonaccolto forceps, 4” (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip widthRobozRS-5210
Dumont #3 forceps Inox tip size .17 × .10 mmRobozRS-5042
Graefe forceps, 4” (10 cm) long serrated straight, 0.8 mm tipRobozRS-5280
Halstead mosquito forceps,  5" straight, 1.3 mm tipsRobozRS-71102x
Halstead mosquito forceps,  5" curved, 1.3mm tipsRobozRS-7111
Jacobson mosquito forceps 5" curved extra delicate, 0.9 mm tipsRobozRS-7117
Kantrowitz forceps, 7.25" 90 degree delicate, 1.7 mm tipsRobozRS-7305
Tissue forceps 5", 1X2 teeth, 2 mm tip widthRobozRS-8162
Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip widthFine Science Tools11092-122x
Adson forceps, 12 cm, serrated, straightFine Science Tools11006-12
Veterinary electrosurgery handpiece and electrodeMACAN ManufacturingHPAC-1; R-F11
Surgical Suite Equipment
Circulating warm water blanket and pumpMultiple vendorsCatalog number not available
Bair hugger warming unit3MModel 505
IV infusion pumpHeskaVet IV 2.2
Isoflurane vaporizer and scavengerMultiple vendorsCatalog number not available
Veterinary multi-parameter monitorSurgivetSurgivet Advisor
Veterinary electrosurgery unitMACAN ManufacturingMV-9
Surgical microscopeD.F. VasconcellosM90025X magnification for vein graft surgery; 16X magnification for gene transfer surgery

References

  1. Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges. Circ Res. 118, 531-534 (2016).
  2. Fowkes, F. G., et al. Comparison of global estimates of prevalence and risk factors for peripheral artery disease in 2000 and 2010: a systematic review and analysis. Lancet. 382, 1329-1340 (2013).
  3. Mohr, F. W., et al. Coronary artery bypass graft surgery versus percutaneous coronary intervention in patients with three-vessel disease and left main coronary disease: 5-year follow-up of the randomised, clinical SYNTAX trial. Lancet. 381, 629-638 (2013).
  4. de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes. Nat Rev Cardiol. 13 (8), 451-470 (2016).
  5. Harskamp, R. E., Lopes, R. D., Baisden, C. E., de Winter, R. J., Alexander, J. H. Saphenous vein graft failure after coronary artery bypass surgery: pathophysiology, management, and future directions. Ann Surg. 257, 824-833 (2013).
  6. Sabik, J. F. Understanding saphenous vein graft patency. Circulation. 124 (3), 273-275 (2011).
  7. Owens, C. D., Ho, K. J., Conte, M. S. Lower extremity vein graft failure: a translational approach. Vasc Med. 13, 63-74 (2008).
  8. Robertson, K. E., McDonald, R. A., Oldroyd, K. G., Nicklin, S. A., Baker, A. H. Prevention of coronary in-stent restenosis and vein graft failure: does vascular gene therapy have a role. Pharmacol Ther. 136, 23-34 (2012).
  9. Yla-Herttuala, S., Baker, A. H. Cardiovascular Gene Therapy: Past, Present, and Future. Mol Ther. 25, 1095-1106 (2017).
  10. Schwartz, L. B., et al. Adenoviral-mediated gene transfer of a constitutively active form of the retinoblastoma gene product attenuates neointimal thickening in experimental vein grafts. J Vasc Surg. (5), 874-881 (1999).
  11. Eefting, D., et al. Local lentiviral short hairpin RNA silencing of CCR2 inhibits vein graft thickening in hypercholesterolemic apolipoprotein E3-Leiden mice. J Vasc Surg. 50, 152-160 (2009).
  12. Handa, M., et al. Adventitial delivery of platelet-derived endothelial cell growth factor gene prevented intimal hyperplasia of vein graft. J Vasc Surg. 48 (6), 1566-1574 (2008).
  13. Kloppenburg, G. T., Grauls, G. E., Bruggeman, C. A., Stassen, F. R. Adenoviral activin A expression prevents vein graft intimal hyperplasia in a rat model. Interact Cardiov Th. 8, 31-34 (2009).
  14. Eefting, D., et al. A novel urokinase receptor-targeted inhibitor for plasmin and matrix metalloproteinases suppresses vein graft disease. Cardiovasc Res. 88, 367-375 (2010).
  15. Eichstaedt, H. C., et al. Gene transfer of COX-1 improves lumen size and blood flow in carotid bypass grafts. J Surg Res. 161, 162-167 (2010).
  16. Kritz, A. B., et al. In vivo modulation of Nogo-B attenuates neointima formation. Mol Ther. 16 (11), 1798-1804 (2008).
  17. Peroulis, M., et al. The role of ex-vivo gene therapy of vein grafts with Egr-1 decoy in the suppression of intimal hyperplasia. Eur J Vasc Endovasc. 40, 216-223 (2010).
  18. Kochanek, S., et al. A new adenoviral vector: Replacement of all viral coding sequences with 28 kb of DNA independently expressing both full-length dystrophin and b-galactosidase. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 5731-5736 (1996).
  19. Parks, R. J., et al. A helper-dependent adenovirus vector system: Removal of helper virus by Cre-mediated excision of the viral packaging signal. P Natl Acad Sci USA. 93, 13565-13570 (1996).
  20. Chen, H. -. H., et al. Persistence in muscle of an adenoviral vector that lacks all viral genes. P Natl Acad Sci USA. 94, 1645-1650 (1997).
  21. Wen, S., Graf, S., Massey, P. G., Dichek, D. A. Improved vascular gene transfer with a helper-dependent adenoviral vector. Circulation. 110, 1484-1491 (2004).
  22. Du, L., Zhang, J., Clowes, A. W., Dichek, D. A. Efficient gene transfer and durable transgene expression in grafted rabbit veins. Hum Gene Ther. 26, 47-58 (2015).
  23. Channon, K. M., et al. Efficient adenoviral gene transfer to early venous bypass grafts: comparison with native vessels. Cardiovasc Res. 35, 505-513 (1997).
  24. Flynn, R., et al. Expression of apolipoprotein A-I in rabbit carotid endothelium protects against atherosclerosis. Mol Ther. 19, 1833-1841 (2011).
  25. George, S. J., et al. Sustained Reduction of Vein Graft Neointima Formation by Ex Vivo TIMP-3 Gene Therapy. Circulation. 124, 135-142 (2011).
  26. Chiu-Pinheiro, C. K., et al. Gene transfer to coronary artery bypass conduits. Ann Thorac Surg. 74, 1161-1166 (2002).
  27. Byrom, M. J., Bannon, P. G., White, G. H., Ng, M. K. Animal models for the assessment of novel vascular conduits. J Vasc Surg. 52, 176-195 (2010).
  28. Ribichini, F., et al. Effects of oral prednisone after stenting in a rabbit model of established atherosclerosis. J Am Coll Cardiol. 50, 176-185 (2007).
  29. Langheinrich, A. C., et al. Quantification of in-stent restenosis parameters in rabbits by Micro-CT. Rofo. 177 (4), 501-506 (2005).
  30. Wacker, B. K., Dronadula, N., Zhang, J., Dichek, D. A. Local Vascular Gene Therapy With Apolipoprotein A-I to Promote Regression of Atherosclerosis. Arterioscler Thromb. 37, 316-327 (2017).
  31. Zwolak, R. M., Kirkman, T. R., Clowes, A. W. Atherosclerosis in rabbit vein grafts. Arteriosclerosis. 9, 374-379 (1989).
  32. Qiang, B., et al. Statin therapy prevents expansive remodeling in venous bypass grafts. Atherosclerosis. 223, 106-113 (2012).
  33. Casa, L. D. C., Ku, D. N. Thrombus Formation at High Shear Rates. Annu Rev Biomed Eng. 19, 415-433 (2017).
  34. Chen, C., Coyle, K. A., Hughes, J. D., Lumsden, A. B., Ku, D. N. Reduced blood flow accelerates intimal hyperplasia in endarterectomized canine arteries. Cardiovasc Surg. 5 (2), 161-168 (1997).
  35. Binns, R. L., Ku, D. N., Stewart, M. T., Ansley, J. P., Coyle, K. A. Optimal graft diameter: effect of wall shear stress on vascular healing. J Vasc Surg. 10, 326-337 (1989).
  36. Oka, K., Mullins, C. E., Kushwaha, R. S., Leen, A. M., Chan, L. Gene therapy for rhesus monkeys heterozygous for LDL receptor deficiency by balloon catheter hepatic delivery of helper-dependent adenoviral vector. Gene Ther. 22, 87-95 (2015).
  37. Miyake, T., et al. Prevention of neointimal formation after angioplasty using nuclear factor-kappaB decoy oligodeoxynucleotide-coated balloon catheter in rabbit model. Circ Cardiovasc Interv. 7, 787-796 (2014).
  38. Chorny, M., et al. Site-specific gene delivery to stented arteries using magnetically guided zinc oleate-based nanoparticles loaded with adenoviral vectors. FASEB J. 27, 2198-2206 (2013).
  39. Hoshino, K., et al. Three catheter-based strategies for cardiac delivery of therapeutic gelatin microspheres. Gene Ther. 13, 1320-1327 (2006).
  40. Nouri, F., Sadeghpour, H., Heidari, R., Dehshahri, A. Preparation, characterization, and transfection efficiency of low molecular weight polyethylenimine-based nanoparticles for delivery of the plasmid encoding CD200 gene. Int J Nanomed. , 5557-5569 (2017).
  41. Jia, S. F., et al. Eradication of osteosarcoma lung metastases following intranasal interleukin-12 gene therapy using a nonviral polyethylenimine vector. Cancer Gene Ther. , 260-266 (2002).
  42. Morishita, R., et al. Intimal hyperplasia after vascular injury is inhibited by antisense cdk 2 kinase oligonucleotides. J Clin Invest. 93, 1458-1464 (1994).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

139translationalinterposition

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved